平臥菊三七提取物在製備防治肝臟損傷製劑中的應用的製作方法

2023-04-28 18:43:16

平臥菊三七提取物在製備防治肝臟損傷製劑中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及醫藥【技術領域】，更具體涉及一種平臥菊三七提取物在製備治療或預防肝臟損傷製劑中的應用。本發明將平臥菊三七的莖或葉提取物應用於酒精、藥物或毒物引起的肝臟損傷的治療或預防，取得了顯著的效果，療效確定、無毒副作用，而且提取方法易於實施，應用前景廣闊。
【專利說明】平臥菊三七提取物在製備防治肝臟損傷製劑中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及醫藥【技術領域】，更具體涉及一種平臥菊三七提取物在製備治療或預防肝臟損傷製劑中的應用。
【背景技術】
[0002]肝損傷是臨床常見的危害人類健康的病因之一。肝損傷是因肝臟受到外界傷害性因素的入侵，從而引起的肝臟受損。肝損傷分為病理性肝損傷和化學性肝損傷。化學性肝損傷是由化學性肝毒性物質所造成的肝損傷。這些化學物質包括酒精、環境中的化學毒物及某些藥物。病源防不勝防，肝臟易受損傷，且難以發現。肝損傷若任其惡化發展，最終會轉變為肝硬化，甚至惡化為肝癌，最終無法挽救。因此建議肝臟已受損人群應早期控制病情，防止肝臟狀況繼續惡化；健康人群也應提高警惕，積極預防。
[0003]平臥菊三七(GynuraProcumbens (Lour.)Merr)是菊科菊三七屬的植物。分布於越南、泰國、印度尼西亞和非洲以及中國的廣東、海南、貴州、雲南、江西等地。在我國平臥菊三七被批准為新資源食品(衛生部公告2012年第8號)，可作為蔬菜食用；在馬來西亞，平臥菊三七是一種傳統食物和藥物，被稱為「sambung nyawa」，用於治療糖尿病、癌症、腎病和高血壓。目前沒有將平臥菊三七用於治療肝損的相關報導。再者，平臥菊三七葉是傳統的藥用和使用部位，其莖在習慣上常被扔棄，而沒有被用作食物或藥物。
[0004]本發明將平臥菊三七用於肝損治療 ，開發了平臥菊三七的新用途，並且在效果上取得了成功，平臥菊三七可以有效防治酒精、藥物和毒物引起的肝臟損傷。本發明將滿足廣大病人的需要，預計會有很好的經濟效益和社會效益。

【發明內容】

[0005]針對現有技術中存在的不足，本發明的目的在於開發中藥材平臥菊三七的新用途，提供一種平臥菊三七提取物在製備防治肝臟損傷製劑中的應用。本申請的發明人多年來一直致力於肝損的臨床治療和植物活性成分的研究工作。長期的研究和大量的實驗結果證實，與現有的主流療法相比，平臥菊三七提取物對肝損的預防和治療具有效果好、無副作用、價格便宜等優勢。本發明中，護肝製劑治療肝損的機制在於:①抗炎，降低炎症引起的肝細胞凋亡和壞死程度；②加速肝細胞再生，促進已經受損的肝組織修復。上述兩種機制疊加在一起，有效地保護了肝臟。
[0006]本發明通過將平臥菊三七的莖或葉提取物作用多種經典的肝損模型，實驗結果確證了本發明技術方案的可行性。
[0007]所述提取物的製備方法如下:取平臥菊三七的乾燥莖或葉稱重後粉碎，每次加入7-10體積/重量(L/kg)倍的50-85v/v%乙醇，80-100°C下回流提取0.5_2h，共提取3次，合併提取液並濃縮乾燥得幹浸膏。
[0008]與現有技術相比，本發明具有以下優點和效果:
[0009]1、擴展了平臥菊三七的新用途；[0010]2、變廢為寶，將習慣中不用於食用或藥用的平臥菊三七莖加以利用；
[0011]3、平臥菊三七保肝效果顯著，可以有效保護肝臟；
