膠塞中揮發性物質的檢測方法
2023-05-17 17:47:21
專利名稱：膠塞中揮發性物質的檢測方法
技術領域：
本發明涉及藥包材成分的檢測方法，具體地說，涉及膠塞中揮發性物質的檢測方法。
背景技術：
膠塞中的揮發性物質是指為了改善膠塞的使用性能和膠塞本身的耐用性而在膠塞的生產過程中添加的一些成分。上述揮發性物質(如BHT、聚乙烯脂、硬脂酸、矽油等) 會在膠塞的使用過程中揮發出來，特別是藥用膠塞中的揮發性物質會汙染藥品。如果藥品中所含的上述揮發性物質水平高於安全值時，就會影響藥品的質量並對人體產生危害。對膠塞中揮發性物質進行控制的難點在於，相同品種的膠塞中的揮發性物質具有不確定性。這是由於不同的生產企業可以採用不同的配方和生產工藝生產相同品種的膠塞，而且膠塞的生產工藝也在不斷變化改進，使得膠塞中的揮發性物質不斷變化，因此建立全面快速的檢測系統是膠塞揮發性物質測定的趨勢。目前，國內尚無針對膠塞揮發性物質的檢測方法，藥典常用氣相色譜法(GC)對藥品中的殘留溶劑進行檢測(殘留溶劑也是揮發性的，但是不同於膠塞中的揮發性物質)，如 《中國藥典》2010版推薦的檢測方法為頂空毛細管氣相色譜法。氣相色譜法中的定性分析主要是依據保留時間，這需要和已知的標準物質的保留時間進行比對，但是對於未知峰，則很難進行定性分析。此外，用常規氣相色譜法檢測膠塞中含有的揮發性物質時，由於膠塞中的揮發性物質種類較多，不同揮發性物質在一根色譜柱上的保留時間可能相同或相近，這給揮發性物質的定性及定量分析都帶來了困難。
發明內容
本發明的目的在於提供一種高效、準確的檢測膠塞中揮發性物質的方法。為了實現上述目的，本發明的膠塞中揮發性物質的檢測方法，其包括如下步驟1)資料庫的建立a、用極性相反的兩個色譜柱對建庫樣品中的揮發性物質進行氣相色譜分析，然後以2，6_ 二叔丁基對甲酚(BHT)為參比物質，分別計算各色譜峰的相對保留時間；b、然後再用所述極性相反的兩個色譜柱對所述建庫樣品中的揮發性物質進行氣質聯用分析，分別對所述建庫樣品中的揮發性物質進行定性分析，確定其所屬種類；C、在所述建庫樣品中加入內標物，重複步驟a、b，然後將氣相色譜檢測器上的經由所述極性相反的兩個色譜柱得到的色譜峰，分別與質譜檢測器上得到的峰進行相似度匹配；d、根據步驟c的相似度匹配結果，建立所述極性相反的兩個色譜柱的色譜峰之間的對應關係，及其與質譜圖之間的對應關係，並根據質譜進行歸類，從而建立資料庫；2)待測膠塞中揮發性物質的測定
e、用所述極性相反的兩個色譜柱對待測膠塞中的揮發性物質進行氣相色譜分析， 並根據步驟a方法計算兩個色譜柱的各色譜峰的相對保留時間；f、將步驟e得到的相對保留時間與步驟1)的資料庫相比較，從而確定待測膠塞中含有的揮發性物質的種類。其中，所述建庫樣品包括丁基膠塞、溴化丁基膠塞及氯化丁基膠塞等已知的各種膠塞；還可以包括聚乙烯脂，酚醛樹脂、硬脂酸、溴化丁基膠塞原膠，氯化丁基膠塞原膠及俄羅斯膠等現有膠塞的各種原輔料。所述內標物為苯、甲苯、乙酸丁酯、四氫化萘、正丁醇、正戊醇或BHT等。所述極性相反的兩個色譜柱是指在氣相色譜中並聯的兩個極性相反的色譜柱，優選為非極性色譜柱和極性色譜柱。其中，所述非極性色譜柱包括固定相為聚氧矽烷或聚二甲基矽烷的色譜柱，如Supelco公司生產的SPB-I型非極性色譜柱；所述極性色譜柱包括固定相為聚乙二醇-硝基對苯二甲酸修飾的色譜柱，如安捷倫公司生產的HP-FFAP型極性色譜柱。