潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法
2023-04-26 06:04:51 1
專利名稱：潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種食品加工過程中潤滑油(脂)中有毒物的檢測技術，尤其是一種潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法。
背景技術：
苯並(a)芘(1^皿0[3] 71^1^，8衝)是一種最具代表性的多環芳烴化合物，被認為是世界三大強致癌物之一，是國家食品安全工作的重點監測和控制對象。一般認為，食品中的BaP主要來源於食品自身的烹調過程、加工和包裝環節汙染以及食品環境汙染。其中，對食品燻烤、烘烤過程中BaP的產生機理，以及由煤炭、汽油、菸草等物質燃燒引起的BaP大氣汙染等的研究報導較多，而對加工過程中食品接觸材料汙染，和由於加工機械潤滑油(脂) 洩漏導致的食品BaP汙染雖有提及卻鮮有報導。對現代生產線來說，潤滑油(脂)是保持設備正常運轉必不可少的物質。隨著現代食品工業的發展，食品的加工日漸機械化和規模化，潤滑油(脂)的使用也日益廣泛，相應地，食品受到潤滑油(脂)汙染的機率也日趨升高。因此，國家規定在可能與食品直接接觸的設備中禁止使用工業級潤滑油。然而，目前採用工業級潤滑油(脂)來替代食品級潤滑油 (脂)的現象時有發生。工業級潤滑油(脂)中75%-90%為基礎礦物油，這些基礎油宜採用溶劑精製和活性炭吸附等工藝去除多環芳烴等非理想組分，但是由於工藝問題，這些物質並不能完全去除。一旦機械裝置密封不好，潤滑油(脂)發生洩漏進入食品便會導致食品的BaP 汙染。因此，開發潤滑油(脂)中BaP的檢測方法，研究工業級和食品級潤滑油(脂)中BaP含量差異，提升社會對工業級潤滑油(脂)使用限制必要性的認識具有重要的現實意義。目前，針對食品中BaP的檢測方法報導很多，包括高效液相色譜-質譜法，高效液相色譜-螢光檢測，氣相色譜-質譜法，高效液相色譜-紫外檢測和高效液相色譜-串聯質譜等。相對而言，潤滑油(脂)中BaP的檢測方法鮮有報導。因為潤滑油(脂)基質複雜， 不僅含有基礎油還含有稠化劑和添加劑，所以直接使用上述食品中BaP的檢測方法，基質幹擾很大，無法實現有效檢測。因此，針對潤滑油(脂)特性，專門開發適用於潤滑油(脂) 中BaP檢測的方法非常關鍵。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種適用性強的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法。為解決上述技術問題，本發明所採取的技術方案是其將潤滑油或潤滑脂萃取、離心、採用凝膠滲透色譜淨化後，收集目標洗脫液濃縮至幹；然後定容得到樣品溶液；最後將樣品溶液採用反相高效液相色譜-螢光法檢測，外標法定量。本發明方法採用下述檢測步驟
(1)潤滑油或潤滑脂用環己烷-乙酸乙酯混合溶劑浸泡、超聲萃取；
(2)上述步驟得到的萃取液離心處理後，取上層清液採用凝膠滲透色譜淨化，收集目標洗脫液濃縮至幹，再用甲醇或乙腈定容，得到樣品溶液；
(3)樣品溶液採用反相高效液相色譜-螢光法檢測，外標法定量。本發明所述步驟(1)中環己烷-乙酸乙酯混合溶劑的體積比為50:50 ；步驟(1)中超聲萃取時間為10 30 min，萃取次數為1 3次。本發明所述步驟(2)中的萃取液採用高速冷凍離心機離心處理，轉速為4000 10000 rpm，離心時間為5 10 min ；步驟(2)中目標洗脫液採用旋轉蒸發儀或者自動氮吹儀進行濃縮。本發明所述潤滑油或潤滑脂稱樣量為0. 5 1. 5 g ；所述環己烷-乙酸乙酯混合溶劑的用量為10 25 mL ；所述的甲醇或乙腈體積5. 0 mL ；所述反相高效液相色譜-螢光法檢測時樣品溶液的進樣量為5 20 UL0本發明所述的凝膠滲透色譜淨化的流動相為環己烷-乙酸乙酯，體積比為50:50， 流速為4. 7 mL/min,收集時間為16. 0 21. 0 min。本發明所述反相高效液相色譜條件為等度洗脫，色譜柱為反相C18柱，流動相為甲醇-水體系或乙腈-水體系。本發明所述C18色譜柱的規格為150 mmX4. 6 mm，粒徑5 μ m ；選用Kromasil 100-5 C18 柱、SB-C18 柱、XB-C18 柱、Eclipse Plus C18 柱或者 AE. Lichrom C18-5Mm_100 柱；所述的流動相為體積比為(80 90) (20 10)的甲醇-水體系，或體積比為(80 90): (20 10)的乙腈-水體系。本發明所述的螢光法檢測條件為激發波長為366 nm，發射波長為410 nm。