葉綠素鉻及其製備方法與用途的製作方法

2023-10-17 09:53:34

專利名稱：葉綠素鉻及其製備方法與用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及有機化學、醫學藥品領域。
鉻是葡萄糖耐量因子的組成成分，是維持正常葡萄糖耐量不可缺少的微量元素，可促進機體糖代謝、脂肪代謝、蛋白質代謝的正常進行，是核酸類物質的穩定劑和胰蛋白酶等某些酶類的激活劑，是與人體胰島素配合的因子之一，具有激活胰島素的功能，有降血糖降血脂的作用。高價鉻，如Cr(VI)，對人體有害，低價鉻Cr(III)卻是人體所必需。
糖尿病患者，有時需要補充三價鉻，它能降低機體對外源性胰島素的需要。糖尿病人，眼部糖類聚集較多，可引發眼底的微循環障礙、出血和白內障，嚴重時甚至失明，補充鉻能減緩這些症狀。但是，無機鉻對胃有刺激性，不能有效地被人體吸收，需要轉化為有機形式。
近數十年來的研究證明，葉綠素的衍生物對人體十分有益，可以治療貧血，促進創傷和潰瘍癒合，抗菌，抗病毒，抗誘變，抗腫瘤，保肝，防治白細胞減少症、尿石症、口腔疾病，等等，而且人們也已經研究出了很多種葉綠素衍生物，如葉綠素銅鈉鹽、葉綠酸鋅等，並對其製備方法進行了實驗、研究、探索，如《(葉綠酸鋅的製備法》(申請號99125781.2，公開號CN 1263891A)、《(從竹葉中提取葉綠素銅鈉鹽的方法》(申請號91111939.6，公開號CN 1063704A)。
但是，到目前為止，尚未見到葉綠素鉻的任何專利和文獻報導。
本發明的目的就是通過將天然葉綠素中的鎂元素置換為鉻元素，創造出具有生物活性的葉綠素鉻，並將其應用於製藥領域。
本發明的技術方案如下葉綠素鉻，其分子結構式為 即葉綠素結構式中的鎂離子被鉻離子置換，其中，與葉綠素a絡合的，R是CH3，分子式為C34H30CrN4O5Na2；與葉綠素b絡合的，R是CHO，分子式為C34H28CrN4O6Na2。
如前所述的葉綠素鉻，其物理性狀為墨綠色固體，100℃以下穩定，鹼性，溶於酸，溶於人工胃液，微溶於水、苯、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、石油醚，在酸性溶液中、在365nm紫外光下呈現玫瑰紅色的螢光；其紫外吸收光譜的最大吸收峰在400nm～415nm和590nm～620nm兩個範圍內；其紅外吸收光譜在1378cm-1～1638cm-1範圍、520cm-1～525cm-1範圍和2852cm-1～3453cm-1範圍內的某些位置分別有強吸收峰；其所含鉻離子為三價鉻。
如前所述的葉綠素鉻，由使用乙醇從含有葉綠素的天然原料中提取的葉綠素或工業品糊狀葉綠素經皂化、除雜、脫鎂、鉻代、鹼化等步驟製成。鉻含量的理論值為7.7％，但實際制出的葉綠素鉻的鉻含量根據雜質的多少而有所不同，有時因為雜質中含有鉻離子，使鉻含量還高於理論值，一般在3.5％～9.0％之間。
現將葉綠素鉻的若干種製備方法分述如下葉綠素鉻的第一種製備方法，具體而言，依次包括以下步驟第一步前處理選取含有葉綠素的天然原料，包括蠶砂或者竹葉、浮萍、桑葉、菠菜、甜菜、白菜、苜蓿等綠色植物，水洗去除泥沙、灰塵、枯葉等雜質。
為避免在下一步乙醇(尤其是90％以上的乙醇)浸提過程中，蛋白質凝固包裹葉綠素不利於提取，可以在水洗去除雜質後，在所選原料中加入0.2～0.5倍原料質量的水，拌勻，放置4～12小時。
第二步浸提用70％～95％的乙醇從原料中浸提葉綠素，浸提溫度為50℃～70℃，在浸提過程中不斷攪拌，每浸提2～3小時後抽濾；反覆上述過程2～3次，合併提取液。
