一種從千層塔中提取分離高純度石杉鹼甲的新方法

2023-05-20 10:49:41 1

專利名稱：一種從千層塔中提取分離高純度石杉鹼甲的新方法
技術領域：
本發明涉及一種從中草藥千層塔中提取分離高純度石杉鹼甲的方法。
背景技術：
千層塔是蕨類植物石杉科石杉屬蛇足石杉的全草，民間應用於散瘀化血、消腫止 疼、除溼、清熱解毒。其所含生物鹼石杉鹼甲和石杉鹼乙具有很強的抑制膽鹼脂酶活性，臨 床實驗證實石杉鹼甲對治療早老性痴呆有顯著療效。從千層塔中提取的石杉鹼甲，是中國 獨創的一種新藥。屬於可逆性膽鹼酯酶抑制劑，是目前治療良性記憶障礙和早老性痴呆症 最為安全有效的藥物之一。 現已有文獻報導提取製備石杉鹼甲的方法。 沈生榮等〔石杉鹼甲提取工藝研究，浙江大學學報(農業與生命科學版)2002， 28(6) ，591-595〕系統研究了石杉鹼甲的提取工藝。系用有機酸浸提、萃取、反萃取、脫色和 重結晶等化學分離技術從千層塔中提取、純化石杉鹼甲。可得到純度大於99%的高純度石 杉鹼甲。 楊明等〔HPLC法製備石杉鹼甲，解放軍藥學學報2003，19 (5) ，352-354〕建立了用 製備型HPLC製備石杉鹼甲的方法。用常規的方法提取出石杉總生物鹼，總生物鹼經HPLC 直接進樣，以氯仿-甲醇-氨水(840 : 24 : 1.2)為流動相，可得到純度大於90%的石杉 鹼甲。 劉建廷等〔石杉鹼甲提取工藝研究，天然產物研究與開發2006， 18 :298-301〕研究 了以蛇足石杉為原料，採用生物鹼分離的傳統方法，通過鹽酸浸提，氯仿萃取來製取純化石 杉鹼甲。 陳建華等〔高速逆流色譜技術製備石杉鹼甲單體，中國現代應用藥學雜誌2006， 23(4) ，295-297〕運用高速逆流色譜技術，以n-Hexane/n-BuOH/H20 (4 : 1 : 5， V/V/V)為 兩相溶劑體系，在優化的工藝參數條件下，獲得了單體純度為98.6% (HPLC)的石杉鹼甲單 體。 近年來也出現了一些有關製備石杉鹼甲的專利文獻。《一種從千層塔中提取分離石杉鹼甲的方法》(中國專利，CN 101134743A)用有 機溶劑提取，調酸；陽離子交換樹脂色譜分離，洗脫，濃縮成浸膏；經矽膠攪拌，上矽膠柱色 譜，混合洗脫劑洗脫，濃縮，結晶，可得純度達98 %的石杉鹼甲。《一種高純度石杉鹼甲的製備方法》(中國專利，CN1587260A)用正構烷烴-脂肪 醇-水作為溶劑體系，用高速逆流色譜法從石杉屬植物千層塔中分離高純度石杉鹼甲。
《從中草藥千層塔中提取石杉鹼甲的方法》(中國專利CN1448390A)應用以下工藝 步驟製備石杉鹼甲原料粉碎一浸漬一濃縮一萃取(反覆)一柱層析一結晶一高效液相色 譜選段一濃縮乾燥一成品，純度達到98%以上。《一種分析與分離製備石杉鹼甲和石杉鹼乙的方法》(中國專利，CN1704405A)採用 原料粉碎浸泡一大孔吸附樹脂富集濃縮一反相柱層析一非烷基鍵合相矽膠介質柱層析一
3濃縮結晶的工藝製備分離，最後可獲得純度> 98%的石杉鹼甲和石杉鹼乙。《從植物中提取石杉鹼甲的工藝》(中國專利，CN1861580A)採用石筋草為原料和原
料粉碎一酸液浸泡一濃縮一活性炭脫色一調節PH值一氯仿萃取一減壓回收一矽膠拌樣揮
發一乙醇氯仿溶液洗脫一減壓回收一結晶一乾燥的工藝，提取石杉鹼甲。 上述各種方法或得到的產品純度較低，或收率較低，或操作比較麻煩，有的生產成
本較高，生產規模較小，不能滿足市場需求。

發明內容
本發明的目的在於克服現有技術的不足，提供一種操作簡便、分離量大，綜合成本 低，生產周期短的快速製備高純度石杉鹼甲的方法。本發明是一種從千層塔中提取純化石 杉鹼甲的方法，其技術方案包括如下步驟 (1)提取液的製備①將粉碎好的千層塔，加3-25倍量的0. 2_2%硫酸，常溫浸泡
1-24小時；②滲漉提取至流出液中檢測不出石杉鹼甲，收集濾液得到提取液備用； 本發明的技術方案中，千層塔的乙醇提取物還包括了超聲波提取法，具體方法如
下 ①將粉碎好的千層塔藥材，加3-25倍量的0. 2_2%硫酸，常溫浸泡0_24小時，超 聲波超聲處理10-60min，分離出藥液；②向藥渣中加入藥渣量2_10倍的提取溶劑，用超聲 波超聲處理10-50min，分離出藥液；③合併藥液，採用過濾、離心等方法除去提取液中的雜 質，得到千層塔提取液。 (2)大孔樹脂預分離①將提取液用氨水調pH至8-10，上大孔吸附樹脂柱；②第 一次使用0-15%的乙醇洗脫，洗脫液棄去；③第二次使用15-70%的乙醇洗脫，收集洗脫 液，回收乙醇，得提取物浸膏備用； (3)高速逆流色譜純化以石油醚_正丁醇_磷酸鹽緩衝液為溶劑系統，將上述得
到的浸膏應用高速逆流色譜法進行純化，即得到高純度的石杉鹼甲，純度在98%以上。 本發明的方法與現有製備石杉鹼甲的方法相比，具有如下優勢 (1)本發明以酸提取千層塔藥材中的石杉鹼甲，以大孔樹脂預分離，以乙醇為洗脫
劑，以高速逆流色譜進行純化，工藝過程綠色環保，對環境無嚴重危害。 (2)本發明操作簡單，工藝周期短，節省試劑，洗脫劑可回收重複利用，降低了生產 成本，效率高，所製備的石杉鹼甲純度高。


