海南地不容總生物鹼提取物及其製備方法
2023-04-29 07:12:41
專利名稱：海南地不容總生物鹼提取物及其製備方法
技術領域：
本發明屬於製藥技術領域，具體涉及一種海南地不容總生物鹼提取物及其製備方法。
背景技術：
海南地不容(Stephania hainanensis H. S. Lo et Y. Tsoong)為防己科千金藤屬山烏龜亞屬植物。又名金不換、山烏龜、一文錢，其塊根入藥，味苦，性寒，有小毒。有清熱解毒、截瘧、鎮痛的功能，用於癰疽腫毒、喉閉、瘧疾、胃痛。海南地不容中的生物鹼成分，根據已有研究成果顯示含克班寧、脫氫克班寧、氧代克班寧、延胡索乙素、巴馬汀、I-紫堇單酚鹼、異斯庫來鹼、d—斯蒂酚靈鹼、高阿莫林鹼、粉防己鹼、千金藤定鹼、青風藤鹼、防己諾林鹼等，其主要活性成分防己諾林鹼(Fangchinoline)具有抗炎、鎮痛、降壓、抗腫瘤、抗血小板聚集作用；延胡索乙素(Tetrahydropalmatine)是一種活性強的生物鹼,現代藥理研究表明其能抑制神經中樞，有鎮痛、鎮靜、催眠、安神作用；粉防己鹼(Tetrandrine)為雙苄基異喹啉類生物鹼，對心臟有負性肌力、負性頻率和負性傳導作用，其降壓時無反射性心率增快，並有肌松、解熱、鎮痛和抗炎作用。巴馬汀(Palmatine)具有廣譜抗細菌感染、抗病毒作用，可以明顯增加白細胞吞噬細菌的能力。由於成癮性小，並具有類似與嗎啡的鎮痛作用，防己科千金藤屬部分藥用植物已應用於中藥戒毒領域並取得了一定成效[張嚴，徐羽，崔箭，等.彝藥金不換戒毒作用的有效成分確定[J].中央民族大學學報(自然科學版)，2007，16 (4) :361]。目前對海南地不容生物鹼的提取，文獻報導的有甲醇浸泡，超聲輔助提取[黃建明，郭濟賢，段更利.RP-HPLC法測定千金藤屬植物中7種生物活性生物鹼[J].藥學學報，1998，33 (7) :528]，或95%乙醇冷浸滲漉，有機溶劑分段萃取得不同有效部位[方聖鼎，徐學健，陳燃，鍾義.千金藤屬生物鹼的研究VI海南地不容中的生物鹼[J].中草藥，1987，18 (4) :2-5]，均用於海南地不容生物鹼成分的分析，而非製備用。申請號為200810025776. 3的專利文獻提到一種金不換(廣西地不容、小花地不容或桂南地不容的乾燥塊根)總生物鹼的製備方法取藥材粗粉，加入乙醇滲漉或回流，減壓回收乙醇後的到的稠膏用酸溶，過濾，濾液過大孔樹脂柱或強酸性陽離子交換樹脂，洗脫液減壓回收溶劑，濃縮，乾燥，即得。申請號為200710301389. 3的專利文獻公開了一種金不換(Stephania)戒毒作用有效成分的提取方法金不換塊根粉碎，50 90%酸性乙醇溶液回流提取，提取液在溫度為60 80°C條件下減壓濃縮的稠膏，稠膏在相同條件下減壓乾燥得幹浸膏粉，然後以氯仿醋酸乙酯對幹浸膏粉回流提取，合併提取液並減壓回收至幹即得。申請號為200810119399. X的專利文獻公開了山烏龜(Stephania delavayi Diels)提取物的新用途，其中涉及的提取物製備方法如下用水和/或有機溶劑如甲醇乙醇石油醚氯仿等在溫度為60 100°C條件下回流提取。上述製備方法均涉及到乙醇回流提取，而地不容中的生物鹼活性成分延胡索乙素易受光照和溫度的影響，脫氫氧化為結構穩定的巴馬汀，加熱回流過程可能造成其損失，導致藥效活性的降低。目前，對海南地不容總生物鹼的研究報導較少，製備出純度較高，藥效活性較大的海南地不容總鹼提取物對開發海南熱帶藥用植物資源具有重要意義。
發明內容
本發明的目的是提供一種純度較高、藥效活性較大的海南地不容總生物鹼提取物。 本發明的另一目的是提供一種海南地不容總生物鹼提取物的製備方法。本發明以海南地不容的塊根為原料，採用酸水冷浸，超聲輔助提取的方式提取，具體步驟如下(I)原料準備將海南地不容塊根去除泥沙，切片後陰涼處風乾或低溫烘乾，粉碎，作為加工的原料。⑵浸泡原料加入3 15倍體積、濃度為0. 01 10%的鹽酸或硫酸溶液浸泡I 72小時。⑶超聲超聲提取I 4次，每次15 45分鐘。⑷過濾提取液過濾後合併，進行下一步處理。過濾包括離心、抽濾、超濾、壓濾等方法，使用或不使用澄清劑。(5)純化提取液用同等濃度的酸水稀釋I 5倍後(上樣濃度為0. I lmg/ml，以總生物鹼量計)過強酸性陽離子交換樹脂柱，流速0. 5 5ml/min，水洗脫至無多糖反應；再用2 12%氨水乙醇洗脫，收集洗脫液，合併。(6)乾燥將洗脫液減壓回收溶劑至幹，即得海南地不容總生物鹼提取物。上述方法所製備的提取物可以加入各種輔料和藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學上常規的賦形劑、粘合劑、稀釋劑、填充劑、溼潤劑、崩解劑、表面活性劑、潤滑劑