第三步皂化在乙醇提取液中加入氫氧化鈉溶液，調pH9～11，攪拌，皂化時間為1～2小時，溫度為40℃～70℃，過濾，去除濾渣。(濾渣可用作飼料或肥料。)第四步減壓濃縮將皂化液減壓濃縮至原體積的1/4～1/2，溫度50℃～80℃，壓力0.06Mpa～0.08Mpa。(減壓濃縮這一步驟對於最後制出葉綠素鉻並不是必需的，但是，從實際生產應用來講，有這一步驟可以減少後面步驟所用物質材料的數量，降低成本，提高效率，因而在實際應用中是必需的。)第五步除雜在濃縮液中加入濃縮液1～2倍體積的溶媒，溶媒可選擇石油醚、乙醚、汽油等，振蕩拌勻，靜置分層，取水相溶液。(可從油相溶液中回收溶媒，提取植醇。)第六步酸化脫鎂在水相溶液中加酸，邊加邊攪拌，調pH2～3，反應溫度30℃～40℃，在30～60分鐘後，離心，去除離心液，取沉澱。(在本步驟，溫度控制得較低，是為避免破壞脫鎂葉綠素的穩定。)
第七步鹼化置鉻在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH9～11，在此鹼性環境中加入20％～30％三氯化鉻溶液進行鉻代，以鉻離子置換出葉綠素中的鎂離子，邊加邊攪拌，溫度30℃～50℃，時間30～60分鐘，之後，離心，去除離心液，保留沉澱，得葉綠素鉻粗品。(在置鉻環節，也可以加入三氯化鉻固體，但因為生成物是固體，不便於判斷反應進程，所以採用三氯化鉻溶液。)在以上步驟的基礎上，為使葉綠素鉻的純度更高，可增加以下步驟第八步精製在葉綠素鉻粗品中加酸，調pH2～3，過濾，去除濾渣；再在濾液中加鹼，調pH9～11，攪拌至不再有沉澱生成或溶液澄清，離心，去除離心液，保留沉澱；本精製過程反覆進行2～4次。
第九步洗滌對固體沉澱用pH8～9弱鹼乙醇液洗滌，離心，去除離心液；第十步乾燥對固體生成物採取減壓真空乾燥、噴霧乾燥、溶媒結晶法真空乾燥或真空冷凍乾燥的方法進行乾燥處理，得板塊狀葉綠素鉻精品，粉碎，得葉綠素鉻乾燥粉末。
在乾燥步驟，根據實際需要和對成本控制的考慮，優選的乾燥方法是減壓真空乾燥，壓力為0.06Mpa～0.08Mpa，溫度為50℃～80℃，時間為4～7小時。
如果在製備葉綠素鉻時，選取的原料是工業品糊狀葉綠素，則上述製備方法中的第一步驟和第二步驟就不再需要，可以直接去掉，同時須將第三步驟皂化改作將糊狀葉綠素浸入氫氧化鈉溶液，調pH9～11，攪拌，皂化時間為1～2小時，溫度為40℃～80℃，過濾，去除沉澱。這是第二種製備方法。
第一種製備方法中的第二步驟浸提與第三步驟皂化可以同時進行，即用pH9～11的鹼性乙醇從原料中浸提葉綠素，浸提溫度為50℃～70℃，在浸提皂化過程中不斷攪拌，每浸提2～3小時後抽濾；反覆上述過程2～3次，合併提取液，去除沉澱。這是第三種製備方法。
前三種製備方法中的鹼化置鉻步驟中的加入20％～30％三氯化鉻溶液這一置鉻環節，可以提前。它可以與酸化脫鎂步驟同時進行，溫度為30℃～40℃，這是第四種製備方法(實際上，分別將第一、二、三種製備方法中的置鉻環節提前，就產生了三種新的製備方法)。它也可以與皂化步驟同時進行，溫度為40℃～50℃，這是第五種製備方法(與第四種製備方法同理，這實際上也產生了三種新的製備方法)。
葉綠素鉻，尤其是通過以上諸種方法製備的葉綠素鉻，可應用於製藥。
葉綠素的衍生物對人體十分有益，可以治療貧血，促進創傷和潰瘍癒合，抗菌，抗病毒，抗誘變，抗腫瘤，保肝，防治白細胞減少症、尿石症、口腔疾病，等等。葉綠素鉻作為一種葉綠素衍生物，也具有很多葉綠素衍生物的共性，對上述葉綠素衍生物的作用有不同程度的體現，可以在進一步研究並經過動物試驗和臨床試驗後，廣泛用於分別治療多種疾病的多種藥物的製備中。
鉻是葡萄糖耐量因子的組成成分，是維持正常葡萄糖耐量不可缺少的微量元素，可促進機體糖代謝、脂肪代謝、蛋白質代謝的正常進行，是核酸類物質的穩定劑和胰蛋白酶等某些酶類的激活劑，是與人體胰島素配合的因子之一，具有激活胰島素的功能，有降血糖、降血脂的作用。
糖尿病患者補充三價鉻，能降血糖，降血脂，降低機體對外源性胰島素的需要，並能減緩因眼部糖類聚集較多而引發的眼底微循環障礙、出血、白內障，甚至失明的症狀。但是，無機鉻對胃有刺激性，不能有效地被人體吸收，需要轉化為有機形式，以減少甚至消除對胃的刺激性，便於人體吸收。
