神經肽-2受體(y-2r)激動劑及其用途的製作方法

2023-10-05 00:35:34

專利名稱：神經肽-2受體(y-2r)激動劑及其用途的製作方法
神經肽-2受體(Y-2R)激動劑及其用途本發明提供PYY3_36的截短類似物。所述類似物是神經肽-2受體的激動劑並且可用於治療代謝性疾病和病症，諸如例如肥胖症，2型糖尿病，代謝症候群，胰島素抗性和異常脂肪血症。本發明特別地涉及式(I)的神經肽-2受體激動劑Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12-R13-R14-NH2 (I),其中X是G-氨基甲基-聯苯-3-基)_乙酸(Cba)，(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)_乙酸(以 )，3-(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4!1-喹唑啉-3-基)-丙酸(HomPqa)，(6_[1，4] 二氮雜環庚烷-1-基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸(Dqa)，(6_氧代_2_哌嗪基-1， 6-二氫嘌呤-7-基)-乙酸(Pdp)，(2-哌嗪-1-基-嘌呤-7-基)-乙酸(Ppa)，(6-氨基-2-哌嗪-1-基-9H-嘌呤-8-基)-乙酸(Appa)，((1R，4S) -6-2-氮雜-二環[2. 2. 1] 庚-5-基-4-氧代-4H-喹唑啉)-乙酸(Bqa)或(1_氧代_7_哌嗪基-IH-異喹啉-2-基)_乙酸(Pipa)；Y是H或醯基結構部分；R1 是 lie, Ala, (D) lie, N-甲基 lie, Aib, 1-lAic，2_2Aic，Ach 或 Acp ；R2 是 Lys, Ala, (D) Lys, N-甲基 lys, Nle 或(Lys-Gly)；R3 是 Arg，Ala，(D) Arg, N-甲基 Arg，Phe，3，4，5_ 三氟 Phe 或 2，3，4，5，6_ 五氟 Phe ；R4 是 His，Ala，(D) His，N-甲基 His，4-MeOApc，3_Pal 或 4_Pal ；&是171~，八1&，(D)Tyr,N-甲基 Tyr，Trp，Tic,Bip，Dip, (l)Nal, (2)Nal, 3,4, 5-H 氟 Phe 或 2，3，4，5，6-五氟 Phe ；R6 是 Leu, Ala, (D) Leu 或 N-甲基 Leu ；R7 是 Asn, Ala 或(D) Asn ；Ii8 是 Leu 或 iTrp;R9 是 Val，Ala，(D) Val 或 N-甲基 Val ；R10 是 Thr，Ala 或 N-甲基 Thr ；R11 是 Arg, (D) Arg 或 N-甲基 Arg ；R12 是 Gln 或 Ala;R13 是 Arg, (D) Arg 或 N-甲基 Arg,禾口R14 是 Tyr，(D) Tyr 或 N-甲基 Tyr，修飾的 _Tyr，Phe，修飾的 _Phe，(l)Nal，(2)Nal, Cha, C- α -甲基 Tyr,或 Trp,或其藥用鹽。代謝性疾病和病症是發達國家已經廣泛認識到的嚴重健康問題，其在美國已經達到流行病水平。例如，根據最近關於肥胖症的研究，超過50%的美國人口被認為是超重，超過25%在臨床上被診斷為肥胖症並且有相當大的風險發展為心臟病、2型糖尿病和某些癌症。這些流行病成為保健系統的重大負擔，因為每年僅在美國就有超過700億美元的計劃肥胖症治療費用。治療肥胖症的策略包括減少食物攝取並且增加能量消耗。
神經肽Y(NPY)，是一種36個胺基酸肽的神經遞質，是已經顯示存在於外周和中樞神經系統兩者中的神經遞質/神經激素的胰腺多肽類別的成員。NPY是已知的最有效的開胃劑之一併且顯示在調節包括人的動物的食物攝取上具有重要作用。已經克隆了 6種神經肽Y受體(肥￥)，￥1-、￥2-、￥3-、￥4、和￥5-和丫6-亞型，其屬於視紫紅質樣G蛋白偶聯的7-跨膜受體(GPCR)。NPYY2受體(Y2R)是一種381個胺基酸的受體，其通過Gi抑制腺苷酸環化酶的激活，同時顯示與其它已知NPY受體的低同源性。在大鼠和人Y2受體之間存在高度保守性，具有98%的胺基酸同一性。Y2R受體廣泛分布在齧齒動物和人的中樞神經系統中。在下丘腦中，Y2mRNA定位在弓狀核，視前核和背內側核中。在人腦中，Y2R是主要的Y受體亞型。在弓狀核中，超過 80%的NPY神經元共表達Y2R mRNA。Y2-選擇性激動劑的應用顯示減少了體外來自下丘腦切片的NPY的釋放，而Y2非肽拮抗劑BIIE0246增加NPY釋放。這些發現支持Y2R作為突觸前的自身受體的作用，該自身受體調節NPY釋放並且因此可以涉及進食的調節。(Kaga T 等，Peptides (Ii ) 22 :501-506(2001)和 King PJ 等，Eur JPharmacol (歐洲藥理學雜誌)396 :Rl-3(2000)) ο肽YY 3-36 (PYY 3-36)是34個胺基酸的線性肽，其具有神經肽Y2(NPY2R)激動劑活性。已經顯示弓形核內(IC)或腹膜內(IP)注射PYY M6減少了大鼠中的進食，並且作為長期治療減少了體重增加。靜脈內(IV)輸注(0. 8pmol/kg/min)PYY 3_3690分鐘，在對小時內減少了肥胖症和正常人受試者的食物攝取。