喹諾裡西啶生物鹼在製備用於治療腫瘤藥物的應用的製作方法
2023-04-26 18:34:11 2
專利名稱：喹諾裡西啶生物鹼在製備用於治療腫瘤藥物的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬製藥領域，具體涉及喹諾裡西啶生物鹼在治療腫瘤藥物的應用。
背景技術：
目前腫瘤治療主要有手術、放療和化療，由於白血病在臨床首選治療方案仍然 是藥物化療。因此從植物研發高效低毒天然抗癌藥物或先導化合物有重要的現實意義。 本發明實驗例除選用了白血病細胞外，還選用了我國高發的消化道和呼吸道癌症的腫瘤 細胞。本發明所選用的腫瘤細胞均取自臨床腫瘤患者的細胞，如K562細胞取自53歲女 性白血病患者，HL60細胞取自36歲女性急性早幼粒細胞白血病患者，U937細胞取自37 歲男性瀰漫性組織細胞淋巴瘤，HepG2細胞來源於一個15歲患者的肝癌組織，EC109取 自65歲男性食管癌患者，A549細胞取自58歲男性肺癌患者。槐屬植物屬於豆科蝶形花亞科，有灌木、喬木、稀草本等90多種，主要分布於 溫帶和亞熱帶地區。我國分布較廣南北均產，約有30多種，常用於中藥主要有苦參、苦 豆子和山豆根等。槐屬植物中藥具有殺菌、抗病毒、抗心律不齊和抗腫瘤等功效。中藥 在我國已有千餘年臨床應用史，其所含大量的活性成份具有廣闊的研發前景。從槐屬植物提取的喹諾裡西啶生物鹼，也具有殺菌、抗病毒、抗心律不齊等功 效。喹諾裡西啶生物鹼可分為苦參鹼型、苦豆鹼型、鷹爪豆鹼型和金雀花鹼型等。目前 報導從槐屬植物中藥苦參、苦豆子和山豆根提取具有抗腫瘤的生物鹼為苦參鹼型，如苦 參鹼、槐定鹼、槐果鹼。中國93100881.6號專利「槐定鹼的用途」公開了槐定鹼抗腫瘤 用途，200510064670.0號專利「氧化槐定鹼在製備抗癌藥的用途」公開了氧化槐定鹼的 抗腫瘤用途。苦豆鹼型、鷹爪豆鹼型和金雀花鹼型生物鹼在抗腫瘤方面的用途尚未見報導。 苦豆鹼型是指苦豆鹼、烯丙基苦豆鹼、N-甲基苦豆鹼、11-去氫苦豆鹼；鷹爪豆鹼型是 指鷹爪豆鹼、13-羥基鷹爪豆鹼、17-氧代白金雀花鹼、白金雀花鹼、安那吉鹼、巴普葉 鹼、5，6-去氫白金雀花鹼、11，12-去氫鷹爪豆鹼；金雀花鹼型是指金雀花鹼、11-烯 丙基金雀花鹼、12-羥基金雀花鹼、N-(2-羥乙基)金雀花鹼、N-乙醯基金雀花鹼、 N-乙基金雀花鹼、N-醛基金雀花鹼、N-甲基金雀花鹼、11-氧代金雀花鹼。
發明內容
本發明的目的是提供一種喹諾裡西啶生物鹼在製備用於治療腫瘤藥物的用途， 具體是指苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼。本發明的涉及技術方案是喹諾裡西啶生物鹼在製備用於治療白血病、淋巴 瘤、肝癌、食管癌、肺癌腫瘤藥物的應用。本發明所述喹諾裡西啶生物鹼為槐屬植物提取的苦豆鹼、鷹爪豆鹼或金雀花 鹼。
本發明所述白血病是指K562細胞、HL-60細胞引起的白血病；淋巴瘤為U937 細胞引起腫瘤；肝癌為HepG2細胞引起的腫瘤；食管癌為EC109細胞引起的腫瘤；肺癌 為A549細胞引起的腫瘤。本發明用於治療腫瘤的藥物是指使用治療有效劑量的活性成份苦豆鹼、鷹爪豆 鹼或金雀花鹼，組合藥用輔料，製備臨床應用的針劑、片劑、膠囊、控釋藥丸等劑型。本發明中苦豆鹼型是指苦豆鹼、烯丙基苦豆鹼、N-甲基苦豆鹼、11-去氫苦豆 鹼；鷹爪豆鹼型是指鷹爪豆鹼、13-羥基鷹爪豆鹼、17-氧代白金雀花鹼、白金雀花鹼、 安那吉鹼、巴普葉鹼、5，6-去氫白金雀花鹼、11，12-去氫鷹爪豆鹼；金雀花鹼型是指 金雀花鹼、11-烯丙基金雀花鹼、12-羥基金雀花鹼、N-(2-羥乙基)金雀花鹼、N-乙醯 基金雀花鹼、N-乙基金雀花鹼、N-醛基金雀花鹼、N-甲基金雀花鹼、11-氧代金雀花 鹼。本發明人以已用於腫瘤治療的藥物槐定鹼為對照，利用血液系統腫瘤白血病、 淋巴瘤，消化系統腫瘤肝癌、食管癌和呼吸系統腫瘤肺癌多種腫瘤細胞，觀察比較了苦 豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼抑制腫瘤細胞效果，結果發現苦豆鹼、鷹爪豆鹼抑制上述腫 瘤細胞效果明顯優於槐定鹼，金雀花鹼對上述肝癌和肺癌細胞的抑制效果優於槐定鹼。進一步實驗研究發現發現苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼抗腫瘤細胞效果主要通 過增殖抑制、誘導自噬和凋亡達到抗腫瘤細胞目的。