葉綠素鉻正是三價鉻與葉綠素絡合的有機物，其中所含鉻卟啉的結構接近於廣泛存在於生物體內的細胞色素P450的血紅素輔基，是P450模擬體系的主要組分，具有催化氮化碳氫化合物的能力，能參與生理物質的生物合成，能代謝外源性化合物及內源性化合物，而且，通過本發明提供的製備方法制出的葉綠素鉻具有生物活性，適於製造治療糖尿病的降血糖、降血脂類藥物。
同時，葉綠素鉻中的鉻卟啉能抑制原血紅素氧化酶，適用於製造治療新生兒黃疸的藥品。
當然，葉綠素鉻應用於製藥，還需要作更進一步的研究，還需要經過多次的動物試驗和臨床試驗。
本發明的有益效果是通過操作簡便、原料豐富、成本低廉、毒性極低的方法製成、創造了葉綠素鉻這種葉綠素與鉻的新絡合物、一種具有生物活性的新的葉綠素衍生物，同時發掘出它的用途應用於分別治療糖尿病、新生兒黃疸等疾病的多種藥品的製造。
下面結合附圖，通過實施例作進一步說明。


圖1是葉綠素鉻第一種製備方法的流程圖。
圖2是用貝克曼(BECKMAN)UV-600型紫外可見分光光度儀檢測通過本發明提供的製備方法製得的葉綠素鉻的紫外吸收光譜圖。
圖3是用尼泊爾公司(NICOLET)200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀檢測通過本發明提供的製備方法製得的葉綠素鉻的紅外吸收光譜圖。
圖4是用貝克曼(BECKMAN)UV-600型紫外可見分光光度儀對通過本發明提供的製備方法製得的葉綠素鉻與高錳酸鉀反應後生成的物質和重鉻酸鉀標準品分別與二苯卡巴肼生成的兩個有色溶液的波長掃描圖。
實施例1本例按照附圖1所示的流程實施。
選取蠶砂10kg，水洗除塵，加入5kg水，拌勻，放置8小時，避免下一步乙醇浸提時蛋白質凝固包裹葉綠素。8小時後，加入80％的乙醇，開始浸提葉綠素。在浸提過程中不斷攪拌，保持溫度在60℃左右，浸提3小時，抽濾，將濾渣再加入80％乙醇，繼續浸提3小時後抽濾，合併兩次的提取液。然後在合併的提取液中加入氫氧化鈉溶液，調pH10左右，攪拌1小時，保持溫度在60℃左右。1小時後，過濾，去除沉澱。將濾液置於真空濃縮器中，溫度70℃，壓力0.07Mpa，減壓濃縮至原體積的1/3。在濃縮液中加入1.5倍體積的石油醚，振蕩拌勻，靜置分層，待上層油相澄清後，取下層水相溶液。(上層油相溶液含植醇，可從中回收石油醚，並提取植醇。)在水相溶液中加入鹽酸，邊加邊攪拌，調pH2，反應溫度30℃，在40分鐘後，離心，去除離心液。在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH10，在此鹼性環境中加入30％三氯化鉻溶液進行鉻代，以鉻離子置換出葉綠素中的鎂離子，邊加邊攪拌，保持溫度在35℃左右，40分鐘後，離心，去除離心液，得葉綠素鉻粗品。
為使葉綠素鉻純度更高，將粗品溶於硫酸，調pH2，過濾，去除沉澱；然後在濾液中加氫氧化鈉，調pH10，攪拌至不再有沉澱生成，離心，去除離心液，保留沉澱；如此反覆加酸加鹼3次。之後對生成的固體沉澱用pH8弱鹼乙醇液淋洗，然後離心，去除離心液。將固體生成物置於真空乾燥器中，加熱至60℃，壓力0.07Mpa，減壓真空乾燥6小時，製得板塊狀葉綠素鉻精品，粉碎，得葉綠素鉻乾燥粉末136g，收率1.36％。
本實施例所製得產品的物理性質為墨綠色固體，加熱到100℃仍然穩定，鹼性，溶於酸，溶於人工胃液，微溶於水、苯、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、石油醚，在酸性溶液中、在365nm紫外光下呈現玫瑰紅色的螢光。
用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對製得的產品作紫外吸收光譜圖檢測，檢測結果如附圖2所示，表明該產品的紫外吸收光譜的最大吸收峰在411nm和590nm兩處，證明該產品具有卟啉環結構。
