食品中金黃色葡萄球菌毒素基因的檢測試劑盒及檢測方法

2023-05-12 23:56:41 1

>2、食品中金黃色葡萄球菌毒素基因的檢測方法，其特徵在於使用權利要求l所述的試劑盒，包括如下步驟①PCR反應取lul待測樣品DNA溶液，加入10ul試劑盒中的檢測溶液A和14ul滅菌超純水，總體積25ul;另取lul待測樣品DNA溶液，加入10ul試劑盒中的檢測溶液B和14ul滅菌超純水，總體積25ul;兩個反應體積分別在5000r/min離心10s，然後按下列參數進行PCR擴增預變性94°C，3min;進入循環94。C變性60s，60。C退火60s，72。C延伸60s，35次循環；終止延伸72°C，7min;②將PCR擴增產物進行DHPLC分析色譜柱PS-DVB&C18DNASep色譜柱，4.6mmx50mm，粒度3柱溫50°C;流動相(體積比):0.0min，55.0%緩衝溶液A，45.0%緩衝溶液B;0.5min，50.2%緩衝溶液A，49.8%緩衝溶液B;2.8min，40.9%緩衝溶液A，59.1%緩衝溶液B;5.0min，37.3%緩衝溶液A，62.7%緩衝溶液B;(7.3min，35.5%緩衝溶液A，64.5%緩衝溶液B;(9.5min，34.3%緩衝溶液A，65.7%緩衝溶液B;其中，緩衝溶液A是濃度0.1mM的TEAA水溶液;緩衝溶液B是濃度為0.1MTEAA水溶液與乙腈按體積比3:1的混合溶液；流速0.9mL/min;檢測器螢光檢測器，光源150WXenon燈；激發譜帶寬15nm;發射譜帶寬15.3nm;檢測靈敏度在波長350nm積分2s;上樣量PCR產物5)iiL。全文摘要食品中金黃色葡萄球菌毒素基因的檢測試劑盒及檢測方法，該試劑盒中包括檢測溶液A和檢測溶液B檢測溶液A和B中均含10mMTris·Cl、50mMKCl、25mMMgCl2、dNTP各2.5mM、TaqDNA聚合酶5U/μL，還分別含有ETA、SEB、SEC、SEE、SEI和SEA六種毒素基因引物對各10μM或SEJ、ETB、TSST、SED、SEH和SEG六種毒素基因引物對各10μM。使用本發明的檢測試劑盒及檢測方法，可以高靈敏度地檢測食品中12種金黃色葡萄球菌毒素基因，並且檢側耗時短，操作簡捷，可以節省大量的勞力和財力，適合快速檢測的要求。文檔編號C12R1/445GK101580873SQ200910010798公開日2009年11月18日申請日期2009年3月20日優先權日2009年3月20日發明者曹際娟申請人:曹際娟