這些發現顯示PYY系統可以是肥胖症治療的治療靶標(Batterham RL 等，Nature(自然)418 :650-654(2002) ；Batterham RL 等，New Engl J Med(新英格蘭醫藥雜誌)349 :941-9480003))。此外，PYY 的 Cys2-(D)Cys27-環化形式，其中殘基5-M被5-8個碳長度的亞甲基鏈替代，顯示小腸PYY受體的激活，如通過大鼠空腸的電壓鉗黏膜製備物的電流減少所證實的。(Krstenansky，等.在P印tides， Proceedings of theTwelfth American Peptide Symposium(肽,第十二屆美國肽專題討論會)中，J.Smith 和 J. Rivier 編輯，ESC0M.萊頓，第 136-137 頁)。此外，最近的數據顯示Roux-enY胃旁路患者具有PYY水平的早期和過大的增加， 其可能部分負責為早期血糖控制和長期體重維持，說明這種肽在代謝性疾病的發病機制中的重要性。PYY的其它已知作用包括減少的胃部排空和延遲的胃腸通過，其負責改善的餐後血糖控制。高血糖症的指標如HbAic和果糖胺在2型糖尿病動物模型中在外周施用PYYm6後顯示劑量依賴性的減少。因此，這些結果顯示ΡΥΥ3_36或藥用相關激動劑可以提供針對血糖和體重控制的長期治療方法(Komer等，J Clin EndocrinolMetabol (臨床內分泌代謝雜誌)90:359-365(2005) ；Chan JL 等，肥胖症(肥胖症)14 194-198 (2006)； Stratis C 等，Obes Surg (肥胖症外科)16 :752-758 Q006) ；Borg CM 等，Br J Surg (英國外科學雜誌)93 :210-215(2006)；和Pittner RA等，Int J Obes (國際肥胖症雜誌)28 963-971(2004))ο然而需要新的改造的PYY類似物，其具有低分子量，同時具有相同或更好的針對 YU Y4和TO受體的效力和選擇性、藥物代謝動力學性質和藥理學性質。本發明的化合物優選用於治療代謝性疾病和病症。此類代謝性疾病和病症包括例如肥胖症，糖尿病，優選2型糖尿病，代謝症候群(也稱為X症候群)，胰島素抗性，異常脂肪血症，空腹血糖受損(impaired fastingglucose)和糖耐量降低(impaired glucosetolerance)。優選式⑴的神經肽-2受體激動劑，其中X是G-氨基甲基-聯苯-3-基)_乙酸(Cba)，(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)_乙酸(以 )，3-(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4!1-喹唑啉-3-基)-丙酸(HomPqa)，(6_[1，4] 二氮雜環庚烷-1-基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸(Dqa)，(6_氧代_2_哌嗪基-1， 6-二氫嘌呤-7-基)-乙酸(Pdp)，(2-哌嗪-1-基-嘌呤-7-基)-乙酸(Ppa)，(6-氨基-2-哌嗪-1-基-9H-嘌呤-8-基)-乙酸(Appa)，((1R，4S) -6-2-氮雜-二環[2. 2. 1] 庚-5-基-4-氧代-4H-喹唑啉)-乙酸(Bqa)或(1_氧代_7_哌嗪基-IH-異喹啉-2-基)_乙酸(Pipa)；和Y是醯基結構部分。此外優選具有式(II)的神經肽-2受體激動劑Y-Ile-Lys-X-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln- (NMe) Arg-Tyr-NH2(II)其中X是G-氨基甲基-聯苯-3-基)_乙酸(Cba)，(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)_乙酸(以 )，3-(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4!1-喹唑啉-3-基)-丙酸(HomPqa)，(6_[1，4] 二氮雜環庚烷-1-基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-乙酸(Dqa)，(6_氧代_2_哌嗪基-1， 6-二氫嘌呤-7-基)-乙酸(Pdp)，(2-哌嗪-1-基-嘌呤-7-基)-乙酸(Ppa)，(6-氨基-2-哌嗪-1-基-9H-嘌呤-8-基)-乙酸(Appa)，((1R，4S) -6-2-氮雜-二環[2. 2. 1] 庚-5-基-4-氧代-4H-喹唑啉)-乙酸(Bqa)或(1_氧代_7_哌嗪基-IH-異喹啉-2-基)_乙酸(Pipa)；和Y是醯基結構部分，或其藥用鹽。