步驟a中氣相色譜的色譜條件為程序升溫40°C保持lOmin，然後以10°C /min的速度升至170°C並保持IOmin ；進樣口溫度:200°C;恆定流速2. OmL/min ；載氣氦氣；分流比5 1 ；檢測器溫度250°C;頂空溫度:150°C ；頂空時間:30min。步驟b中氣質聯用色譜條件為程序升溫40°C保持lOmin，然後以10°C /min的速度升至170°C並保持IOmin ；進樣口溫度200°C ；恆定流速1. OmL/min ；不分流；檢測器溫度250°C ；頂空溫度150°C ；頂空時間:30min。本發明所述的相似度匹配是使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統Q004A版， 國家藥典委員會)進行相似度分析，相似度在800以上可以認為是相匹配的峰，所述相似度分析的計算原理為夾角餘弦。此外，為了驗證本發明方法的重複性，還可以在建立資料庫後增加確定每種揮發性物質的時間窗的步驟。本發明方法在氣相色譜的進樣系統後增加了一個雙通道或三通道的分流管，每個通道有獨立的開關控制其流通量，分流管後至少並列連接兩個極性相反的色譜柱，從而實現了並聯使用兩個極性相反的色譜柱的目的，其能夠在保證進樣樣品和進樣條件一致性的同時，使得在一根色譜柱上保留時間相同或相近的揮發性物質在極性相反的色譜柱上有相差較大的保留時間。具體地說，本發明方法中使用的氣相色譜，當使用雙通道的分流管時，與之並列連接的是兩根極性相反的色譜柱；當使用三通道的分流管時，與之並列連接的除了上述極性相反的色譜柱外，還有質譜分析系統，使質譜分析系統與氣相色譜構成並列運作的分析系統。所述分流管可以是玻璃管、不鏽鋼管等現有色譜儀器中可以使用的材質製備的分流管，對其形狀、大小等沒有特別限制，可以根據不同型號的儀器進行選擇。所述分流管可以以可拆卸的方式應用於氣相色譜中；也可以將其固定在氣相色譜儀或氣質聯用儀器中， 此時通過控制每個通道的開關來選擇不同的檢測系統，例如為單色譜柱、雙色譜柱、或氣相和質譜並用檢測系統。本發明的檢測方法，針對現有技術的不足，將極性相反的兩個色譜柱並聯使用，在保證進樣樣品和進樣條件一致性的同時，使得在一根色譜柱上保留時間相同或相近的揮發性物質在極性相反的色譜柱上有相差較大的保留時間。通過將兩根色譜柱測定後的保留時間與資料庫進行比較，結果可以在沒有標準品的情況下進行定性分析，初步確定藥用膠塞中揮發性物質的種類，從而避免了對未知峰進行盲目篩選。當測量過程中出現未知色譜峰需要進一步確定時，可以使用與色譜柱系統並聯的質譜分析系統同時檢測，綜合所得結果進行確定。此外，由於同一種揮發性物質在極性不同的色譜柱上的保留時間不同，相對保留時間也不同，因此通過聯用質譜來確定同一揮發性物質在兩種色譜柱上的保留時間，並把這兩個保留時間聯繫起來，形成互為佐證的一個系統，並通過質譜的NIST資料庫提供的結構式，並用有機化合物命名法命名，從而對揮發性物質進行歸類，從而建立膠塞揮發性物質的資料庫。本發明的優點在於，本發明方法能夠使同一樣品在一次實驗中同時得到兩組數據，大大節省了定性篩選的試驗時間，並可以有效排除共出峰的幹擾；通過建立膠塞揮發性物質的資料庫，可以快速全面地對膠塞揮發性物質進行篩選，不局限於具體品種，是通用型資料庫；另外，本發明方法易於推廣。
圖1為雙通道並聯色譜柱系統模式圖；圖2為膠塞揮發性物質極性色譜系統擬合圖譜；圖3為膠塞揮發性物質非極性色譜系統擬合圖譜。
