一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙的製作方法
2023-05-17 05:26:16
專利名稱：一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙的製作方法
技術領域：
種卵泡刺激素膠體金診斷試紙技術領域本發明涉及一種通過檢測人體尿液中的卵泡刺激素，檢測女性卵巢功能的試紙，屬於膠 體金免疫診斷技術領域。
技術背景卵泡剌激素(FSH)是正常存在於血液和尿液中的腦垂體分泌的肽激素，濃度隨月經周 期變化。當雌激素水平下降時，FSH就從垂體中釋放出來，表示女性處於月經中或開始更年 期。在停經早期，調控月經周期的激素失衡。隨著女性年齡的增長，超過了育齡期，卵巢產 生的雌激素逐漸減少，FSH水平就會升高。FSH正常調節卵的生長發育，月經結束，FSH分 泌就會停止，然後恢復正常。雌激素隨著年齡的增長而分泌減少，FSH分泌就會增加。這些 激素隨時間逐漸變化，月經周期最後完全停止，就叫停經。末次月經後2-10年，卵巢功能逐 漸退化。停經前的早期階段就叫更年期。在這期間，FSH水平可能上升然後緩慢恢復正常， 引起月經紊亂或月經不來。因此每月應該做2次檢測，來幫助確定月經周期中FSH的水平。目前，卵泡刺激素的測定多採用放射免疫法、螢光免疫法或酶標免疫法，這些方法需要 特殊防護設備、價格昂貴的儀器和訓練有素的人員，而且操作費時，不易於推廣應用。發明內容本發明克服了現有技術中存在的一些缺點，提供了一種通過膠體金免疫法檢測人體尿液 中的卵泡刺激素，從而體外定性檢測女性卵巢功能是否衰退。適用於各類大中型醫療單位以 及臨床檢測中心做定性分析用。本發明是通過以下技術方案實現的-在卵泡刺激素膠體金診斷試紙底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗線 和一條羊抗鼠多克隆抗體控制線，在底板一端端頭為吸水層，另一端端頭為樣品吸液層，硝 酸纖維素膜兩端分別與吸水層和單克隆抗體金標墊相互交疊連接(交疊連接部分在l一2毫米 範圍)，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層。通過免疫篩選出兩種不同單抗， 一種稱為FSH單克隆抗體I用於包被試驗線，另一種稱 為FSH單克隆抗體II用於膠體金標記，共同與免疫原有親合作用，利用雙抗夾心法原理製成 的試紙。把卵泡刺激素膠體金診斷試紙的樣品吸液層端放入待測的尿液中(液面不得超過MAX 線)，由於毛細管作用尿液將沿著試紙條吸水層端移動，當移動至FSH單克隆抗體II金標墊 時，尿液中的FSH與抗FSH單克隆抗體金標探針發生特異結合，當移動至固定有FSH單克 隆抗體I的試驗線時，尿液中的FSH另一位點又與試驗線中的FSH單克隆抗體相結合，因 此其膠體金滯留於試驗線上,試驗線處顯示紅色，為陽性；相反如果尿液中沒有FSH，抗FSH 單克隆抗體金標探針就不會與試驗線上的FSH單克隆抗體I發生特異結合，沒有膠體金滯留。 即僅有一條紅色控制線為陰性，這就是雙抗夾心法原理。根據此原理，兩條線為陽性， 一條 線為陰性得出診斷。當移動至羊抗鼠多克隆抗體控制線時，無論尿液中有無FSH，標記的金標探針都會與己 設定好的羊抗鼠多克隆抗體結合滯留，使控制線顯示紅色。因此控制線無色帶產生則代表操 作有誤，檢測時尿液液面超過MAX線或試紙已經過期。由於採用上述技術方案，本發明所提供的奶牛早期妊娠診斷試紙及其檢測方法具有這樣 的有益效果，即特異性強，靈敏度高，易儲存，無須專門技術人員操作，而且結果易讀。
圖l為本發明的主視結構圖。
圖2為圖1的俯視剖視結構圖。圖3為陰性結果圖。圖4為陽性結果圖。圖中1、吸水板，2、硝酸纖維素膜，3、羊抗鼠多克隆抗體控制線，4、試驗線，5、單 克隆抗體金標墊，6、樣品吸液層，7、底板，8、 MAX線。 具體實施例1. 化學合成方法合成兩種不同結合位點的FSH免疫原(FSH-BSA)。2. FSH單克隆抗體的製備。(1) 將製備的兩種不同結合位點的FSH-BSA分別免疫BALB/c小鼠。用SP20細胞融合建 立瘤株進行篩選，取瘤細胞注射於BALB/c小鼠腹腔，使其產生腹水。(2) 提取小鼠腹水純化篩選，獲得與FSH分子不同位點結合的兩種FSH單克隆抗體I、 FSH單克隆抗體n。3. 膠體金的製備及與FSH單克隆抗體的結合。(1) 取雙蒸水加適量的氯金酸磁力攪拌加溫到90 95X:,加入適量枸櫞酸三納繼續加熱 攪拌至沸騰5分鐘，冷卻後避光保存備用。(2) 把FSH單克隆抗體標記的膠體金液，吸附纖維材料上，乾燥後備用。4. 制膜機制膜利用電腦控制傳動速度，保證每單位膜上包被的抗體量相等。5. 試紙條組合按公知技術組合。6. 使用方法選擇一天中方便的時候檢測(每天最好在同一時間進行檢測，檢測晨尿效果最 佳)，將試紙吸液層端插入尿液中，待測樣本界面勿超過診斷試紙上的"MAX"線，5分鐘內 觀察結果。顯色區為兩條紅色線，且檢測線比控制線顏色深或相等，則檢測結果為陽性， 說明可能處於圍絕經期；當反應線淺於控制線或僅出現一條控制線時為陰性，檢測樣本很 可能處於基礎FSH水平；控制線未出現色帶，表明試紙過期或操作不當，請另取試紙 重新檢測。
權利要求1一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙，其特徵在於是由底板(7)、吸水板(1)、硝酸纖維素膜 (2)、單克隆抗體金標墊(5)、樣品吸液層(6)、 MAX線(8)組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗線(4)和一條多克隆抗體控制線(3)，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層。 2.根據權利要求1所述的一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙，其特徵在於控制線是由羊抗鼠多克隆抗體包被而成。
專利摘要本實用新型涉及一種卵泡刺激素膠體金診斷試紙，通過檢測人體尿液中的卵泡刺激素，從而體外定性檢測女性卵巢功能是否衰退，屬於膠體金免疫檢測領域。試紙是由底板、吸水板、硝酸纖維素膜、單克隆抗體金標墊、樣品吸液層、MAX線組成；底板中部為硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上有一條試驗線和一條多克隆抗體控制線，底板一端端頭為吸水板，另一端端頭為樣品吸液層，硝酸纖維素膜兩端分別與吸水板和單克隆抗體金標墊相互交疊連接，在單克隆抗體金標墊上壓有樣品吸液層，通過膠體金免疫雙抗夾心方法製成試紙。本實用新型具有特異性強，靈敏度高，易儲存，結果易讀，無須專門技術人員操作的優點。
文檔編號G01N33/558GK201021926SQ20072000514
公開日2008年2月13日 申請日期2007年2月14日 優先權日2007年2月14日
發明者萬志強, 萬志靜 申請人:萬華普曼生物工程有限公司