用尼泊爾公司200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀對製得的產品作紅外吸收光譜圖檢測，檢測結果如附圖3所示，表明該產品的紅外吸收光譜在524.187cm-1、1378.848cm-1、1498.800cm-1、1632.460cm-1、2853.937cm-1、2928.800cm-1、3370.152cm-1、3393.031cm-1、3427.660cm-1、3452.656cm-1等處有強吸收峰，在845.085cm-1、1020.562cm-1、1072.734cm-1等處有弱吸收峰。
因為，除了光學異構體和長鏈烷烴同系物外，幾乎沒有兩種化合物具有相同的紅外吸收光譜，這即是紅外吸收光譜的「指紋性」，而本紅外吸收光譜圖在現有資料中沒有相同的，所以，本紅外吸收光譜圖證明了，通過本實施例製得的產品是新物質，同時也證實了前文公開的葉綠素鉻的分子結構的部分組成。
取本實施例製得的產品適量，用醋酸溶解，分別加入三支試管中，作如下檢測管1溶液+醋酸鉛——＞無黃色沉澱管2溶液+硝酸鋇——＞無黃色沉澱管3溶液+硝酸銀——＞無磚紅色沉澱上述檢測表明產品中不含高價鉻。
取產品425mg(樣品量)溶於硫酸，溶完後加水20ml，滴加高錳酸鉀至溶液現微紅色，加熱煮沸約90秒，取下冷至室溫，滴加亞硝酸鈉至紅色恰好消失，將溶液轉入250ml量瓶中，以水稀釋至250ml刻度，搖勻。從中取5ml，加二苯卡巴肼3ml，溶液呈紫紅色，以水稀釋至10ml(以下對此溶液簡稱樣品溶液)。同時，配製標準品重鉻酸鉀與二苯卡巴肼的溶液10ml，控制鉻濃度1mg/ml(以下簡稱標準品溶液)。用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對樣品溶液和標準品溶液作波長掃描，如附圖4所示，其中①為樣品溶液的波長掃描，②為標準品溶液的波長掃描，兩者的吸收峰皆在544nm處。在544nm將樣品溶液與標準品溶液作比色測定，證明產品中所含鉻離子為三價鉻。
將樣品溶液和標準品溶液分別置於三個試管中。用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀在波長544nm處測定此六個試管中溶液的吸收值，得下表數據
其中，序號為1、2、3的，是樣品溶液的吸收值；序號為4、5、6的，是標準品溶液的吸收值。
根據上表數據，計算產品中的鉻含量已知配製的標準品溶液的鉻濃度C標＝1mg/ml三個樣品溶液吸收值的平均值A樣＝0.2774三個標準品溶液吸收值的平均值A標＝1.3639計算出樣品溶液的鉻濃度C樣＝C標×A樣÷A標＝0.2034mg/ml計算出樣品中鉻的含量0.2034÷2×250＝25.425mg已知樣品量W樣品量＝425mg計算出本實施例所得產品葉綠素鉻中鉻的百分含量為5.98％。
實施例2選取竹葉10kg，水洗除塵，撿除枯葉，加入3kg水，拌勻，放置12小時。然後，加入95％的乙醇，加入氫氧化鈉溶液，調pH11，攪拌，溫度70℃，浸提2小時，抽濾，反覆上述過程2次，合併提取液，去除沉澱。將提取液置於真空濃縮器中，溫度80℃，壓力0.08Mpa，減壓濃縮至原體積的1/4。在濃縮液中加入2倍體積的乙醚，振蕩拌勻，靜置分層，待上層油相澄清後，取下層水相溶液。在水相溶液中加入硫酸，邊加邊攪拌，調pH2，反應溫度40℃，在30分鐘後，離心，去除離心液，取沉澱。在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH11，加入30％三氯化鉻溶液進行鉻代，攪拌，溫度50℃，半小時後，離心，去除離心液，得葉綠素鉻粗品。
將葉綠素鉻粗品溶於鹽酸，調pH2，過濾，去除沉澱；然後在濾液中加氫氧化鈉，調pH11，攪拌至溶液澄清，離心，去除離心液，保留沉澱；如此反覆進行2次。之後對生成的固體沉澱用pH9弱鹼乙醇液洗滌，然後離心，去除離心液。隨後將固體生成物用噴霧乾燥法進行乾燥處理，製得葉綠素鉻精品79g，收率0.79％。