具體實施例方式以下通過具體實施例進一步說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。實施例1膠塞揮發性物質資料庫的建立儀器和軟體1 (氣相)Trace GC Ultra (熱電公司)；頂空系統(熱電公司)；數據分析軟體為)(calibur 數據處理系統(熱電公司)；色譜柱SPB-I型非極性色譜柱(30mX0.32mmXlum， supelco)，HP-FFAP型極性色譜柱(30mX0. 32mmX0. 52um,安捷倫公司)，各部件連接示意圖如圖1所示。色譜條件1 (氣相)程序升溫40°C保持lOmin，然後以10°C /min的速度升至170°C並保持IOmin ；進樣口溫度:200°C;恆定流速2. OmL/min ；載氣氦氣；分流比5 1 ；檢測器溫度250°C;頂空溫度:150°C ；頂空時間:30min。儀器和軟體2 (氣質聯用)Trace GC Ultra-Polaris Q(熱電公司)；頂空系統(熱電公司)；數據分析軟體為kalibur數據處理系統(熱電公司)；色譜柱SPB-I型非極性色譜柱 (30mX0. 25mmX 0. 25um, supelco)，HP-FFAP 型極性色譜柱(30mX 0. 25mmX 0. 25um，安捷倫公司)。色譜條件2 (氣質聯用)程序升溫40°C保持lOmin，然後以10°C /min的速度升至170°C並保持IOmin ；進樣口溫度200°C ；恆定流速1. Oml/min ；不分流；檢測器溫度250°C ；頂空溫度150°C ；頂空時間:30min。BHT參比物質的配置精密稱取5mgBHT，與50g分析純氯化鈉在研缽中混合併研製均勻，製成濃度0. 1 μ g/mg的參比物。建庫樣品氯化丁基橡膠塞(江陰蘭陵、山東藥玻)、溴化丁基橡膠塞(江蘇博生醫用材料股份有限公司、安徽華峰、成都南環)、丁基橡膠塞(重慶三海蘭陵公司)。內標物苯、甲苯、乙酸丁酯、四氫化萘、正丁醇、正戊醇及2，6_ 二叔丁基對甲酚。步驟(1)在上述給定的色譜條件1下，以甲烷測定死時間，分別測定建庫樣品中的揮發性物質在極性與非極性色譜柱(兩個色譜系統)上的保留時間；以BHT的調整保留時間作為參比，計算每種揮發性物質的調整相對保留時間，結果見表1，其中Tk(min)為保留時間， RART為調整相對保留時間；(2)在上述給定的色譜條件2下，用質譜檢測器對上述標準樣品中的揮發性物質進行檢測，結果見表2;(3)在標準樣品中加入多種不同的內標物，重複步驟(1)、O)，然後分別對並聯的極性和非極性色譜柱系統在FID檢測器上得到的揮發性物質的峰與在質譜檢測器上得到的揮發性物質的峰進行匹配，結果見表3 4 ；所述匹配是用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統O004A版，國家藥典委員會)進行相似度分析，相似度在800以上可以認為是相匹配的峰；(4)然後根據匹配結果，建立標準樣品的揮發性物質在極性相反的兩個色譜柱的峰之間的對應關係(如表5所示)，及其與質譜圖之間的對應關係，並根據質譜對揮發性物質進行歸類，從而建立膠塞中揮發性物質資料庫，結果如表6所示；(5)確定每種揮發性物質時間窗，以驗證本發明方法的重複性，結果見表7。表1氣相中膠塞揮發性物質的的保留時間和相對保留時間
權利要求