本發明所述步驟(2)中經凝膠滲透色譜淨化處理後，環己烷-乙酸乙酯混合溶劑廢液經旋轉蒸發提純處理後，重複使用。本發明所述的凝膠滲透色譜(gel permeation chromatography, GPC)是一種根據溶質分子大小進行分離的色譜技術，能夠去除樣品中大量的油脂及色素，具有快速、高效、節省溶劑、易自動化等優點，已廣泛應用於油脂類食品中塑化劑、農殘等危害成分的痕量分析。但是到目前為止，還未有採用GPC技術處理潤滑油(脂)樣品然後進行BaP測定的報導。本發明採用GPC淨化技術，對潤滑油(脂)樣品進行處理，結合高效液相色譜-螢光法檢測技術，從而建立了一種適用性很強的潤滑油(脂)中BaP的測定方法。採用上述技術方案所產生的有益效果在於
(1)採用GPC技術處理潤滑油(脂)，去除了絕大部分大分子油脂類雜質，極大地降低了樣品基質對BaP測定的幹擾，檢測方法準確性高，對潤滑油(脂)的適用性強；
(2)採用GPC技術結合高效液相色譜-螢光法檢測，整個流程自動化程度高、簡便、快速、易於實現大批量樣品檢測；
(3)GPC淨化處理過程中產生的廢液可以回收處理，重複使用，降低了檢測成本，減少了環境汙染。
下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明。圖1是本發明GPC淨化處理潤滑油(脂)分離效果圖2是本發明反相高效液相色譜-螢光檢測苯並(a)芘色譜圖。
具體實施例方式一、檢測條件Series III液相色譜儀配螢光檢測器(美國LabAlliance公司)， PREPLINC凝膠滲透色譜儀(美國J2公司)配BIO-Beads S-X3填料的淨化柱(300 mm χ 25 mm)，所用試劑均為色譜純，色譜柱的規格為150 mmX4.6 mm，粒徑5 μ m ；選用Kromasil 100-5 C18 柱、SB-C18 柱、XB-C18 柱、Eclipse Plus C18 柱或者 AE. Lichrom C18-5Mm_100 柱。流動相為甲醇-水體系或乙腈-水體系，螢光檢測器的激發波長為366 nm，發射波長為 410 nm。進樣量為5 20 μ L，流速為1.2 mL · mirT1。計算機系統記錄色譜圖，以峰面積作為信號響應值，對苯並(a)芘進行定性定量分析。二、檢測方法本潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法採用下述實施例中的方法檢測。實施例1 本潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法的具體步驟如下所述。(1)標準曲線準確稱取IOmg (精確至0. lmg)BaP標準品於IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解並定容，配成0. Img · mL—1的標準儲備液。其工作曲線，由標準儲備液逐級稀釋成質量濃度分別為5. 0,10. 0,50. OUOO. 0,150. 0,200. 0 μg .L—1的系列標準溶液，按上述試驗條件進樣做標準曲線進行分析。(2)樣品提取準確稱取1. Og (精確至0. OOOlg)潤滑脂樣品於25mL容量瓶中，加入IOmL環己烷-乙酸乙酯(1:1，ν/ν)混合溶液，超聲15min，冷卻至室溫，加入環己烷-乙酸乙酯(l:l，v/v)混合溶液定容。萃取液轉移至離心管中，5°C下以10000 rpm的轉速離心 5 min,取上層清液用0. 45 Mm濾膜過濾，濾液轉移至GPC上樣瓶中。(3) GPC淨化處理GPC檢測波長為254 nm，流動相為環己烷-乙酸乙酯(1 1，ν/ ν)，流速為4. 7 mL · mirT1。步驟(2)中得到的濾液5. 0 mL進GPC淨化處理；GPC淨化處理潤滑脂分離效果見圖1 ；收集16 21 min流出液(目標洗脫液)，使用旋轉蒸發儀於40°C濃縮至幹，加5.0 mL甲醇超聲溶解，溶液用0.45 Mm濾膜過濾後進樣測定。(4)液相檢測選取Kromasil 100-5 C18色譜柱，甲醇-水(85 15，ν/ν)作為流動相，螢光檢測器的激發波長366 nm，發射波長410 nm，進樣量20 yL，流速1.2 mL .mirT1 ； 反相高效液相色譜-螢光檢測苯並(a)芘色譜圖見圖2。(5)採用外標法定量，對潤滑脂樣品做3個平行樣，試驗編號為A、B、C，分析結果見表1，並對一個樣品重複測定五次，分析結果見表2。由表1得，平行樣的相對標準偏差為 2. 54% ；由表2得重複性的相對標準偏差為1. 61%。(6)將步驟(1)中的標準樣品加入到已知苯並(a)芘含量的潤滑脂中，按照上述步驟進行實驗，對該樣品連續做10次平行測定，取平均值，計算加標回收率，實驗結果見表3。 加標回收率為81. 22% 94. 42%，相對標準偏差為1. 36%。