本實施例所製得產品的物理性質與實施例1製得產品的物理性質一致。
用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對本實施例製得產品作紫外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紫外吸收光譜的最大吸收峰在408nm和612nm兩處。
用尼泊爾公司200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀對製得的產品作紅外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紅外吸收光譜在520.261cm-1、1379.617cm-1、1510.183cm-1、1637.218cm-1、2852.984cm-1、2923.671cm-1、3425.058cm-1、3481.265cm-1等處有強吸收峰，在838.211cm-1、1023.170cm-1、1078.529cm-1等處有弱吸收峰。
通過與實施例1同樣的方法，檢測證明本實施例所製得的產品中不含高價鉻，含三價鉻，鉻的百分含量為4.73％。
實施例3選取乾燥浮萍10kg，水洗除塵，加入2kg水，拌勻，放置4小時。加入pH9的鹼性乙醇，攪拌，溫度50℃，浸提3小時，抽濾，反覆上述過程3次，合併提取液，去除沉澱。將提取液置於真空濃縮器中，溫度50℃，壓力0.06Mpa，減壓濃縮至原體積的1/2。在濃縮液中加入等體積的汽油，振蕩拌勻，靜置分層，待上層油相澄清後，取下層水相溶液。在水相溶液中加入鹽酸，攪拌，調pH3，加入20％三氯化鉻溶液，反應溫度30℃，在60分鐘後，離心，去除離心液，取沉澱。在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH9，攪拌，溫度30℃，半小時後，離心，去除離心液，得葉綠素鉻粗品。
將葉綠素鉻粗品溶於硫酸，調pH3，過濾，去除沉澱；然後在濾液中加氫氧化鈉，調pH9，攪拌至溶液澄清，離心，去除離心液，保留沉澱；如此反覆進行4次。之後對生成的固體沉澱用pH8弱鹼乙醇液洗滌，然後離心，去除離心液。隨後採取溶媒結晶法真空乾燥的方法對固體生成物進行乾燥處理，製得葉綠素鉻精品64g，收率0.64％。
本實施例所製得產品的物理性質與實施例1製得產品的物理性質一致。
用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對本實施例製得產品作紫外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紫外吸收光譜的最大吸收峰在404nm和617nm兩處。
用尼泊爾公司200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀對製得的產品作紅外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紅外吸收光譜在524.332cm-1、1379.714cm-1、1509.961cm-1、1636.873cm-1、2853.136cm-1、2923.674cm-1、3369.975cm-1、3392.676cm-1、3472.283cm-1等處有強吸收峰，在839.033cm-1、1021.427cm-1、1077.189cm-1等處有弱吸收峰。
通過與實施例1同樣的方法，檢測證明本實施例所製得的產品中不含高價鉻，含三價鉻，鉻的百分含量為3.82％。
