短小芽孢桿菌的培養方法

2023-05-23 06:15:36

短小芽孢桿菌的培養方法
【專利摘要】本發明公開了一種短小芽孢桿菌的培養方法，包括菌種活化，菌種發酵培養，菌種三角瓶培養，發酵罐培養的步驟。通過本發明所培養的短小芽孢桿菌的蛋白酶活力非常高。
【專利說明】短小芽孢桿菌的培養方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明屬於生物【技術領域】，具體涉及短小芽孢桿菌的培養方法。
[0003]
【背景技術】
[0004]短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)為芽孢桿菌屬，菌體細杆狀，一般為0.6—
0.7 μ mX 2.0一3.0 μ m,革蘭氏陽性。B.pumilus存在半透明型和不透明型兩種不同的菌落形態，對兩種菌落分別進行傳代，半透明菌落能產生半透明和不透明型菌落，且基本各佔一半。而不透明菌落在傳代過程中只產生少許的半透明菌落，且傳至第4代時半透明型菌落消失。主要用於防治小麥根腐病和草莓灰黴病。通過培養短小芽孢桿菌可獲得具有蛋白酶活力的菌液，而現有培養短小芽孢桿菌的方法所獲得的菌液蛋白酶活力不高。
[0005]

【發明內容】

[0006]為了克服現有【技術領域】存在的上述缺陷，本發明的目的在於，提供一種短小芽孢桿菌的培養方法，解決現有技術 培養短小芽孢桿菌的方法所獲得的菌液蛋白酶活力不高的問題。
[0007]本發明提供的短小芽孢桿菌的培養方法，包括以下步驟:
一、菌種活化，短小芽孢桿菌保存菌劃線於平板培養基上，37°C培養24h；
二、菌種發酵培養，將活化後的菌種轉接入IOml種子發酵培養基中，37°C培養48h；
三、將發酵培養好的菌種接種於1000ml三角瓶，37°C培養48h；
四、將在三角瓶培養好的菌種接種於IOL種子發酵罐，37°C培養44h，轉速為150r/min，通氣量為0.4vvm。
[0008]所述步驟一中平板培養基是由5g蛋白腖,Ig酵母膏,0.1g磷酸高鐵，20g瓊月旨，適量海水經121°C滅菌30min配置而成，pH 7.6 ;所述步驟二中種子發酵培養基或步驟三中三角瓶發酵培養基均是由5g蛋白腖，5g葡萄糖，0.1g Na2HPO4,0.1g CaCl2,801ml吐溫經121°C滅菌30min配置而成，pH 7.0 ;所述步驟四中所用培養基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白腖，IOg 乾酪素，Ig KH2PO4 ,0.2 g MgSO4.7Η20，0.I g CaCl2.2H20 經 121°C滅菌 20min配置而成，pH值為7.0。
[0009]本發明提供的短小芽孢桿菌的培養方法，其有益效果在於，通過本發明所培養的短小芽孢桿菌的蛋 白酶活力非常高。
[0010]
【具體實施方式】[0011]下面結合一個實施例，對本發明提供的短小芽孢桿菌的培養方法進行詳細的說明。
[0012]
實施例
[0013]本實施例的短小芽孢桿菌的培養方法，包括以下步驟:
一、菌種活化，短小芽孢桿菌保存菌劃線於平板培養基上，37°C培養24h；
二、菌種發酵培養，將活化後的菌種轉接入IOml種子發酵培養基中，37°C培養48h；
三、將發酵培養好的菌種接種於1000ml三角瓶，37°C培養48h；
四、將在三角瓶培養好的菌種接種於IOL種子發酵罐，37°C培養44h，轉速為150r/min，通氣量為0.4vvm。
[0014]所述步驟一中平板培養基是由5g蛋白腖,Ig酵母膏,0.1g磷酸高鐵，20g瓊脂,適量海水經121°C滅菌30min配置而成，pH 7.6 ;所述步驟二中種子發酵培養基或步驟三中三角瓶發酵培養基均是由5g蛋白腖，5g葡萄糖，0.1g Na2HPO4,0.1g CaCl2,801ml吐溫經121°C滅菌30min配置而成，pH 7.0 ;所述步驟四中所用培養基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白腖，IOg 乾酪素，Ig KH2PO4 ,0.2 g MgSO4WH2O ,0.1 g CaCl2CH2O 經 121°C滅菌 20min 配置而成，pH值為7.0。
[0015]經蛋白酶活力檢測,短小芽 孢桿菌的酶活力高達8000U/mL。
【權利要求】
1.一種短小芽孢桿菌的培養方法，其特徵在於:包括以下步驟: 一、菌種活化，短小芽孢桿菌保存菌劃線於平板培養基上，37°c培養24h； 二、菌種發酵培養，將活化後的菌種轉接入IOml種子發酵培養基中，37°C培養48h； 三、將發酵培養好的菌種接種於1000ml三角瓶，37°C培養48h； 四、將在三角瓶培養好的菌種接種於IOL種子發酵罐，37°C培養44h，轉速為150r/min，通氣量為0.4vvm。
2.根據權利要求1所述的短小芽孢桿菌的培養方法，其特徵在於:所述步驟一中平板培養基是由5g蛋白腖，Ig酵母膏，0.1g磷酸高鐵，20g瓊脂，適量海水經121°C滅菌30min配置而成，pH 7.6。
3.根據權利要求1所述的短小芽孢桿菌的培養方法，其特徵在於:所述步驟二中種子發酵培養基或步驟三中三角瓶發酵培養基均是由5g蛋白腖，5g葡萄糖，0.1g Na2HP04,0.1gCaC12,801ml 吐溫經 121°C滅菌 30min 配置而成，pH 7.0o
4.根據權利要求1所述的短小芽孢桿菌的培養方法，其特徵在於:所述步驟四中所用培養基是由30 g葡萄糖，50 g蛋白腖，IOg乾酪素，Ig KH2P04 ,0.2 g MgS04*7H20 ,0.1 gCaC12*2H20經121°C滅菌20`min配置而成，pH值為7.0。
【文檔編號】C12N1/20GK103881942SQ201210561071
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2012年12月21日 優先權日:2012年12月21日
【發明者】張述智, 夏偉, 朱紹輝, 張 浩, 王曉麗, 徐權汗, 李之詳, 許團輝 申請人:青島中仁藥業有限公司