權利要求
1.一種潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於其將潤滑油或潤滑脂萃取、 離心、採用凝膠滲透色譜淨化後，收集目標洗脫液濃縮至幹；然後定容得到樣品溶液；最後將樣品溶液採用反相高效液相色譜-螢光法檢測，外標法定量。
2.根據權利要求1所述的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於，該方法採用下述檢測步驟(1)潤滑油或潤滑脂用環己烷-乙酸乙酯混合溶劑浸泡、超聲萃取；(2)上述步驟得到的萃取液離心處理後，取上層清液採用凝膠滲透色譜淨化，收集目標洗脫液濃縮至幹，再用甲醇或乙腈定容，得到樣品溶液；(3)樣品溶液採用反相高效液相色譜-螢光法檢測，外標法定量。
3.根據權利要求2所述的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述步驟(1)中環己烷-乙酸乙酯混合溶劑的體積比為50:50 ；所述步驟(1)中超聲萃取時間為 10 30 min，萃取次數為1 3次。
4.根據權利要求2所述的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述步驟(2)中的萃取液採用高速冷凍離心機離心處理，轉速為4000 10000 rpm，離心時間為 5 10 min ；所述步驟(2)中目標洗脫液採用旋轉蒸發儀或者自動氮吹儀進行濃縮。
5.根據權利要求2所述的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述的潤滑油或潤滑脂稱樣量為0. 5 1. 5 g ；所述的環己烷-乙酸乙酯混合溶劑的用量為10 25 mL ；所述的甲醇或乙腈體積為5.0 mL ；所述的反相高效液相色譜-螢光法檢測時樣品溶液的進樣量為5 20 UL0
6.根據權利要求1一 5所述的任意一種潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述的凝膠滲透色譜淨化的流動相為環己烷-乙酸乙酯，體積比為50:50，流速為4. 7 mL/min,收集時間為 16. 0 21. 0 min。
7.根據權利要求1一 5所述的任意一種潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述反相高效液相色譜條件為等度洗脫，色譜柱為反相C18柱，流動相為甲醇-水體系或乙腈-水體系。
8.根據權利要求7所述的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述C18 色譜柱的規格為150 mmX4. 6 _，粒徑5 μ m ；選用Kromasil 100-5 C18柱、SB-C18柱、 XB-C18柱、Eclipse Plus C18柱或者AE. Lichrom C18-5Mm_100柱；所述的流動相體積比為 (80 90): (20 10)的甲醇-水體系，或體積比為(80 90) (20 10)的乙腈-水體系。
9.根據權利要求1一 5所述的任意一種潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於，所述的螢光法檢測條件為激發波長為366 nm，發射波長為410 nm。
10.根據權利要求2所述的潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其特徵在於所述步驟(2)中經凝膠滲透色譜淨化處理後，環己烷-乙酸乙酯混合溶劑廢液經旋轉蒸發提純處理後，可以重複使用。
全文摘要
本發明公開了一種潤滑油(脂)中苯並(a)芘的檢測方法，其將潤滑油或潤滑脂萃取、離心、採用凝膠滲透色譜淨化後，收集目標洗脫液濃縮至幹；然後定容得到樣品溶液；最後將樣品溶液採用反相高效液相色譜-螢光法檢測，外標法定量。本方法採用GPC淨化技術處理潤滑油(脂)，去除了絕大部分大分子油脂類雜質，極大地降低了樣品基質對BaP測定的幹擾，檢測方法準確性高，對潤滑油(脂)的適用性強；採用GPC淨化技術結合高效液相色譜-螢光法檢測，整個流程自動化程度高，簡便，快速，易於實現大批量樣品檢測；GPC淨化處理過程中產生的廢液可以回收處理，重複使用，降低了檢測成本，減少了環境汙染。
文檔編號G01N30/02GK102539577SQ20121002722
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月8日 優先權日2012年2月8日
發明者吉桂珍, 王磊, 程淑君, 連運河, 高偉 申請人:晨光生物科技集團股份有限公司