坐寸o上述方法所製備的提取物可以按照藥學領域的常規方法製備多種劑型，如注射液、片劑、粉劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服液、糖漿、膏劑、霜劑、散劑等。本發明總鹼提取物含量測定可採用以下方法中的一種或兩種I.總生物鹼含量測定精密稱取延胡索乙素對照品約2mg，置IOOml棕色容量瓶中，用枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩衝液(PH = 4)溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。分別精密吸取對照品溶液2、3、4、5、6、7ml置分液漏鬥中，各加入溴甲酚綠2ml，枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩衝液(ph = 4)分別為6、5、4、3、2、lml,氯仿IOml,充分振搖後,靜置Ih,取氯仿層於412nm處測定吸光度值。以延胡索乙素對照品溶液的質量濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標繪製標準曲線。精密稱取海南地不容總鹼提取物約5mg，置50ml棕色容量瓶中，用枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩衝液(pH = 4)溶解並稀釋至刻度，搖勻。精密吸取Iml置分液漏鬥中，加入溴甲酚綠2ml，枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩衝液(ph = 4)7ml，氯仿10ml，充分振搖後，靜置lh，取氯仿層於412nm處測定吸光度值，依線性方程計算即得。2.巴馬汀、延胡索乙素、防己諾林鹼含量測定色譜條件色譜柱Hypersil_C180DS2(4. 6mmX 250mm, 5 u m);流動相甲醇-0. I %三乙胺，流速=ImL mi n—1 ;柱溫25 °C ;檢測波長28 Inm ;進樣量10u I0線性關係分別精密吸取鹽酸巴馬汀對照品溶液(濃度為5，10，15，20，25，30iil，延胡索乙素對照品溶液(濃度為 0. 0326mg 111^)3,5,10,15,20,25 u 1，防己諾林鹼對照品溶液(濃度為0. 48mg mL—1) 3，5，10，15，20 u 1，在上述色譜條件下依次進樣，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪製標準曲線。精密稱取海南地不容總鹼提取物約25mg，置50ml量瓶中，加入甲醇超聲使溶解，並稀釋至刻度，搖勻，用0.45iim微孔濾膜濾過，取續濾液即得供試品溶液。以IOiU進樣，測定相應峰面積，計算含量。本發明海南地不容總鹼提取物中總鹼的重量百分含量為70% 80%，巴馬汀的重量百分含量為20 30%,延胡索乙素的重量百分含量為3 5%,防己諾林鹼的重量百分含量為40 50%。以下是相關藥效學實驗I、海南地不容對醋酸致小鼠炎性疼痛的作用方法昆明小鼠50隻，體重18 22g，雌雄各半，隨機分為5組，分別為陽性對照組(阿司匹林0. 2g/kg)、溶劑對照組(0. 5% CMC-Na)海南地不容總鹼6mg/kg、12mg/kg、24mg/kg三個劑量組，灌胃給藥，0. 4ml/10g體重，連續5天，末次給藥後I. Oh腹腔注射0. 6%醋酸
0.2ml/只，記錄15分鐘內小鼠扭體次數，並計算抑制率。結果如表I所示，海南地不容總鹼高、中劑量組和陽性對照組對醋酸所致的炎性疼痛均有明顯的抑制作用，差異顯著，而相對於給藥劑量來說，給藥組的高、中劑量組給藥量分別小於陽性對照組的1/8和1/16，表明海南地不容總鹼的鎮痛作用較阿斯匹林更為顯著。表I海南地不容對醋酸致小鼠炎性疼痛作用
組別劑量(mg/kg) 扭體次數抑制率(％)