特別優選根據權利要求1所述的神經肽-2受體激動劑，選自Ac-Ile-Lys-Cba-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-Cip-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln- (NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-HomPqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln- (NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-Dqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln- (NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-Pdp-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-Ppa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln- (NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-11 e-Lys-Appa-Arg-Hi s-Tyr-LeU-Asn-Trρ-VaI-Thr-Arg-GIn- (NMe) Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-Bqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln- (NMe)Arg-Tyr-NH2 ；禾口Ac-Ile-Lys-Pipa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe) Arg-Tyr-NH20本發明還涉及一種藥物組合物，其包含治療有效量的如上所定義的神經肽-2受體激動劑或其鹽和藥用載體。本發明的化合物是有利的，因為例如它們是PYYm6的截短形式。例如，該較短的肽不僅促進化合物的更容易合成和純化，而且改善和減少了製造步驟和費用。此外，本發明的化合物將優選與Y2受體相互作用，並且不與同源的受體如NPY Yl、Y4和TO相互作用。不希望有的激動或拮抗副反應由此被最小化。應當理解，本發明不限於本文所述的本發明的具體實施方案，因為可以進行具體實施方案的改變並且仍落入後附權利要求的範圍內。還應當理解，所用的術語是為了描述具體實施方案的目的而不意欲是限制性的。實際上，本發明的範圍將由後附權利要求確定。儘管與本文所述的那些相似或等價的任何方法、裝置和材料可以用於本發明的實施或測試中，然而現在描述優選的方法、裝置和材料。根據一般約定書寫本文提及的所有的肽序列，其中N端胺基酸在左邊，而C端胺基酸在右邊，除非另外指出。在兩個胺基酸殘基之間的短線指示肽鍵。當胺基酸具有同分異構形式時，其是表示的胺基酸的L形式，除非另外特別指出。為了描述本發明的方便，使用各種胺基酸的常規和非常規縮寫。這些縮寫是本領域技術人員熟悉的，但是為了清楚在下面列出Asp = D =天冬氨酸；Ala = A =丙氨酸；Arg = R =精氨酸；Asn = N =天冬醯胺； Gly = G =甘氨酸；Glu = E =穀氨酸；Gln = Q =穀氨醯胺；His = H =組氨酸；lie = I = 異亮氨酸；Leu = L =亮氨酸；Lys = K =賴氨酸；Met = M =甲硫氨酸；Phe = F =苯丙氨酸；Pro = P =脯氨酸；Ser = S =絲氨酸；Thr = T =蘇氨酸；Trp = W =色氨酸；Tyr = Y =酪氨酸；Cys = C =半胱氨酸；和Val = V =纈氨酸。修飾的-Tyr是酪氨酸上的任何修飾，諸如，例如，甲基-酪氨酸，3_碘代-酪氨酸， 3，5- 二氟-酪氨酸，2，6- 二氟-酪氨酸和2，6- 二甲基-酪氨酸。修飾的-Phe是苯丙氨酸上的任何修飾，諸如，例如，4-甲氧基-苯丙氨酸，4_氨基-苯丙氨酸，4-氟-苯丙氨酸，4-羥基甲基-苯丙氨酸，4-三氟甲基-苯丙氨酸，3-氟-苯丙氨酸，2，3，4，5-五氟-苯丙氨酸和3，4- 二氯苯丙氨酸。還為了方便，將下列縮寫或符號用於表示本發明所使用的結構部分，試劑等。Pqa是氧代_6_哌嗪基_4H_喹唑啉_3_基)-乙酸；Cba是(4-氨基甲基-聯苯-3-基)_乙酸；
Cip是(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)-乙酸;HomPqa是3_羥基_2_ (4-氧代_6_哌嗪基_4H_喹唑啉_3_基)-丙酸，Dqa是(6_[1，4] 二氮雜環庚烷基_4_氧代_4H_喹唑啉_3_基)-乙酸；Pdp是(6-氧代-2-哌嗪-1-基-1，6- 二氫嘌呤_7_基)-乙酸；Ppa是哌嗪-1-基-嘌呤_7_基)-乙酸；Appa是(6_氨基_2_哌嗪基_9H_嘌呤_8_基)-乙酸；
Bqa 是((1R，4S) -6-2-氮雜-雙環[2. 2. 1]庚 _5_ 基 ~4~ 氧代 _4H_ 喹唑啉)-乙酸；Pipa是(1-氧代_7_哌嗪基_1Η_異喹啉_2_基)-乙酸；Fmoc是9-芴甲氧羰基；Mtt是4-甲基三苯甲基；2Pip是2-苯基異丙酯；Pmmc是2，2，5，7，8-五甲基苯並二氫吡喃-6-磺醯基；CH2Cl2 是二氯甲烷；A2O 是乙酐；CH3CN 是乙腈；DMAc是二甲基乙醯胺；DMF是二甲基甲醯胺；DIPEA是N，N- 二異丙基乙胺；TFA是三氟乙酸；IPr3SiH是三異丙基甲矽烷；