實施例4選取工業品糊狀葉綠素10kg，將其浸入氫氧化鈉溶液，調pH11，溫度80℃，攪拌1小時後，過濾，去除沉澱。將濾液置於真空濃縮器中，溫度80℃，壓力0.08Mpa，減壓濃縮至原體積的1/4。在濃縮液中加入1.5倍濃縮液體積的石油醚，振蕩拌勻，靜置分層，待上層油相澄清後，取下層水相溶液。在水相溶液中加入鹽酸，邊加邊攪拌，調pH2，反應溫度40℃，在30分鐘後，離心，去除離心液。在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH11，在此鹼性環境中加入30％三氯化鉻溶液進行鉻代，邊加邊攪拌，保持溫度在50℃，30分鐘後，離心，去除離心液，得葉綠素鉻粗品。
在粗品中加硫酸，調pH2，過濾，去除沉澱；然後在濾液中加氫氧化鈉，調pH11，攪拌至不再有沉澱生成，離心，去除離心液，保留沉澱；如此反覆加酸加鹼2次。之後對生成的固體沉澱用pH9弱鹼乙醇液淋洗，然後離心，去除離心液。將固體生成物用真空冷凍乾燥法進行乾燥處理，得葉綠素鉻精品957g，收率9.57％。
本實施例所製得產品的物理性質與實施例1製得產品的物理性質一致。
用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對本實施例製得產品作紫外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紫外吸收光譜的最大吸收峰在415nm和598nm兩處。
用尼泊爾公司200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀對製得的產品作紅外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紅外吸收光譜在521.511cm-1、1382.585cm-1、1465.757cm-1、1550.968cm-1、1632.101cm-1、2853.878cm-1、2924.953cm-1、3390.160cm-1、3427.753cm-1、3431.859cm-1等處有強吸收峰，在840.300cm-1、1022.199cm-1等處有弱吸收峰。
通過與實施例1同樣的方法，檢測證明本實施例所製得的產品中不含高價鉻，含三價鉻，鉻的百分含量為6.88％。
實施例5選取糊狀葉綠素10kg，將其浸入氫氧化鈉溶液，調pH9，在此鹼性環境中加入20％三氯化鉻溶液，溫度40℃，攪拌2小時後，過濾，去除沉澱。將濾液置於真空濃縮器中，溫度50℃，壓力0.06Mpa，減壓濃縮至原體積的1/2。在濃縮液中加入等體積的乙醚，振蕩拌勻，靜置分層，待上層油相澄清後，取下層水相溶液。在水相溶液中加入鹽酸，邊加邊攪拌，調pH3，反應溫度30℃，在60分鐘後，離心，去除離心液。在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH9，攪拌，保持溫度在30℃，60分鐘後，離心，去除離心液，得葉綠素鉻粗品。
用硫酸溶解葉綠素鉻粗品，調pH3，過濾，去除沉澱；然後在濾液中加氫氧化鈉，調pH9，攪拌至溶液澄清，離心，去除離心液，保留沉澱；如此反覆4次。之後對生成的固體沉澱用pH8弱鹼乙醇液洗滌，離心，去除離心液。將固體生成物用減壓真空乾燥法進行乾燥處理，得葉綠素鉻精品877g，收率8.77％。
本實施例所製得產品的物理性質與實施例1製得產品的物理性質一致。
用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對本實施例製得產品作紫外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紫外吸收光譜的最大吸收峰在411nm和620nm兩處。