[0012]4、平臥菊三七使用中未發現毒副作用，源自天然，更易為患者接受。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1平臥菊三七莖提取物降低DEN所致肝損小鼠的轉氨酶活性。
[0014]I±s, n=8，空白對照組，□ ;DEN模型組，;平臥菊三七治療組1，:平臥菊三七治
療組2，_與空白對照組相比，_P〈0.001 ;與DEN模型組比，##P〈0.01。與空白對照組相比，DEN模型組轉氨酶水平明顯升高(P〈0.001 )，說明造模成功。與DEN模型組相比，護肝製劑治療組的轉氨酶水平均有一定的降低，說明平臥菊三七莖提取物一定程度上保護了肝細胞免受DEN損傷。
[0015]圖2平臥菊三七莖提取物降低DEN引起的肝臟組織病理學改變。
[0016]HE染色，放大400倍，圖中標尺的長度為50 μ m。A、B、C和D分別表示空白對照、DEN模型、平臥菊三七治療組I和2。DEN模型組肝臟可見大量的細胞壞死和脂肪空泡；而與DEN模型組相比，平臥菊三七治療組的肝臟細胞壞死和脂肪空泡程度均明顯減輕。
[0017]圖3平臥菊三 七莖提取物降低醋氨酚引起的肝臟病理學改變。
[0018]HE染色，放大200倍，圖中標尺的長度為100 μ m。A、B、C、D和E分別表示空白對照、醋氨酚模型、平臥菊三七治療組1、2和3。醋氨酚模型組肝臟可見大面積肝細胞壞死；而與醋氨酚模型組相比，平臥菊三七治療組肝臟的肝細胞受損程度明顯減輕。
[0019]圖4平臥菊三七莖提取物降低酒精所致肝損小鼠的轉氨酶活性
[0020]i±Sj n=15，空白對照組，口 ；酒精模型組，.;平臥菊三七治療組1，_平臥菊三七
治療組2，I平臥菊三七治療組3，0與空白對照(100%)相比，酒精模型組小鼠血清中谷丙轉氨酶活性(168%，P〈0.001)顯著提高；而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組2和3中的谷丙轉氨酶活性劑量降低，其中平臥菊三七治療組3中谷丙轉氨酶活性顯著降低(126%，Ρ〈0.05)。
[0021]圖5平臥菊三七莖提取物降低酒精引起的肝臟病理學改變。
[0022]HE染色，放大400倍，圖中標尺的長度為100 μ m。A、B、C、D和E分別表示空白對照、酒精模型、平臥菊三七治療組1、2和3。酒精模型組肝臟可見肝細胞壞死(一，細胞核溶解)和脂肪化(▲，肝細胞空泡);而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組的肝細胞壞死程度明顯減輕。
[0023]圖6平臥菊三七莖提取物降低酒精所致肝損小鼠的甘油三酯沉積
[0024]i±s, n=15，空白對照組，□;酒精模型組，平臥菊三七治療組1，;平臥菊三七
治療組2，畫平臥菊三七治療組3，H與空白對照(2.9mM/g蛋白)相比，酒精模型組肝臟甘油三酯明顯增加(7.0mM/g蛋白，P〈0.001);而與酒精模型組相比，平臥菊三七1、2和3治療組甘油三酯含量均降低，分別為4.8mM/g蛋白(P〈0.05),5.6mM/g蛋白(P=0.083),4.9mM/g蛋白(Ρ〈0.01)。【具體實施方式】
[0025]下面 申請人:將結合具體的實施例對本發明的技術方案做進一步的詳細說明。應理解，以下內容不應以任何方式被理解為對本發明權利要求書請求保護範圍的限制。
[0026]實施例1提取物的製備
[0027]1、平臥菊三七莖提取物的製備:
[0028]平臥菊三七產自廣東，取乾燥莖稱重後粉碎，每次加入10體積/重量倍(L/kg)的80v/v%乙醇，85°C下回流提取lh，共提取3次，合併提取液並濃縮乾燥，幹浸膏(密度1.40g/L)得率約為18.5%ο
[0029]2、平臥菊三七葉提取物的製備:
[0030]平臥菊三七產自廣東，取乾燥葉稱重後粉碎，每次加入10體積/重量倍(L/kg)的50v/v%乙醇，90°C下回流提取0.5h，共提取3次，合併提取液並濃縮乾燥，幹浸膏(密度
1.40g/L)得率約為 17.1%。
[0031]以下為應用實施例。
[0032]實施例2
[0033]實施例1製備的平臥菊三七莖提取物對二乙基亞硝胺(Diethylnitrosamine, DEN)誘導的小鼠肝臟損傷的治療作用:
[0034]雄性昆明小鼠，分為4組:空白對照組、DEN模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，每組8隻動物。DEN模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，每周I次經口給予DEN (165mg/kg)，共8周，造DEN模型，平臥菊三七治療組I和組2分別給予50mg/kg、200mg/kg實施例1製備的平臥菊三七莖提取物，每天I次，連續給一個星期後，眼球取血，處死動物後取肝臟。血樣離心製得血清，用於測定谷丙轉氨酶活性，肝臟經過10%福馬林固定，HE染色後，進行病理組織形態學觀察。
[0035]與空白對照小鼠血清中谷丙轉氨酶活性(100%)相比，DEN模型組小鼠血清中谷丙轉氨酶活性顯著提高(239%，P〈0.001);而與DEN模型組相比，平臥菊三七治療組的谷丙轉氨酶活性降低，其中200mg/kg平臥菊三七治療組降至135%(P〈0.01)，提示平臥菊三七莖提取物可以在一定程度上保護肝臟，減小DEN對肝細胞的損傷(結果見圖1);肝臟病理組織形態學的檢測結果也證實了這一點，與空白對照相比，DEN模型組肝臟可見大量的細胞壞死和脂肪空泡；而與DEN模型組相比，平臥菊三七治療組的肝臟細胞壞死和脂肪空泡程度均明顯減輕，再次提示平臥菊三七可以在一定程度上保護肝臟，減小DEN對肝臟的損傷(結果見圖2)。
[0036]實施例3
[0037]實施例1 製備的平臥菊三七莖提取物對醋氨酚誘導的小鼠肝臟損傷的治療作用:
[0038]雄性昆明小鼠，分為5組:空白對照組、醋氨酚模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3，每組8隻動物。平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3分別灌胃給予50、100、200mg/kg的實施例1製備的平臥菊三七莖提取物，空白對照組、醋氨酚模型組給予等量的生理鹽水。灌胃後，醋氨酚模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3立即腹腔注射300mg/kg醋氨酚，空白對照組腹腔注射等量的生理鹽水；24h後眼球取血，處死動物後取肝臟。肝臟經過10%福馬林固定，HE染色後，進行病理組織形態學觀察。[0039]與空白對照相比，醋氨酚模型組肝臟可見大面積壞死；而與醋氨酚模型組相比，平臥菊三七治療組肝細胞受損程度明顯減輕，提示平臥菊三七可以在一定程度上保護肝臟，減小醋氨酚對肝臟的損傷(結果見圖3)。
[0040]實施例4
[0041]實施例1製備的平臥菊三七莖提取物對酒精誘導的急性小鼠肝臟損傷的治療作用:
[0042] 雄性昆明小鼠，分為5組:空白對照組、酒精模型組、平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3，每組15隻動物。酒精模型組灌胃給予5g/kg的乙醇(乙醇來自56°白酒，北京紅星股份有限公司監製)，平臥菊三七治療組1、平臥菊三七治療組2，平臥菊三七治療組3分別灌胃12.5、25、50mg/kg的實施例1製備的平臥菊三七莖提取物(幹浸膏直接溶於56°白酒中給藥，白酒用量同酒精模型組)，空白對照組給予等量的生理鹽水。每12h灌I次，共3次，最後I次灌胃4h後，眼球取血，處死動物後取肝臟。血樣離心製得血清，用於測定谷丙轉氨酶活性，部分肝臟勻漿，測定甘油三酯的含量，部分肝臟經過10%福馬林固定，HE染色後，進行病理組織形態學觀察。