HOBT是N-羥基苯並三唑；DIC是N，N，- 二異丙基碳二亞胺；BOP是苯並三唑-1-基氧基-三-(二甲基氨基)磷鐺-六氟磷酸鹽；HBTU是2-(1Η-苯並三唑-1-基)-1，1，3，3_四甲基脲鐺-六氟磷酸鹽；NMP 是 1-甲基 2-吡咯燒酮(Pyrolidenone)；Tmob是2，4，6-三甲氧基苄基；Dod是4，4- 二甲氧基二苯甲基(Dimethoxydityl)，(雙_ (4_甲氧基苯基)-甲基)Trt是三苯甲基；Mts是1，3，5-三甲基苯-2-磺醯基；FAB-MS是快速原子轟擊離子化質譜；和ES-MS是電噴霧離子化質譜。用於本文時，術語「醯基」指經由羰基結合的任選取代的烷基、環烷基、雜環基、芳基或雜芳基，並且包括以下基團，如乙醯基，丙醯基，苯甲醯基，3-吡啶基羰基，2-嗎啉基羰基，4-羥基丁醯基，4-氟代苯甲醯基，2-萘醯基，2-苯基乙醯基，2-甲氧基乙醯基等。用於本文時，術語「烷基」單獨或與其他基團組合，是指支鏈或直鏈的具有1-20個碳原子，優選1-16個碳原子，更優選1-10個碳原子的單價飽和脂族烴基。術語「環烷基」指具有3-10個，優選3-6個碳原子的單價單碳環-或多碳環基團。 此術語進一步示例為諸如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、冰片基、金剛烷基等的基團。在優選的實施方案中，「環烷基」結構部分可以任選地被1個、2個、3個或4個取代基取代，要理解所述取代基依次地是未被進一步取代的，除非另外指明。環烷基結構部分的實例包括，但不限於，任選取代的環丙基，任選取代的環丁基，任選取代的環戊基，任選取代的環戊烯基，任選取代的環己基，任選取代的環己烯，任選取代的環庚基等或本文具體例舉的那些。術語「雜環烷基」表示單環或多環烷基環，其中一個，兩個或三個碳環原子被雜原子諸如N、0或S取代。雜環烷基的實例包括，但不限於，嗎啉基，硫代嗎啉基，哌嗪基，哌啶基，吡咯烷基，四氫吡喃基，四氫呋喃基，1，3-二氧雜環己基(dioxanyl)等。雜環烷基可以是未取代的或取代的，並且當適當時，可以通過它們的碳構架或通過它們的一個或多個雜原子連接，要理解所述取代基依次地是未被進一步取代的。術語「低級烷基」單獨地或與其他基團組合，是指支鏈或直鏈的具有1-9個碳原子，優選1-6個碳原子的烷基。該術語的例子還有諸如甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基， 仲丁基，異丁基，叔丁基，正戊基，3-甲基丁基，正己基，2-乙基丁基等的基團。術語「芳基」指具有至少一個芳環的6-12個碳原子的芳族單碳環或多碳環基團。 此類基團的實例包括，但不限於，苯基，萘基，1,2,3,4-四氫化萘，1,2- 二氫化萘，茚滿基， IH-茚基等。烷基，低級烷基和芳基可以是取代的或未取代的。當取代時，通常有，例如，1至4 個取代基存在，要理解所述取代基依次地是未被進一步取代的，除非另外指明。這些取代基可以任選地與它們連接的烷基、低級烷基或芳基形成環。術語「雜芳基」指5-12個原子的芳族單環或多環基團，其具有至少一個包含選自 N，0，和S的一個、兩個或三個環雜原子的芳環，並且餘下的環原子是C。雜芳基的一個或兩個環碳原子可以被羰基取代。上述的雜芳基可以獨立地用一個，兩個或三個取代基取代，要理解所述取代基依次地是未被進一步取代的，除非另外指明。式(I)化合物可以具有一個或多個不對稱的碳原子並且可以以光學純的對映體， 對映體混合物諸如，例如，外消旋化合物，光學純的非對映異構體，非對映異構體混合物，非對映異構體外消旋化合物或非對映異構體外消旋化合物的混合物的形式存在。旋光形式可以例如通過外消旋化合物的拆分，通過不對稱合成或不對稱色譜法(具有手性吸附劑或洗脫劑的色譜法)來獲得。本發明涵蓋所有這些形式。本發明的代表性化合物可以通過用於在胺基酸之間形成肽鍵的任何已知常規方法容易地合成。這些常規方法包括例如任何溶液相方法，該方法允許胺基酸或其殘基(它的羧基和其它反應性基團被保護)的游離α-氨基基團和另一個胺基酸或其殘基(它的氨基或其它反應性基團被保護)的游離的伯羧基基團之間的縮合。這些用於合成本發明新型化合物的常規方法包括例如任何固相肽合成法。在該方法中，新化合物的合成可以如下進行按照固相法的一般原理，相繼地將所需胺基酸殘基每次一個地結合到生長的肽鏈上。這些方法公開在例如Merrifield，R. B.，J. Amer. Chem. Soc.(美國化學協會會志)85，2149-2154(1963) ；Barany 等，The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology (肽，分析，合成和生物學)，卷 2，Gross，Ε.和Meienhofer，J.，Eds. 學術出版社(Academic Press) 1-284(1980)中，其通過引用結合於此。肽化學合成常見的是用適當的保護基將各種胺基酸結構部分的反應性側鏈基團進行保護，這將防止在該位點的化學反應發生，直至保護基被最終去除。通常還常見的是在該實體在羧基上反應時，將胺基酸或其片段上的α氨基基團進行保護，接著選擇性去除α 氨基保護基，使得可以在該位點進行隨後的反應。儘管關於固相合成法公開了特定的保護基，應當理解，在溶液相合成中每個胺基酸可以被常規用於各個胺基酸的保護基保護。α氨基可以被選自下列各項的適當的保護基保護芳族氨基甲酸乙酯類型的保