1.膠塞中揮發性物質的檢測方法，其包括如下步驟1)資料庫的建立a、用極性相反的兩個色譜柱對建庫樣品中的揮發性物質進行氣相色譜分析，然後以2， 6-二叔丁基對甲酚為參比物質，分別計算各色譜峰的相對保留時間；b、然後再用所述極性相反的兩個色譜柱對所述建庫樣品中的揮發性物質進行氣質聯用分析，分別對所述建庫樣品中的揮發性物質進行定性分析，確定其所屬種類；C、在所述建庫樣品中加入內標物，重複步驟a、b，然後將氣相色譜檢測器上的經由所述極性相反的兩個色譜柱得到的色譜峰，分別與質譜檢測器上得到的峰進行相似度匹配；d、根據步驟c的相似度匹配結果，建立所述極性相反的兩個色譜柱的色譜峰之間的對應關係，及其與質譜圖之間的對應關係，並根據質譜結果進行歸類，從而建立資料庫；2)待測膠塞中揮發性物質的測定e、用所述極性相反的兩個色譜柱對待測膠塞中的揮發性物質進行氣相色譜分析，並根據步驟a方法計算兩個色譜柱的各色譜峰的相對保留時間；f、將步驟e得到的相對保留時間與步驟1)的資料庫相比較，從而確定待測膠塞中含有的揮發性物質的種類。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，所述建庫樣品包括丁基膠塞、溴化丁基膠塞及氯化丁基膠塞。
3.根據權利要求1或2所述的檢測方法，其特徵在於，所述建庫樣品還包括聚乙烯脂， 酚醛樹脂、硬脂酸、溴化丁基膠塞原膠，氯化丁基膠塞原膠及俄羅斯膠。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，所述內標物為苯、甲苯、乙酸丁酯、 四氫化萘、正丁醇、正戊醇或2，6_ 二叔丁基對甲酚。
5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特徵在於，所述極性相反的兩個色譜柱是指在氣相色譜中並聯的兩個極性相反的色譜柱。
6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特徵在於，所述極性相反的兩個色譜柱為非極性色譜柱和極性色譜柱。
7.根據權利要求1任意一項所述的檢測方法，其特徵在於，步驟a中所述氣相色譜的色譜條件為程序升溫40°C保持lOmin，然後以10°C /min的速度升至170°C並保持IOmin ；進樣口溫度:200°C;恆定流速2. OmL/min ；載氣氦氣；分流比5 1 ；檢測器溫度250°C;頂空溫度:150°C ；頂空時間:30min。
8.根據權利要求1任意一項所述的製備方法，其特徵在於，步驟b中所述氣質聯用的色譜條件為程序升溫40°C保持lOmin，然後以10°C /min的速度升至170°C並保持IOmin ；進樣口溫度200°C ；恆定流速1. OmL/min ；不分流；檢測器溫度250°C ；頂空溫度150°C ；頂空時間30min。
全文摘要
本發明提供了一種膠塞中揮發性物質的檢測方法，其包括如下步驟1)建立膠塞中揮發性物質資料庫；2)測定待測膠塞中揮發性物質。本發明的優點在於，本發明方法能夠使同一樣品在一次實驗中同時得到兩組數據，大大節省了定性篩選的試驗時間，並可以有效排除共出峰的幹擾；通過建立膠塞揮發性物質的資料庫，可以快速全面地對膠塞揮發性物質進行篩選，不局限於具體品種，是通用型資料庫；另外，本發明方法易於推廣。
文檔編號G01N30/88GK102375043SQ20101026361
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月25日 優先權日2010年8月25日
發明者崇小萌, 張宇, 胡昌勤 申請人:中國藥品生物製品檢定所