本發明分別以苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼為活性成份與藥用輔料組合製成針 劑、片劑、膠囊等劑型供臨床應用。將苦參根、山豆根或苦豆子碾成粉，用0.4%鹽酸室溫浸泡7天，共4次，抽濾 回收得到總浸膏，再經脫脂、酸化、鹼化和氯仿萃取等工藝獲得苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金 雀花鹼等活性生物鹼成分，經純度分析鑑定後用於後續製備。取苦豆鹼10克加注射用水500毫升攪拌溶解，逐漸加入計算用量鹽酸溶液(濃 度為1M)，再加注射用水至1升。攪拌、過濾、分裝、滅菌，製備針劑。取鷹爪豆鹼10 克加注射用水500毫升攪拌溶解，逐漸加入計算用量硫酸溶液(濃度為1M)，再加注射用 水至1升。攪拌、過濾、分裝、滅菌，製備針劑。取金雀花鹼10克加注射用水500毫 升攪拌溶解，逐漸加入計算用量鹽酸溶液(濃度為1M)，再加注射用水至1升。攪拌、 過濾、分裝、滅菌，製備針劑。取苦豆鹼20毫克，加藥用輔料混合，壓製成片劑，每片含苦豆鹼20毫克。取 鷹爪豆鹼20毫克，加藥用輔料混合，壓製成片劑，每片含鷹爪豆鹼20毫克。取金雀花 鹼20毫克，加藥用輔料混合，壓製成片劑，每片含金雀花鹼20毫克。取苦豆鹼20毫克，加藥用輔料混合，裝入膠囊，每膠囊含苦豆鹼20毫克。取 鷹爪豆鹼20毫克，加藥用輔料混合，裝入膠囊，每膠囊含鷹爪豆鹼20毫克。取金雀花 鹼20毫克，加藥用輔料混合，裝入膠囊，每膠囊含金雀花鹼20毫克。取上述苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼活性成分製備的藥物製劑稀釋成實驗濃度 開展下面實施例，說明苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼抗腫瘤細胞效果和用途實施例1，採用常規MTT法進行腫瘤抑制實驗，方法與結果如下MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法。該方法已廣泛用於大規模的抗 腫瘤藥物篩選，它的特點是靈敏度高、經濟。
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上述各腫瘤細胞0.5-2X105於96孔板中，將苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼製備 的製劑稀釋成實驗濃度，分別加入各腫瘤細胞並處理48小時。每一實驗組設置3個重複 孔，陰性空白對照孔為不加藥物，陽性藥物對照孔為槐定鹼。-20°C保存的5mg/mlMTT 溶液於室溫避光溶解，向96孔板每孔中加入10 μ 1 MTT溶液混勻，於細胞培養箱放置4 小時。向96孔板孔中加入ΙΟΟμΙ由SDS、異丙醇和鹽酸配製的三聯試劑，繼續於細胞 培養箱放置過夜。酶標儀570nm檢測各孔OD值，計算抑制率(抑制率=1_加藥組OD 值/對照組OD值)，獲取抑制率為50%的藥物濃度，即IC50。IC50表示藥物對腫瘤細 胞的抑制效果。下表根據測得的OD值，減去試劑對照組的均值後，計算藥物對細胞增殖的抑制效果。
權利要求
1.喹諾裡西啶生物鹼在製備治療白血病、淋巴瘤、肝癌、食管癌、肺癌腫瘤藥物的 應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其中所述的喹諾裡西啶生物鹼為槐屬植物提取的苦豆 鹼、鷹爪豆鹼或金雀花鹼。
3.根據權利要求2所述的應用，其特徵在於所述白血病是指K562細胞、HL-60細胞 引起的白血病；淋巴瘤為U937細胞引起腫瘤；肝癌為HepG2細胞引起的腫瘤；食管癌 為EC109細胞引起的腫瘤；肺癌為A549細胞引起的腫瘤。
4.根據權利要求3所述的應用，其中用於治療腫瘤的藥物是指使用治療有效劑量的活 性成份苦豆鹼、鷹爪豆鹼或金雀花鹼，組合藥用輔料，製備臨床應用的針劑、片劑、膠 囊、控釋藥丸等劑型。
全文摘要
本發明涉及槐屬植物提取的喹諾裡西啶生物鹼在製備用於治療腫瘤藥物的用途。可治療的腫瘤包括白血病、淋巴瘤、肝癌、食管癌和肺癌。使用治療有效劑量的活性成份苦豆鹼、鷹爪豆鹼和金雀花鹼組合藥用輔料，製備臨床應用的針劑、片劑、膠囊、控釋藥丸等劑型。
文檔編號A61P35/00GK102008475SQ20101027910
公開日2011年4月13日 申請日期2010年9月9日 優先權日2010年9月9日
發明者劉小珊, 蔣紀愷 申請人:汕頭大學醫學院