用尼泊爾公司200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀對製得的產品作紅外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紅外吸收光譜在520.365cm-1、1380.195cm-1、1477.581cm-1、1551.073cm-1、1636.784cm-1、2854.362cm-1、3392.886cm-1、3427.608cm-1、3478.789cm-1等處有強吸收峰，在839.347cm-1、1023.118cm-1、1077.682cm-1等處有弱吸收峰。
通過與實施例1同樣的方法，檢測證明本實施例所製得的產品中不含高價鉻，含三價鉻，鉻的百分含量為6.37％。
實施例6選取新鮮桑葉10kg，水洗除塵，加入2kg水，拌勻，放置6小時後，加入90％的乙醇，浸提葉綠素，其間不斷攪拌，溫度50℃，浸提2小時，抽濾，將濾渣再加入90％乙醇，繼續浸提2小時後抽濾，如此重複三次，合併三次的提取液。然後在合併的提取液中加入氫氧化鈉溶液，調pH10左右，加入30％三氯化鉻溶液，溫度50℃，攪拌1小時後，過濾，去除沉澱。將濾液置於真空濃縮器中，溫度70℃，壓力0.07Mpa，減壓濃縮至原體積的1/3。在濃縮液中加入1.5倍體積的石油醚，振蕩拌勻，靜置分層，待上層油相澄清後，取下層水相溶液。在水相溶液中加入鹽酸，邊加邊攪拌，調pH2，溫度30℃，在50分鐘後，離心，去除離心液。在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH10，攪拌，溫度50℃，30分鐘後，離心，去除離心液，得葉綠素鉻粗品。
在葉綠素鉻粗品中加入硫酸，調pH2，過濾，去除沉澱；然後在濾液中加氫氧化鈉，調pH10，攪拌至不再有沉澱生成，離心，去除離心液，保留沉澱；如此反覆加酸加鹼3次。之後對生成的固體沉澱用pH8弱鹼乙醇液洗滌，然後離心，去除離心液。對固體生成物進行減壓真空乾燥，得葉綠素鉻精品72g，收率0.72％。
本實施例所製得產品的物理性質與實施例1製得產品的物理性質一致。
用貝克曼UV-600型紫外可見分光光度儀對本實施例製得產品作紫外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紫外吸收光譜的最大吸收峰在400nm和609nm兩處。
用尼泊爾公司200SXV FT-IR型傅立葉變換紅外光譜儀對製得的產品作紅外吸收光譜圖檢測，檢測結果表明該產品的紅外吸收光譜在521.177cm-1、1379.279cm-1、1497.465cm-1、1551.124cm-1、1632.387cm-1、2853.712cm-1、2924.330cm-1、3391.541cm-1、3427.656cm-1、3453.108cm-1等處有強吸收峰，在841.928cm-1、1022.240cm-1、1073.818cm-1等處有弱吸收峰。
用與實施例1同樣的方法，檢測證明本實施例所製得的產品中不含高價鉻，含三價鉻，鉻的百分含量為5.02％。
權利要求
1.葉綠素鉻，其分子結構式為 即葉綠素結構式中的鎂離子被鉻離子置換，其中，與葉綠素a絡合的，R是CH3，分子式為C34H30CrN4O5Na2；與葉綠素b絡合的，R是CHO，分子式為C34H28CrN4O6Na2。
2.如權利要求1所述的葉綠素鉻，特徵在於其物理性狀為墨綠色固體，100℃以下穩定，鹼性，溶於酸，溶於人工胃液，微溶於水、苯、乙酸乙酯、乙醇、乙醚、石油醚，在酸性溶液中、在365nm紫外光下呈現玫瑰紅色的螢光；其紫外吸收光譜的最大吸收峰在400nm～415nm和590nm～620nm兩個範圍內；其紅外吸收光譜在1378cm-1～1638cm-1範圍、520cm-1～525cm-1範圍和2852cm-1～3453cm-1範圍內的某些位置分別有強吸收峰；其所含鉻離子為三價鉻。
3.如權利要求1所述的葉綠素鉻，其特徵在於該葉綠素鉻由使用乙醇從含有葉綠素的天然原料中提取的葉綠素或糊狀葉綠素經皂化、除雜、脫鎂、鉻代、鹼化等步驟製成。