9護基，如烯丙氧羰基，苄氧羰基( 和取代的苄氧羰基，如對氯苄氧羰基，對硝基苄氧羰基，對溴苄氧羰基，對聯苯基-異丙氧羰基，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)和對甲氧基苄氧羰基 (Moz)；脂族氨基甲酸乙酯類型的保護基，如叔丁氧羰基(Boc)，二異丙基甲氧羰基和異丙氧羰基。這裡，Fmoc最優選用於α氨基保護。胍基可以通過適當保護基保護，所述保護基諸如硝基，對甲苯磺醯基(Tos)，(Ζ，) 五甲基色烷磺醯基(Riic)，4-甲氧基-2，3，6，-三甲基苯磺醯基(Mtr)，(Rnc)JP (Mtr)最優選用於精氨酸(Arg)。ε -氨基基團可以通過適當保護基保護，諸如2-氯苄氧羰基(2-Cl_Z)，2-溴苄氧羰基Q-Br-Z)-和叔-丁氧羰基(Boc)。對於(Lys)，Boc是最優選的。羥基(OH)可以通過適當的保護基進行保護，諸如苄基(Bzl)，2，6 二氯苄基(2， 6-二 Cl-Bzl)，和叔丁基(t-Bu)，對於(Tyr)，(Ser)和(Thr)，(tBu)是最優選的。Asn和Gln的β-和Y -醯胺基團可以通過適當的保護基進行保護，所述保護基諸如4-甲基三苯甲基(Mtt) ,2,4,6-三甲氧基苄基(Tmob) ,4,4-二甲氧基二苯甲基雙-甲氧基苯基)-甲基(Dod)和三苯甲基(Trt)。對於(Asn)和(Gln)，Trt是最優選的。吲哚基團可以通過選自下列各項的適當的保護基進行保護甲醯基(For)，2，4， 6-三甲苯基-2-磺醯基(Mts)和叔丁氧羰基(Boc)。對於(Trp)，Boc是最優選的。咪唑基可以通過選自下列各項的適當的保護基進行保護節基(Bzl)，-叔丁氧羰基(Boc)，和三苯甲基(Trt)。對於(His)，Trt是最優選的。胺基酸Pqa的合成通過J.Hutchinson等(J. Med. Chem (醫藥化學雜誌).1996，39， 4583-4591)所述進行。Fmoc-Pqa衍生物購自NeoMPS公司(聖地牙哥CA)。{4 『 -[(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)_甲基]-聯苯-3-基}_乙酸 (Fmoc-Cba-OH)可以通過常規手段製備，例如通過進行4-溴苯基乙酸甲酯和4-甲醯苯基硼酸之間的Suzuki偶聯，緊接著將得到的4』 -甲醯聯苯基乙酸甲酯還原性胺化，得到氨基甲基聯苯基乙酸衍生物。典型的Suzuki偶聯的實例參見H. Heitsch等，Synthesis (合成)1996，1325，還原性胺化可以經由E. Baxter等，Organic Reactions (有機反應)2002， 59，1-714綜述的標準方法進行。酯水解和氨基保護為9H-芴_9_基甲氧基羰基衍生物是標準的轉化。典型的步驟描述在中間體製備的描述中。所有的溶劑，異丙醇(iftOH)，二氯甲烷(CH2Cl2), 二甲基甲醯胺(DMF)和N-甲基吡咯啉酮(NMP)購自費雪(Fisher)或Burdick & Jackson並且在不另外處理的條件下使用。三氟乙酸商購自滷烴(Halocarbon)或Fluka並且在不進一步純化下使用。二異丙基碳二亞胺(DIC)和二異丙基乙胺(DIPEA)購自Fluka或阿德裡奇 (Aldrich)並且在不進一步純化下使用。羥基苯並三唑(HOBT)、二甲硫(DMS)和1，2_乙二硫酚(EDT)購自希格瑪化學公司(Sigma Chemical Co.)並且在不進一步純化下使用。保護的胺基酸通常是L構型並且商購自Bachem，或Neosystem。這些試劑的純度在使用前通過薄層色譜法、NMR和熔點證實。二苯甲基胺樹脂(BHA)是獲自Bachem或Advanced Chemtech 的苯乙烯-1%二乙烯基苯(100-200或200-400目)的共聚物。這些樹脂的總氮含量通常為 0. 3-1. 2meq/g。在優選實施方案中，通過Merrifield，(美國化學協會(J. Amer. Chem. Soc. )，85， 2149(1963)) 一般描述的方法，使用固相合成製備肽，但是如先前所述，可以使用本領域已知的其它等同的化學合成。固相合成從肽的C-末端開始，將保護的α-胺基酸偶聯至適當的樹脂。該原材料可以通過將α-氨基-保護的胺基酸通過酯鍵連接到對-苄氧基苄基醇 (Wang)樹脂上，或通過Fmoc-接頭，如對-((R，S) - α - (1-(9Η-芴-9-基)-甲氧基甲醯氨基)-2，4_二甲氧基苄基)-苯氧基乙酸(Rink接頭)之間的醯胺鍵連接到二苯甲基胺(BHA) 樹脂來製備。羥基甲基樹脂的製備是本領域公知的。Fmoc-接頭-BHA樹脂支持體是可商購的並且通常當被合成的所需肽在C-末端具有未取代的醯胺時使用。典型地，使用胺基酸或模擬物的Fmoc保護形式，用2_5當量的胺基酸和適當的偶聯劑，將胺基酸或模擬物偶聯到Fmoc-接頭-BHA樹脂上。在偶聯後，可以洗滌樹脂並在真空下乾燥。胺基酸在樹脂上的負載可以通過對等分試樣的Fmoc-胺基酸樹脂的胺基酸分析、 或通過UV分析測定Fmoc基團來確定。任何未反應的氨基可以通過將樹脂與在二氯甲烷中的乙酐和二異丙基乙胺反應來加帽。在鹼性條件下去除α氨基Fmoc保護基。在DMF中的哌啶，哌嗪或嗎啉 ν/ν)可以用於該目的。優選使用DMF中的40 %哌啶。在去除α氨基保護基之後，將隨後保護的胺基酸以所需順序逐步偶聯以獲得中間體，保護的肽-樹脂。在肽的固相合成中用於胺基酸偶聯的活化試劑是本領域公知的。 例如，用於該合成的適當試劑是苯並三唑-ι-基-氧基-三_( 二甲基氨基)鱗六氟磷酸鹽(BOP)，三吡咯烷基溴化鱗六氟磷酸鹽(卩又81~0卩)，2-(1!1-苯並三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鐺六氟磷酸鹽(HBTU)，和二異丙基碳二亞胺(DIC)。這裡優選HBTU和DIC。可以使用 Barany 和 Merrifield 描述的其它活化劑(在 The Peptides (肽)，卷 2，J. Meienhofer, ed.，學術出版社(Academic Press)，1979，第1-284頁中)。可以將各種試劑如1_羥基苯並三唑(HOBT)，N-羥基琥珀醯亞胺(HOSu)和3，4-二氫_3_羥基-4-氧代-1，2，3-苯並三嗪(HOBT)加入偶聯混合物中，以便最優化合成循環。這裡優選H0BT。為了製備N端乙醯基衍生物，通過用在DMF中的20%乙酐和5%的DIEA處理樹脂結合肽，進行乙醯化作用。對於其它N端醯化作用，使用用DIC/HOBt原位活化的相應的羧酸進行醯化作用30分鐘。用於典型的合成循環的方案如下方案1