陽性對照組20014.8 + 13.1 *56.85
溶劑對照組----34.3 ±18.12
給藥高劑量組2415.1 ±11.47 *55.98
給藥中劑量組1219.4 ±11.32**43.44
給藥低劑量組627.9± 14.7818.66與溶劑對照組比較，*p < 0. 02，林p < 0. 052、海南地不容總鹼對二甲苯之小鼠耳廓腫脹急性炎症的作用方法昆明小鼠50隻，體重18 22g，雄性，隨機分為5組，分別為陽性對照組(阿司匹林0. 2g/kg)、溶劑對照組(0. 5% CMC-Na)海南地不容總鹼6mg/kg、12mg/kg、24mg/kg三個劑量組，灌胃給藥，0. 4ml/10g體重，連續5天，末次給藥後I. OhdfO. Iml 二甲苯均勻塗於小鼠右耳兩面致炎，左耳不塗作為對照。致腫I. Oh脫頸椎處死小鼠。用直徑8_的打孔器於兩耳同一部位取材，稱重。計算兩者的重量差及抑制率。結果如表2所示，海南地不容總鹼高、中劑量組和陽性對照組對二甲苯所致的耳廓腫脹均有明顯的抑制作用，差異顯著，而相對於給藥劑量來說，給藥組的高、中劑量組給藥量分別小於陽性對照組的1/8和1/16，表明海南地不容總鹼的抗炎作用遠勝於阿斯匹林。表2海南地不容總鹼對二甲苯之小鼠耳廓腫脹的作用(n = 10)
權利要求
1.海南地不容總生物鹼提取物製備方法，包括 (1)原料準備 將海南地不容塊根去除泥沙，切片後陰涼處風乾或低溫烘乾，粉碎，作為加工的原料。
(2)浸泡 原料加入3 15倍體積，濃度為O. Ol 10%的鹽酸或硫酸溶液浸泡I 72小吋。
(3)超聲提取I 4次。
(4)過濾 提取液過濾後合併，進行下一歩處理。
(5)純化 提取液用同等濃度的酸水稀釋I 5倍後(上樣濃度為O. I lmg/ml，以總生物鹼量計)過強酸性陽離子交換樹脂柱，水洗脫至無多糖反應；再用2 12%氨水こ醇洗脫，收集洗脫液，合併。
(6)乾燥 將洗脫液回收溶劑至幹，即得海南地不容總生物鹼提取物。
2.根據權利要求I所述的海南地不容總生物鹼提取物，其特徵在於該提取物由黎藥海南地不容塊根中提取獲得，並含有以下生物鹼成分防己諾林鹼、延胡索こ素、巴馬汀、粉防已鹼等。
3.根據權利要求I所述的海南地不容總生物鹼提取物，其特徵在於總生物鹼類成分總合以重量計為5 100%。
4.根據權利要求I所述的海南地不容總生物鹼提取物，其特徵在於其生物鹼類成分還包括與某些酸如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸等無機酸或甲酸、醋酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸等有機酸形成的鹽，以及與鈉、鉀、鈣、鐵、鋁、鋅、銅、鉻、鍶等金屬離子形成的金屬鹽或絡合物。
5.根據權利要求I 4所述的海南地不容總生物鹼提取物，其特徵在於，所述的提取液通過酸水提取法或由甲醇、こ醇等溶劑提取，回收溶劑後溶於適當濃度的酸水液得到。
6.根據權利要求1、5所述的海南地不容總生物鹼提取物製備方法，其特徵在於，所述的陽離子交換樹脂可以是強酸性、弱酸性、大孔型、凝膠型等任何ー種類型，如001X3、001 X 7、D072等，優選強酸性陽離子交換樹脂。
7.根據權利要求I 4所述的海南地不容總生物鹼提取物的應用，其特徵在於，該提取物可以單獨或與其他任何中西藥物或食物按任意比例配伍，製備成任何劑型。
全文摘要
本發明屬於製藥技術領域，具體公開了一種從海南地不容塊根種提取得到的總生物鹼提取物及其製備方法。其製備過程如下原料(海南地不容乾燥塊根)-粉碎-加入適量0.01～10％的鹽酸或硫酸浸泡-超聲提取1～4次-過濾-強酸性陽離子交換樹脂純化-回收溶劑至於-海南地不容總生物鹼提取物。該提取物主要包括左旋四氫巴馬汀、巴馬汀、防己諾林鹼、粉防已鹼等有效成分，海南地不容總生物鹼的重量百分含量大於或等於70％，巴馬汀的重量百分含量大於或等於20％，防己諾林鹼的重量百分含量大於或等於40％。查閱相關文獻，至今未見對海南地不容總生物鹼提取製備工藝的報導，本法操作流程簡單，產品純度較高，藥效作用明顯，適用於工業化生產和當地海南地不容藥材資源的開發利用。
文檔編號A61P29/00GK102670720SQ20111007136
公開日2012年9月19日 申請日期2011年3月16日 優先權日2011年3月16日
發明者朱毅 申請人:朱毅