一種爬行動物抗菌肽Alligatorin5及其應用的製作方法
2023-05-13 20:02:11 1
一種爬行動物抗菌肽Alligatorin5及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種爬行動物來源的抗菌肽Alligatorin5及其胺基酸序列和在抗菌方面的應用。本發明的抗菌肽Alligatorin5來源於揚子鱷，通過檢索揚子鱷基因資料庫，篩選分析獲得抗菌肽成熟肽序列，抗菌肽Alligatorin5胺基酸序列如序列表中SEQ?ID?NO.1所示。通過對比分析，爬行動物抗菌肽Alligatorin5與目前已知所有抗菌肽的胺基酸序列存在明顯差異，屬於一種新型抗菌肽。通過抗菌實驗表明，本發明的揚子鱷抗菌肽Alligatorin5對革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌和真菌具有極強的抗菌活性，抗菌作用廣譜高效，此外具有溶血活性低、鹽耐受性、熱耐受性和熱穩定性好的等特點，可應用於醫藥、化妝品、食品保鮮和養殖業領域。
【專利說明】—種爬行動物抗菌肽Al I igator in5及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種爬行動物來源的抗菌肽及其應用，更具體的說，涉及一種來源於爬行動物揚子鱷的抗菌肽及其應用，屬於生物醫學【技術領域】。
【背景技術】
[0002]傳統抗生素在治療細菌性感染疾病方面取得了顯著效果，但是近年來，隨著傳統抗生素在醫學和養殖業等領域的濫用，微生物對傳統抗生素產生了越來越強的耐受性，微生物耐藥問題已成為嚴重威脅人類健康的難題。一直以來微生物耐藥性的應對手段是使用對耐藥微生物尚未使用過的新的或者替代性的抗微生物製劑，而這種新的抗生素使用一段時間後，微生物會進一步對這種新的抗生素產生耐藥性，因此這就需要持續開發新的抗微生物製劑。開發出一種新型抗菌機製藥物是解決微生物耐受性問題的一個新方向。
[0003]抗菌肽是一種小分子多肽，對細菌、真菌、病毒和原蟲等均具有殺滅作用。抗菌肽具有分子量小、結構簡單、殺菌活性強等特點。大多數抗菌肽的殺菌機制是通過作用於細菌細胞膜上的磷脂雙分子層，破壞細胞膜完整性並在細胞膜上形成跨膜通道，造成細胞內容物溶出而導致細胞死亡。這種獨特的殺菌機制一般不易引起微生物耐藥性。而且抗菌肽對哺乳動物正常細胞和組織一般沒有毒害性，不存在殘留問題，因此抗菌肽有望成為一種新型的高效的抗菌藥物，具有廣闊的開發應用前景。
【發明內容】
[0004]本發明目的是為解決傳統抗生素的不足之處，提供了一種來源於爬行動物揚子鱷的抗菌肽Alligatorin5,另外提供了該抗菌肽的胺基酸序列以及其在抗菌方面的應用。爬行動物抗菌肽Alligatorin5具有廣譜高效的抗菌作用，對革蘭氏陽性細菌、革蘭氏陰性細菌和真菌具有極強的抗菌活性，且具有分子量小、合成簡單、溶血活性低、鹽耐受性、熱耐受性和熱穩定性好的特點，可應用於醫藥、化妝品、食品保鮮和養殖業領域。
[0005]為實現本發明的目的，本發明提供了如下技術方案:
[0006]本發明中抗菌肽Alligatorin5是源自於爬行動物揚子鱷體內的一種抗菌肽，爬行動物抗菌肽Alligatorin5由22個胺基酸組成，分子量為2557.1Da，等電點為12.03，胺基酸序列如序列表 SEQ ID NO:1 所不:Thr Arg Arg Lys Phe Trp Lys Lys Val Leu AsnGly Ala Leu Lys He Ala Pro Phe Leu Leu Gly,所有胺基酸均為 L-型；
[0007]本發明也提供了抗菌肽Alligatorin5的化學製備方法:
[0008]根據獲得的爬行動物抗菌肽Alligatorin5成熟肽的胺基酸序列，用自動多肽合成儀(433A, Applied B1systems)合其全序列，通過HPLC反相柱層析脫鹽純化；用高效液相色譜HPLC方法鑑定其純度，分子量測定採用基質輔助雷射解析電離飛行時間質譜(MALD1-T0F)，等電聚焦電泳測定等電點，用自動胺基酸測序儀測定胺基酸序列結構；
[0009]另外，本發明提供了抗菌肽Alligatorin5的應用，在製備抗菌藥物或組合物、抑制細菌生長藥物或組合物、防腐劑、動物飼料添加劑或化妝品添加劑中的應用。
[0010]本發明的優點是提供了一種來源於揚子鱷的爬行動物抗菌肽Alligatorin5以及其在抗菌方面的應用。抗菌肽Alligatorin5具有廣譜高效的抗菌作用，且具有分子量小、合成簡單、溶血活性低、鹽耐受性、熱耐受性和熱穩定性好的特點，可應用於醫藥、化妝品、食品保鮮和養殖業領域。
【具體實施方式】
[0011]實施例1:
[0012]爬行動物抗菌肽Alligatorin5的發現
[0013]通過檢索,從美國國家生物技術信息中心(Nat1nal Center for B1technologyInformat1n, http://www.ncb1.nlm.nih.gov)網站的揚子鱷基因組數據中發現一條基因序列(XP_006026473.1)，長度為477bp，編碼的多肽前體由158個胺基酸殘基組成。該基因及其編碼的多肽前體分別如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示:
[0014]
【權利要求】
1.一種爬行動物抗菌肽AlligatOTin5，其特徵在於，所述抗菌肽來源於揚子鱷，由22個胺基酸組成，分子量為2557.1Da，等電點為12.03，胺基酸序列如序列表SEQ ID ΝΟ:1所不 Thr Arg Arg Lys Phe Trp Lys Lys Val Leu Asn Gly Ala Leu Lys He Ala Pro PheLeu Leu Gly,所有胺基酸均為L-型。
2.—種如權利要求1所述的爬行動物抗菌肽Alligatorin5在製備抗菌藥物或組合物、抑制細菌生長藥物或 組合物、防腐劑、動物飼料添加劑或化妝品添加劑中的應用。
【文檔編號】A23K1/17GK104163861SQ201410314113
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年7月3日 優先權日:2014年7月3日
【發明者】王義鵬, 於海寧, 陳燕, 衛林 申請人:蘇州大學