將用於所有洗滌和偶聯的溶劑測量至10_20ml/g樹脂的體積。貫穿合成的偶聯反應通過Kaiser Ninhydrin試驗監視，以確定完成的程度(Kaiser等，分析生物化學(Anal. Biochem. )34,595-598(1970))。對於Fmoc-Arg(Pmc)和對於空間位阻的酸與仲胺的偶聯， 觀察到緩慢反應動力學。任何不完全的偶聯反應或者與新鮮製備的活化胺基酸重新偶聯， 或者如上所述通過用乙酐處理肽樹脂來加帽。將完全裝配的肽-樹脂在真空中乾燥數小時。對於大多數化合物，去除封閉基團並從樹脂上裂解肽。例如，每克樹脂用IOOyL 乙二硫酚，100 μ L 二甲硫，300 μ L苯甲醚，和9. 5mL三氟乙酸，在室溫下處理肽樹脂180分鐘。或備選地，每克樹脂用l.OmL三異丙基矽烷和9. 5mL三氟乙酸，在室溫下處理肽樹脂 180分鐘。將樹脂濾去，濾液在猝冷的乙醚中沉澱。將沉澱物離心並潷析乙醚層。將殘餘物用兩個或三個體積的K2O洗滌並再離心。將粗產物在真空下乾燥。優選地，通過在反相 C-18 柱(50x250mm. 300 A, 10-15 μ m)上的高效液相色譜法(HPLC)在 Shimadzu LC-8A 系統上進行粗製肽的純化。將肽在最小體積的0. 1Ac0H/H20或CH3CH/H20中注射到柱中。梯度洗脫通常以2% B緩衝液開始，70分鐘內2% -70% B，(緩衝液A :0. 1 % TFA/H20,緩衝液B 0. 1 % TFA/CH3CN)，流速50ml/min。在220/^80nm下進行UV檢測。分離含有產物的級分並在Siimadzu LC-10AT分析系統上判斷它們的純度，其中使用反相Ace C18柱(4.6x50mm)， 流速為 2ml/min.，10 分鐘內梯度(2-70% )(緩衝液 A 0. 1 % TFA/H20，緩衝液 B 0. TFA/ CH3CN))。將判斷為高純度的級分合併和凍幹。最終產品的純度通過在如上所述的反相柱上的分析HPLC檢查。所有產品的純度據判斷為大約95-99%。所有的終產品還進行快原子轟擊質譜(FAB-MQ或電霧化質譜 (ES-MS)。所有產品產生了預期的在可接受範圍內的母體M+H離子。本發明的化合物可以以藥用鹽的形式提供。優選的鹽的實例是與藥用有機酸以及聚合酸形成的那些和與無機酸形成的鹽，所述有機酸如乙酸、乳酸、馬來酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、琥珀酸、苯甲酸、水楊酸、甲磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸或雙羥萘酸，所述聚合酸如鞣酸或羧甲基纖維素，所述無機酸如氫滷酸(例如，鹽酸)，硫酸，或磷酸等。可以使用本領域技術人員已知的任何獲得藥用鹽的方法。在本發明方法的實施中，將有效量的任何本發明的肽或任何本發明的肽的組合或其藥用鹽經由任何常規的和本領域已知的可接受的方法，單獨或者組合施用。施用可以例如進行一天一次，每三天一次或一周一次。化合物或組合物因此可以通過以下方式施用 口服(例如口腔)，舌下，腸胃外(例如，肌內，靜脈內，或皮下)，直腸(例如，通過栓劑或洗劑)，透皮(例如，皮膚電穿孔)或通過吸入(例如通過氣溶膠)，和以固體、液體或氣體劑型的形式，包括片劑和混懸劑。給藥可以以單一單位劑量形式連續治療或隨意以單一劑量治療進行。治療組合物還可以是與親油性鹽如雙羥萘酸結合的油乳劑或分散體的形式，或者是用於皮下或肌內給藥的生物可降解的緩釋組合物的形式。因此，當症狀的減輕特別需要或可能危急時，實施本發明的方法。備選地，本發明的方法作為連續或預防性治療而有效實施。用於製備由此的組合物的有用藥物載體可以是固體，液體或氣體；因此，組合物可以採取片劑，丸劑，膠囊，栓劑，粉劑，腸溶包衣或其它保護的製劑(例如結合在離子-交換樹脂上或包裝在脂質-蛋白囊泡中)，緩釋製劑，溶液劑，混懸劑，酏劑，氣溶膠等形式。載體可以選自各種油類，包括石油、動物、植物或合成來源的那些，例如花生油，大豆油，礦物油， 芝麻油等。水、鹽水、葡萄糖溶液和二元醇是優選的液體載體，特別是(當與血液等滲時) 用於注射液。例如，用於靜脈內給藥的製劑包括一種或多種活性成分的無菌水溶液，其製備如下將一種或多種固體活性成分溶解在水中，產生水溶液，並使得溶液無菌。適當的藥用賦形劑包括澱粉，纖維素，滑石，葡萄糖，乳糖，滑石，明膠，麥芽，大米，麵粉，白堊，矽石， 硬脂酸鎂，硬脂酸鈉，單硬脂酸甘油酯，氯化鈉，幹脫脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇等。組合物可以加入常規藥物添加劑，如防腐劑，穩定劑，潤溼劑或乳化劑，用於調節滲透壓的鹽，緩衝劑等。適當的藥用載體和它們的製劑在E. W. Martin的Remington' s Pharmaceutical kiences (雷明頓製藥科學)中描述。這些組合物在任何情況下將含有有效量的活性化合物以及適當的載體，以便製備用於適當給藥於接受者的適當劑型。本發明的化合物的劑量取決於許多因素，如例如，給藥方式，受試者的年齡和體重，和待治療的受試者的病症，並且最終將由主治醫生或獸醫所決定。這樣的由主治醫生或獸醫確定的活性化合物的量在本文中和在權利要求中稱為「有效量」。例如，用於鼻內給藥的劑量典型地在約0.001至約0. lmg/kg體重的範圍內。在人中，基於肽含量的優選的皮下劑量是從約0. OOlmg到約IOOmg ；優選地從約0. Img到約15mg。現在通過下列的實施例說明本發明，所述實施例沒有限制性的特徵。
