一種穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒的製作方法
2023-04-26 22:10:01
專利名稱：一種穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及ー種檢測試劑盒，尤其是涉及一種穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒。
技術背景
研究發現95%以上的致癌物進入體內需經代謝途徑激活後才能與DNA等生物大分子結合，引起早期生物學反應，最終導致癌變。在這種激活反應過程中涉及兩種主要酶系即細胞色素 P450 (Cytochrome CYP450)和穀胱甘妝轉硫酶(Glutathione s-transferaseGST)。CYP450是體內重要的激活酶(又稱I相酶)，GST是體內重要的滅活酶(又稱II相酶)。所以致癌物能否引起靶細胞的癌變很大程度取決於這兩類酶的活性及彼此的平衡。GSTs即穀胱甘肽硫轉移酶蛋白，是ー類多功能的ニ聚蛋白家族，主要催化還原性穀胱甘肽(GSH)與親電子物質間的結合反應，使其失去DNA結合活性，此即通常意義上的I相代謝酶的解毒功能，GSTs可分為GSTA、GSTM、GSTP和GSTT四類。GSTMl和GSTTl都能催化CYP類代謝活化的產物或由於氧化應激所造成的脂質或DNA過氧化物的解毒過程，提示二者之間可能存在協同作用，而且人群中都存在其編碼基因完全缺失的多態性現象。有研究指出有GSTMl和GSTTl缺失的個體更易患化學致癌物所致的癌症。GSTs可催化GSH與多種化療藥物結合，促進其降解，使腫瘤對化療藥物的敏感性減低，化療失敗。GSTMl基因的純合缺失導致了機GST-μ同エ酶的缺乏，從而降低化療藥物的失活，提高療效，増加患者存活機率。因此，化學致癌物代謝酶，即藥物代謝酶基因多態性檢測尤其是GSTs基因多態性的檢查對於臨床腫瘤病人的個體化用藥及腫瘤發病機制研究至關重要。但目前臨床檢測GSTs基因多態性的檢測試劑原料需多方配備，實驗過程分步進行，耗時較長，容易汙染，所以探索一種檢測GSTs基因多態性快速可靠的方法已經成為臨床實驗研究的熱點問題。
實用新型內容為了解決上述技術問題，本實用新型提供一種穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、裝引物的試劑瓶4、裝酶混合物的試劑瓶5，固定座3上設置有離心管6、加樣器吸頭7。進ー步地，所述固定座3還設置有孔8。孔8設置用來分別將離心管6、加樣器吸頭7固定，以防止遺撒。孔8的形狀依據不同離心管、加樣器吸頭的形狀和大小而設置。所述引物包括擴增引物和白蛋白內參。其中，擴增引物為特異性擴增GST區域的引物，包括GSTMl、GSTTl ;所述GSTMl的上遊引物序列為gaactccctgaaaagctaaagc所述GSTMl的下遊引物序列為gttgggctcaaatatacggtgg ;所述GSTTl的上遊引物序列為ttccttactggtcctcacatctc ;所述GSTTl 的下遊引物序列為 tcaccggatcatggccagca ;所述白蛋白內參的上遊引物序列為gccctctgctaacaagtcctac ;所述白蛋白內參的下遊引物序列為gccctaaaaagaaaatcgccaatc,引物濃度為 100pmol/L。[0009]所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,I. 25U/25 μ I 的 rTaq。本實用新型與現有產品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、製造容易、檢測過程不易受汙染；本試劑盒在檢測穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點。
圖I為本實用新型的整體結構示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例對本實用新型進行進ー步說明。 表I為本實用新型PCR反應體系。如圖I所示，本實用新型的一個實施例為穀胱甘肽琉轉移酶基因多態性檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、裝引物的試劑瓶4、裝酶混合物的試劑瓶5，固定座3上設置有離心管6、加樣器吸頭7、孔8。離心管6和加樣器吸頭7放置在孔8內。孔8的形狀依據不同離心管、加樣器吸頭的形狀和大小而設置。所述引物包括擴增引物和白蛋白內參。其中，擴增引物為特異性擴增GST區域的引物，包括GSTMl、GSTTl ;所述GSTMl的上遊引物序列為gaactccctgaaaagctaaagc所述GSTMl的下遊引物序列為gttgggctcaaatatacggtgg ;所述GSTTl的上遊引物序列為ttccttactggtcctcacatctc ;所述GSTTl 的下遊引物序列為 tcaccggatcatggccagca ;所述白蛋白內參的上遊引物序列為gccctctgctaacaagtcctac ;所述白蛋白內參的下遊引物序列為gccctaaaaagaaaatcgccaatc,引物濃度為 100pmol/L。所述酶混合物包括濃度為O. 4mmol/L 的 dNTPs, 3mmol/L 的 Mg2+, 2xBuffer,
I.25U/25 μ I 的 rTaq ο操作方法I)取模板 DNA取病人全血1ml，常規提取DNA，取IulDNA作為模板。2)反應體系將各反應物質按照如下表I中反應體系進行配比表I[0024]
權利要求1.一種穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒，其特徵在於，包括盒體(I)、盒蓋(2)、固定座(3)、裝引物的試劑瓶(4)、裝酶混合物的試劑瓶(5)，固定座(3)上設置有離心管(6)、加樣器吸頭(7) ο
2.根據權利要求I所述的穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒，其特徵在於，所述固定座⑶還設置有孔(8)。
專利摘要本實用新型公開一種穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、裝引物的試劑瓶4、裝酶混合物的試劑瓶5，固定座3上設置有離心管6、加樣器吸頭7、孔8。本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、製造容易、檢測過程不易受汙染；本試劑盒在檢測穀胱甘肽硫轉移酶基因多態性時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點。
文檔編號C12Q1/68GK202440522SQ20122007569
公開日2012年9月19日 申請日期2012年3月2日 優先權日2012年3月2日
發明者馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 曹海霞, 馬蓉 申請人:馮繼鋒, 吳建中, 唐金海, 曹海霞, 馬蓉