[0043]與空白對照(100%)相比，酒精模型組小鼠血清中谷丙轉氨酶活性(168%，P〈0.001)顯著提高；而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組2和3中的谷丙轉氨酶活性降低，其中平臥菊三七治療組3中谷丙轉氨酶活性顯著降低(126%，P〈0.05)，提示平臥菊三七莖提取物可以在一定程度上保護肝臟，減輕乙醇對肝臟的損傷(結果見圖4);肝臟病理組織形態學的檢測結果也證實了這一點，與空白對照相比，酒精模型組肝臟可見大量肝細胞壞死(細胞核溶解)和脂肪化(肝細胞空泡)；而與酒精模型組相比，平臥菊三七治療組的肝細胞壞死程度明顯減輕，再次提示平臥菊三七可以在一定程度上保護肝臟，減輕乙醇對肝臟的損傷(結果見圖5)。脂肪化的程度可以從圖中6甘油三酯的結果加以分析，與空白對照(2.9mM/g蛋白)相比，酒精模型組肝臟甘油三酯明顯增加(7.0mM/g蛋白，P〈0.001);而與酒精模型組相比，平臥菊三七各治療組甘油三酯含量均降低，提示平臥菊三七莖提取物可以在一定程度阻止乙醇導致的脂肪肝。
[0044]實施例5
[0045]實施例1製備的平臥菊三七葉提取物對脂多糖誘導炎症的抑制作用
[0046]35mm培養皿中培養從小鼠肝臟中分離的Kupffer細胞，給予10ng/mL脂多糖(LPS)刺激，並分別加入1、10、100μ g/mL的實施例1製備的平臥菊三七葉提取物。4h後提取細胞RNA，檢測TNF- a mRNA水平，用GAPDH作為內參，結果發現:與正常對照(100%)相t匕，LPS使得TNF-a mRNA水平顯著提高(212%，P〈0.001)，而與LPS模型對照組相比，1、10、100 μ g/mL的平臥菊三七葉提取物顯著抑制了 TNF-a mRNA水平，分別是183% (P〈0.05)、159% (P〈0.001)、107% (P〈0.001)。此結果表明，本發明中平臥菊三七葉提取物也具有抑制肝臟炎症的作用。
【權利要求】
1.一種平臥菊三七提取物在製備治療或預防肝臟損傷製劑中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於:所述提取物為50-85v/v%乙醇提取物。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其特徵在於:所述平臥菊三七取莖或葉。
4.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於:所述肝臟損傷為酒精、藥物或毒物引起的肝臟損傷。
5.根據權利要求4所述的應用，其特徵在於:所述肝臟損傷為二乙基亞硝胺引起的肝臟損傷。
6.根據權利要求4所述的應用，其特徵在於:所述肝臟損傷為醋氨酚引起的肝臟損傷。
7.根據權利要求4所述的應用，其特徵在於:所述肝臟損傷為酒精引起的肝臟損傷。
8.根據權利要求 4所述的應用，其特徵在於:所述肝臟損傷為脂多糖引起的肝臟損傷。
【文檔編號】A61K36/28GK103520244SQ201310547821
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年11月6日 優先權日:2013年11月6日
【發明者】唐和斌, 李小軍, 李婷婷, 李玉桑 申請人:唐和斌