實施例中間體的製備中間體1的製備實施例6中利用的中間體羧甲基-IH-吲哚-5-基)-哌嗪-1-甲酸 9H-芴-9-基甲酯(Fmoc-Cip-OH)如下製備。
將1-(3-甲基-4-硝基-苯基)-哌嗪(19. 40g)和4_ 二甲基氨基吡啶(0. 20g) 在室溫下在200mL四氫呋喃中攪拌以得到溶液。然後一次性加入96. 45g碳酸二叔丁酯 (Boc) 20。將此混合物在室溫下攪拌1小時。此時，將反應混合物蒸發至乾燥，得到黃色固體， 將該固體懸浮在400mL水中15分鐘，然後過濾並用水洗滌該固體。將過濾後殘留的固體真空乾燥得到27. 9g。H1-NMR光譜法指示光譜符合4-(3-甲基-4-硝基-苯基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯。步驟3 :4-[4-硝基-3-((E)-2-吡咯烷-1-基-乙烯基)_苯基]-哌嗪-1-甲酸
叔丁酯的製備
權利要求
1.式⑴的神經肽-2受體激動劑， Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-Ri2-Ri3-Ri4-NH2 (I)， 其中X是(4-氨基甲基-聯苯-3-基)-乙酸(Cba)，(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)-乙酸 (Cip)，3-(4_ 氧代-6-哌嗪-1-基-4H-喹唑啉-3-基)_ 丙酸(HomPqa)，(6_[1，4] 二氮雜環庚烷-1-基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)_乙酸(Dqa)，(6_氧代_2_哌嗪基_1， 6-二氫嘌呤-7-基)-乙酸(Pdp)，(2-哌嗪-1-基-嘌呤-7-基)-乙酸(Ppa)，(6-氨基-2-哌嗪-1-基-9H-嘌呤-8-基)-乙酸(Appa)，((1R，4S) -6-2-氮雜-二環[2. 2. 1] 庚-5-基-4-氧代-4H-喹唑啉)_乙酸(Bqa)或(1_氧代_7_哌嗪基-IH-異喹啉-2-基)_乙酸(Pipa)； Y是H或醯基結構部分；R1 是 lie, Ala, (D) lie, N-甲基 lie, Aib, 1-lAic，2_2Aic，Ach 或 Acp ； R2 是 Lys, Ala, (D) Lys, N-甲基 lys, Nle 或(Lys-Gly)；民是六印，六1&，(D)Arg, N-甲基 Arg，Phe，3，4，5-三氟 Phe 或 2，3，4，5，6-五氟 Phe ； R4 是 His，Ala，(D) His，N-甲基 His，4-MeOApc，3_Pal 或 4_Pal ； R5 是 Tyr，Ala，(D) Tyr，N-甲基 Tyr，Trp，Tic，Bip，Dip，(l)Nal, (2)Nal，3，4，5-三氟 Phe 或 2，3，4，5，6-五氟 Phe ；R6 是 Leu，Ala, (D) Leu 或 N-甲基 Leu ； R7 是 Asn, Ala 或(D)Asn ； R8 是 Leu 或 Trp ；R9 是 Val，Ala，(D) Val 或 N-甲基 Val ； R10 是 Thr，Ala 或 N-甲基 Thr ； R11 是 Arg，(D)Arg 或 N-甲基 Arg; R12 是 Gln 或 Ala ；R13 是 Arg，(D) Arg 或 N-甲基 Arg，且R14 是 Tyr，(D) Tyr 或 N-甲基 Tyr，修飾的-Tyr，Phe，修飾的-Phe，(I)Nal, (2)Nal，Cha, C-α -甲基 Tyr，或 Trp， 或其藥用鹽。
2.根據權利要求1所述的神經肽_2受體激動劑，其中X是(4-氨基甲基-聯苯-3-基)-乙酸(Cba)，(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)-乙酸 (以？)，3-(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4!1-喹唑啉-3-基)-丙酸(HomPqa)，(6_[1，4] 二氮雜環庚烷-1-基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)_乙酸(Dqa)，(6_氧代_2_哌嗪基_1， 6-二氫嘌呤-7-基)-乙酸(Pdp)，(2-哌嗪-1-基-嘌呤-7-基)-乙酸(Ppa)，(6-氨基-2-哌嗪-1-基-9H-嘌呤-8-基)-乙酸(Appa)，((1R，4S) -6-2-氮雜-二環[2. 2. 1] 庚-5-基-4-氧代-4H-喹唑啉)_乙酸(Bqa)或(1_氧代_7_哌嗪基-IH-異喹啉-2-基)_乙酸(Pipa)；且 Y是醯基結構部分。