圖1是經大孔樹脂分離後得到的提取物的高效液相色譜圖。 圖2是採用石油醚_正丁醇_磷酸鹽水為高速逆流色譜兩相溶劑系統分離純化石 杉鹼甲提取物的高速逆流色譜圖。 圖3是高速逆流色譜分離純化得到的石杉鹼甲的高效液相色譜圖。
具體實施例方式
提取液的製備①將粉碎好的千層塔，加3-25倍量的0. 2-2%硫酸，常溫浸泡0-24 小時；②滲漉提取至流出液中檢測不出石杉鹼甲，得到提取液備用；
大孔樹脂預分離①將提取液調pH至8-10，上大孔吸附樹脂柱；②第一次使用 0-15 %的乙醇洗脫，洗脫液棄去；③第二次使用15-70 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙 醇，得提取物浸膏； 高速逆流色譜純化以石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩衝液為溶劑系統，將上述得到的 石杉鹼甲粗提物應用高速逆流色譜法進行純化，即得到高純度的石杉鹼甲，純度在98%以 上。
實施例1 : 取粉碎好的千層塔藥材100g，加人1. 5L 1 %的硫酸，常溫浸泡24小時，滲漉至流 出液中檢測不出石杉鹼甲，用氨水調提取液的pH至8。 將上述調好pH的提取液上大孔吸附樹脂柱，以5%的乙醇洗脫至流出液無色，洗 脫液棄去。再以30%的乙醇洗脫，檢測洗脫液中無石杉鹼甲，收集洗脫液，減壓蒸餾回收溶 劑，得到石杉鹼甲的提取物。 採用石油醚_正丁醇_磷酸鹽緩衝液為高速逆流色譜兩相溶劑系統分離純化石杉 鹼甲的提取物，固定相為石油醚-正丁醇(1.5 : 3.5，V/V)，流動相為含磷酸二氫鈉和磷酸
氫二鈉均為1%的磷酸鹽緩衝液。
實施例2 : 取粉碎好的千層塔藥材100g，加人1. 5L 1 %的硫酸，常溫浸泡24小時，超聲波
超聲處理30min，分離出藥液。向藥渣中加入藥渣量1L的1 %的硫酸，用超聲波超聲處理
20min，分離出藥液。合併藥液，過濾除去提取液中的雜質，調提取液的pH至8。 將上述調好pH的提取液上大孔吸附樹脂柱，以5%的乙醇洗脫至流出液無色，洗
脫液棄去。再以30%的乙醇洗脫至流出液中無石杉鹼甲，收集洗脫液，減壓蒸餾回收溶劑，
得到石杉鹼甲的提取物。 採用石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩衝液為高速逆流色譜兩相溶劑系統分離純化石杉 鹼甲的提取物，固定相為石油醚-正丁醇(1.5 : 3.5，V/V)，流動相為含磷酸二氫鈉和磷酸 氫二鈉均為1%的磷酸鹽緩衝液。
權利要求
一種從千層塔中提取分離高純度石杉鹼甲的新方法，其工藝步驟為(1)提取液的製備將千層塔藥材粉碎，粉碎粒度控制在0.1-0.5cm，將粉碎的千層塔藥材放入容器中，加3-25倍量的0.2-2％硫酸水溶液常溫浸泡1-24小時，滲漉提取至流出液中檢測不出石杉鹼甲，收集提取液備用；(2)大孔樹脂預分離①將提取液用氨水調pH至8-10，上大孔吸附樹脂柱；②第一次使用5-15％的乙醇洗脫，洗脫液棄去；③第二次使用15-70％的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，得提取物浸膏；(3)高速逆流色譜純化以石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩衝液為溶劑系統，將提取物浸膏應用高速逆流色譜法進行純化，即得到高純度的石杉鹼甲，純度在98％以上。
2. 根據權利要求1所述的從中藥千層塔中提取分離石杉鹼甲的方法，其特徵在於，步 驟(3)高速逆流色譜純化採用如下方法實現，即應用石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩衝液作為 高速逆流色譜的兩相溶劑系統進行分離純化，固定相為石油醚-正丁醇，兩者比例在1 : 5 到5 : l之間，流動相為磷酸鹽緩衝溶液，其pH在3-9之間。
全文摘要
本發明涉及一種從千層塔中提取分離高純度石杉鹼甲的新方法，該方法包括下述三個工藝步驟(1)提取液的製備將粉碎好的千層塔，採用酸液浸泡並滲漉或超聲提取，提取液備用；(2)大孔樹脂預分離將上述提取液調pH至8-10，過大孔吸附樹脂柱，分別用不同濃度的乙醇洗脫，乙醇洗脫液回收溶劑後得到提取物浸膏；(3)高速逆流色譜純化以石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩衝液為溶劑系統，將上述得到的浸膏應用高速逆流色譜法進行純化，即得到高純度的石杉鹼甲。
文檔編號C07D221/22GK101693689SQ20091001486
公開日2010年4月14日 申請日期2009年5月4日 優先權日2009年5月4日
發明者孫愛玲, 柳仁民 申請人:聊城大學;