4.如權利要求1～3中任一權利要求所述的葉綠素鉻的製備方法，其特徵在於本製備方法依次包括以下步驟第一步前處理選取含有葉綠素的天然原料，包括蠶砂或者竹葉、浮萍、桑葉、菠菜、甜菜、白菜、苜蓿等綠色植物，水洗去除泥沙、灰塵、枯葉等雜質；第二步浸提用70％～95％的乙醇從原料中浸提葉綠素，浸提溫度為50℃～70℃，在浸提過程中不斷攪拌，每浸提2～3小時後抽濾；反覆上述過程2～3次，合併提取液；第三步皂化在乙醇提取液中加入氫氧化鈉溶液，調pH9～11，攪拌，皂化時間為1～2小時，溫度為40℃～70℃，過濾，去除沉澱；第四步減壓濃縮將皂化液減壓濃縮至原體積的1/4～1/2，溫度50℃～80℃，壓力0.06Mpa～0.08Mpa；第五步除雜在濃縮液中加入濃縮液1～2倍體積的溶媒，溶媒可選擇石油醚、乙醚、汽油等，振蕩拌勻，靜置分層，取水相溶液；第六步酸化脫鎂在水相溶液中加酸，邊加邊攪拌，調pH2～3，反應溫度30℃～40℃，在30～60分鐘後，離心，去除離心液，取沉澱；第七步鹼化置鉻在沉澱中加入氫氧化鈉溶液，調pH9～11，再加入20％～30％三氯化鉻溶液進行鉻代，邊加邊攪拌，溫度30℃～50℃，在30～60分鐘後，離心，去除離心液，保留沉澱，得葉綠素鉻粗品。
5.如權利要求4所述的製備方法，其特徵在於在第七步驟之後，增加以下步驟第八步精製在葉綠素鉻粗品中加酸，調pH2～3，過濾，去除沉澱；再在濾液中加鹼，調pH9～11，攪拌至不再有沉澱生成或溶液澄清，離心，去除離心液，保留沉澱；本精製過程反覆進行2～4次；第九步洗滌對固體沉澱用pH8～9弱鹼乙醇液洗滌，離心，去除離心液；第十步乾燥對固體生成物採取減壓真空乾燥、噴霧乾燥、溶媒結晶法真空乾燥或真空冷凍乾燥的方法進行乾燥處理，得板塊狀葉綠素鉻精品，粉碎，得葉綠素鉻乾燥粉末。
6.如權利要求4或5所述的製備方法，其特徵在於在第一步驟後，在所選原料中加入0.2～0.5倍原料質量的水，拌勻，放置4～12小時。
7.如權利要求4或5所述的製備方法，其特徵在於選取工業品糊狀葉綠素作為原料，去掉第一、二步驟，將第三步驟皂化改作將糊狀葉綠素浸入氫氧化鈉溶液，調pH9～11，攪拌，皂化時間為1～2小時，溫度為40℃～80℃，過濾，去除沉澱。
8.如權利要求4～6中任一權利要求所述的製備方法，其特徵在於第二步驟浸提與第三步驟皂化同時進行，即用pH9～11的鹼性乙醇從原料中浸提葉綠素，浸提溫度為50℃～70℃，在浸提皂化過程中不斷攪拌，每浸提2～3小時後抽濾；反覆上述過程2～3次，合併提取液，去除沉澱。
9.如權利要求4～8中任一權利要求所述的製備方法，其特徵在於第七步驟鹼化置鉻中的加入20％～30％三氯化鉻溶液這一置鉻環節提前，與酸化脫鎂步驟同時進行，溫度30℃～40℃。
10.如權利要求4～8中任一權利要求所述的製備方法，其特徵在於第七步驟鹼化置鉻中的加入20％～30％三氯化鉻溶液這一置鉻環節提前，與皂化步驟同時進行，溫度40℃～50℃。
11.如權利要求1～3中任一權利要求所述的葉綠素鉻的用途，在於製造藥品。
12.如權利要求11所述的葉綠素鉻的用途，其特徵在於本葉綠素鉻用於製造治療糖尿病的降血糖、降血脂類藥品。
13.如權利要求11所述的葉綠素鉻的用途，其特徵在於本葉綠素鉻用於製造治療新生兒黃疸的藥品。
全文摘要
本發明為葉綠素鉻及其製備方法與用途，涉及有機化學和醫藥領域，從含有葉綠素的天然原料中提取葉綠素或直接使用糊狀葉綠素，通過皂化、除雜、脫鎂、鉻代、鹼化等步驟，以三價鉻離子取代葉綠素中的鎂離子，製得葉綠素鉻，可用於分別治療糖尿病、新生兒黃疸等疾病的多種藥品的製造，本發明創造了一種頗具藥用價值的新化合物，公開的製備方法操作簡便、原料豐富、成本低廉、毒性極低。
文檔編號A61P3/10GK1406940SQ01108738
公開日2003年4月2日 申請日期2001年8月15日 優先權日2001年8月15日
發明者薛永新, 趙因, 代勇, 蘇學操, 彭旭輝 申請人:四川恩威中醫藥研究所