比色檢測含巰基胺基酸的分析方法
2023-05-06 17:13:36
專利名稱：比色檢測含巰基胺基酸的分析方法
技術領域：
本發明涉及一種比色檢測含巰基胺基酸的分析方法。
背景技術：
胺基酸是蛋白質的最基本的組成單位，是構成生物體內各器官最基本的物質之一。胺基酸可以合成人體中酶、激素和其它重要組成物質，能廣泛參與人體各項生理活動和新陳代謝，在生命活動中發揮著特殊的重要作用，是生物體內必不可少的營養成分之一。各種必需的胺基酸具有維持生物體正常發育的保健營養作用。迄今為止，自然界中已發現180多種胺基酸，其中參與蛋白質合成的胺基酸只有 20多種，它們為生物體合成蛋白質所必需，在生命科學、醫學和食品科學等眾多領域具有重要意義。例如組氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、穀氨酸和含硫胺基酸等對肝病有一定療效。有些胺基酸混合液可部分地代替血漿，直接注射到人體血液中以補充營養，對創傷、燒傷和手術後的病人具有促進身體康復的作用。青黴胺由於對銅、汞、鉛等重金屬離子有很強的絡合作用，可解人體由重金屬離子引起的中毒。青黴胺還具有明顯的免疫抑制作用和抗炎作用，對類風溼性關節炎及慢性活動肝炎等免疫性疾病都具有良好的療效。而且青黴胺能阻止可溶性膠原的成熟，可用於治療結締組織增生性疾病。因此，對青黴胺的分析檢測具有重要的實際意義。另外，當體液中某種胺基酸含量異常也可能引起眾多疾病。同型半胱氨酸 Hcy是體內蛋氨酸代謝過程的產物，它來源於每日食物中的蛋氨酸轉化為半胱氨酸Cys的過程。血漿中Hcy水平升高是動脈粥樣硬化、腦動脈閉塞性疾病、周圍動脈閉塞性疾病、深靜脈栓塞等血管疾病的一種獨立危險因素。同時，Cys的升高可導致妊娠併發症，流產以及低體重兒。因此準確、方便、快捷地檢測體液中Hcy和Cys的含量已成為控制心血管疾病和血管閉塞性疾病的重要因素之一。目前，國內外測定半胱氨酸、同型半胱氨酸和青黴胺的分析方法主要有螢光檢測法(如 km D. S.等人的專利 US2007054410-A1 和 US20070054410A1、Shiue C. C.等人的專禾U US2005019937-A1 和 US20050019937A1、Xu M.等人的專利 US6066467-A)、紫外檢測法(如km D.S.等人的專利US20070054410A1)、化學發光法(如李富友等人的專利 200810204420. 6,200810204421. 0 和 200910046661. 7)、生物酶法(如 Xu Μ. X.等人的專利 US006066467A、袁崇生等人的專利200480(^6009. 4)、高效液相色譜法、電化學法、毛細管電泳法等，這些方法或多或少均存在操作複雜、靈敏度低、選擇性差等缺陷。郭勇等人利用二吡咯甲烷與醌的配合物比色檢測半胱氨酸，但原料成本高，二吡咯甲烷合成純化後處理複雜(200410092788. X)。
發明內容
本發明的目的是提供一種利用三吲哚烯化合物比色檢測含巰基胺基酸的分析方法。本發明的比色檢測含巰基胺基酸如半胱氨酸、同型半胱氨酸或青黴胺的分析方法，通過以下措施來實現—種比色檢測含巰基胺基酸的分析方法，其特徵在於該方法步驟為A、以三吲哚烯化合物作為溶質，以色譜純乙腈作為溶劑，製成藍色的檢測液，其濃度範圍為 1. 0X10_%-1X1(^M ；B、用2-羥乙基-1-哌嗪基乙磺酸(HEPES)配製濃度為0. 005-0. 015M的中性緩衝水溶液(PH = 7. 0)，以此緩衝溶液作為溶劑，分別配製成穀氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、 異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、 賴氨酸、精氨酸、組氨酸、穀胱甘肽、半胱氨酸、同型半胱氨酸或青黴胺的待檢測液，其濃度為 1. 0Χ1(Γ4 Μ-1Χ1(Γ2Μ ；C、將三吲哚烯化合物1的檢測液與半胱氨酸或同型半胱氨酸待檢測液混合，混合液均變為無色；將三吲哚烯化合物1的檢測液與青黴胺待檢測液混合，混合液變為黃色；將三吲哚烯化合物1的檢測液分別與其它胺基酸待檢測液混合，混合液不發生顏色變化。本發明利用了具有大共軛特殊結構的三吲哚烯化合物作為胺基酸的檢測受體。三吲哚烯化合物能夠穩定地存在於體積比為1 1的乙腈-水(HEPES中性緩衝水溶液，PH =7.0)的混合溶液中，為測定水溶性胺基酸生物分子提供了便利。應用三吲哚烯化合物作為胺基酸檢測受體，通過裸眼可視的顏色變化高選擇性地檢測半胱氨酸、同型半胱氨酸和青黴胺這類含巰基的胺基酸分子，而對其他胺基酸無此比色現象，這種識別性能還可用紫外-可見分光光度儀進行對比測定。本發明所述的三吲哚烯化合物，其結構式為
權利要求
1. 一種比色檢測含巰基胺基酸的分析方法，其特徵在於該方法步驟為A、以三吲哚烯化合物作為溶質，以色譜純乙腈作為溶劑，製成藍色的檢測液，其濃度範圍為 Ι.οχιοΛΙ-ΙΧΚ^Μ;B、用2-羥乙基-1-哌嗪基乙磺酸配製濃度為0.005-0. 015Μ的中性緩衝水溶液，以此緩衝溶液作為溶劑，分別配製成穀氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、穀胱甘肽、半胱氨酸、同型半胱氨酸或青黴胺的待檢測液，其濃度為1.0 X KT4M-I X 101;C、將三吲哚烯化合物1的檢測液與半胱氨酸或同型半胱氨酸待檢測液混合，混合液均變為無色；將三吲哚烯化合物1的檢測液與青黴胺待檢測液混合，混合液變為黃色；將三吲哚烯化合物1的檢測液分別與其它胺基酸待檢測液混合，混合液不發生顏色變化；其中三吲哚烯化合物的結構式為
全文摘要
本發明公開了一種比色檢測含巰基胺基酸的分析方法。本發明應用三吲哚烯化合物作為胺基酸檢測受體，通過裸眼可視的顏色變化高選擇性地檢測含巰基的胺基酸分子，而對其他胺基酸無此比色現象，這種識別性能還可用紫外-可見分光光度儀進行對比測定。本發明與常規方法相比，具有檢測液配製過程簡單，檢測方法簡便等優點。
文檔編號G01N21/78GK102200514SQ20101014897
公開日2011年9月28日 申請日期2010年3月23日 優先權日2010年3月23日
發明者邵士俊, 郭勇, 魏薇 申請人:中國科學院蘭州化學物理研究所