3.根據權利要求1或2所述的神經肽-2受體激動劑，其具有式(II) Y-Ile-Lys-X-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2(II)其中 X是(4-氨基甲基-聯苯-3-基)-乙酸(Cba)，(5-哌嗪-1-基-吲哚-1-基)-乙酸 (以？)，3-(4-氧代-6-哌嗪-1-基-4!1-喹唑啉-3-基)-丙酸(HomPqa)，(6_[1，4] 二氮雜環庚烷-1-基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)_乙酸(Dqa)，(6_氧代_2_哌嗪基_1， 6-二氫嘌呤-7-基)-乙酸(Pdp)，(2-哌嗪-1-基-嘌呤-7-基)-乙酸(Ppa)，(6-氨基-2-哌嗪-1-基-9H-嘌呤-8-基)-乙酸(Appa)，((1R，4S) -6-2-氮雜-二環[2. 2. 1] 庚-5-基-4-氧代-4H-喹唑啉)_乙酸(Bqa)或(1_氧代_7_哌嗪基-IH-異喹啉-2-基)_乙酸(Pipa)；且 Y是醯基結構部分。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的神經肽-2受體激動劑，其選自 Ac-Ile-Lys-Cba-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ； Ac-Ile-Lys-Cip-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ； Ac-11e-Lys-HomPqa-Arg-Hi s-Tyr-Leu-Asn-Trρ-VaI-Thr-Arg-GIn-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ；Ac-Ile-Lys-Dqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ； Ac-Ile-Lys-Pdp-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ； Ac-Ile-Lys-Ppa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ； Ac-Ile-Lys-Appa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ； Ac-Ile-Lys-Bqa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH2 ；和Ac-Ile-Lys-Pipa-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Trp-Val-Thr-Arg-Gln-(NMe)Arg-Tyr-NH20
5.根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽_2受體激動劑，其用作治療活性物質。
6.根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽-2受體激動劑，其用作用於治療或預防受神經肽_2受體激動劑調節的疾病的治療活性物質。
7.—種藥物組合物，其包含治療有效量的根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽_2 受體激動劑和藥用載體。
8.根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽_2受體激動劑在治療或預防受神經肽_2 受體激動劑調節的疾病中的用途。
9.根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽_2受體激動劑在治療或預防肥胖症、2型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性或異常脂肪血症中的用途。
10.根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽_2受體激動劑在製備用於治療或預防肥胖症、2型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性或異常脂肪血症的藥物中的用途。
11.一種治療或預防肥胖症、2型糖尿病、代謝症候群、胰島素抗性或異常脂肪血症的方法，所述方法包括施用有效量的根據權利要求1-4中任一項所述的神經肽_2受體激動劑。
12.如上文所述的發明。
全文摘要
本發明涉及式(I)Y-R1-R2-X-R3-R4-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12-R13-R14-NH2的神經肽-2受體激動劑及其藥用鹽、衍生物和片段，其中所述取代基是在說明書中公開的那些。這些化合物和包含它們的藥物組合物可用於治療例如肥胖症和糖尿病的疾病。
文檔編號C07K14/575GK102159589SQ200980136349
公開日2011年8月17日 申請日期2009年9月7日 優先權日2008年9月17日
發明者吉斐遜·賴特·蒂勒比, 戴維·C·弗裡, 瓦利德·丹霍, 瓦吉哈·卡恩, 約瑟夫·斯威斯託克, 羅伯特·阿蘭·小古德諾爾 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司