高效液相色譜法分析分離非布司他及其中間體的方法

2023-05-18 11:05:36 5

專利名稱：高效液相色譜法分析分離非布司他及其中間體的方法
技術領域：
本發明涉及非布司他分離與分析方法，尤其是一種高效液相色譜法。
背景技術：
非布司他(化學名2-[3_氰基-4-(2_甲基丙氧基)苯基]-4-甲基-5-噻唑甲 酸)為新一代非嘌呤類黃嘌呤氧化酶抑制劑，臨床上用於已出現尿酸沉積(包括痛風石、痛 風性關節炎)的慢性高尿酸血症的治療。其結構式為 在其合成的過程當中可能會引入下列幾個中間體 對於合成非布司他的過程中引入的中間體雜質，不論是在原料藥還是製劑中都是 需要進行嚴格控制的，所以發現一種非布司他及其中間體分析分離的方法具有現實意義。申請人:發現，用以十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱(C18(250X4.6mm， 5ym))，採用O.Olmol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH值至3.0)-(甲醇-四氫呋喃) (80 20) = 25 75為流動相，可以將非布司他及其雜質快速有效的分離，很好的控制非 布司他及其製劑的質量。本發明的方法能簡單、快速、準確地分析非布司他的純度和含量並 能有效的控制中間體雜質。

發明內容
本發明提供了一種快速分析分離非布司他及其中間體雜質的高效液相色譜法，從 而實現了非布司他及其中間體雜質的分離測定。
本發明所說的用高效液相色譜法分離與分析非布司他及其中間體雜質的方法，是 選擇以氨基鍵合矽膠或烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，以一定比例的有機相_緩衝 液為流動相。上述所說的以氨基鍵合矽膠或烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，優選十八烷 基矽烷鍵合矽膠的色譜柱。本發明的流動相中的有機相選自甲醇、乙腈、四氫呋喃，優選甲醇、四氫呋喃。
本發明的流動相，有機相-緩衝液的的比例為15 85 35 65，優選25 75。本發明的流動相中所選用的緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液，優選磷酸 鹽緩衝液，最優選磷酸二氫鉀緩衝液，緩衝液的濃度範圍為0. 01mol/L 0. 05mol/L，優選 0.01mol/L。本發明所述的分析分離方法，可以依照以下方法實現(1)取待處理樣品適量，用甲醇-四氫呋喃(4 1)溶解，配製成每Iml中含0. Img 的混合樣品溶液。(2)設置流動相流速為1. OmL/min,檢測波長為314nm，色譜柱溫度為室溫。(3)取(1)的混合樣品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，完成非布司他原料藥及其中間 體的分離與分析。本發明通過選擇適當的固定相和流動相，以及適當的測定條件，為準確的完成非 布司他的分析分離提供一種可靠的方法。


圖1 按照實施例1條件分離的非布司他原料藥及其中間體HPLC2 按照實施例2條件分離的非布司他原料藥及其中間體HPLC3 按照實施例3條件分離的非布司他原料藥及其中間體HPLC圖
具體實施例方式實施例1儀器SHIMADZU LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-ΙΟΑνρ紫外檢測器；色譜柱C18(250X4.6mm，5ym)；流動相0. 01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH值至3. 0)-(甲醇-四氫呋 喃)(80 20) = 25 75流速1· OmL/min檢測波長314nm柱溫室溫進樣體積20 μ 1試驗步驟稱取非布司他與中間體各10mg，同置於IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃(4 1) 溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為 混合樣品溶液；另分別稱取非布司他及中間體，分別置於IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃 (4 1)溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結果見圖1。圖1中1號峰為中間體1，2號峰為非布司他主峰，3號峰為中間體2，4 號峰為中間體3，5號峰為中間體5，6號峰為中間體4 ；可以觀察到在該條件下，非布司他主 峰與其他5個中間體分離完全，非布司他主峰時間在6. 7min左右。實施例2 儀器LC-10AT高效液相色譜儀；島津SPD-10A紫外檢測器；色譜柱C18(250X4.6mm，5ym)流動相0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH值至3. 0)-(甲醇-四氫呋 喃)(80 20) = 30 70流速L0mL/min檢測波長314nm柱溫室溫進樣體積20 μ 1試驗步驟稱取非布司他與中間體各10mg，同置於IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃(4 1) 溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為 混合樣品溶液；另分別稱取非布司他及中間體，分別置於IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃 (4 1)溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖 勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結果見圖2。圖2中1號峰為中間體1，2號峰為非布司他主峰，3號峰為中間體2，4 號峰為中間體3，5號峰為中間體5，6號峰為中間體4 ；可以觀察到在該條件下，非布司他主 峰與其他5個中間體分離完全，非布司他主峰時間在11. Imin左右。實施例3儀器LC-10AT高效液相色譜儀；島津SPD-10A紫外檢測器；色譜柱C18(250X4.6mm，5ym)流動相0. 05mol/L磷酸二氫銨溶液(用磷酸調節pH值至3. 0)-(甲醇-四氫呋 喃)(80 20) = 30 70流速L0mL/min檢測波長314nm柱溫室溫進樣體積20 μ 1試驗步驟稱取非布司他與中間體各10mg，同置於IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃(4 1) 溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為 混合樣品溶液；另分別稱取非布司他及中間體，分別置於IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃 (4 1)溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖 勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結果見圖3。圖3中1號峰為中間體1，2號峰為非布司他主峰，3號峰為中間體2，4 號峰 為中間體3，5號峰為中間體5，6號峰為中間體4 ；可以觀察到在該條件下，非布司他主 峰與其他5個中間體分離完全，非布司他主峰時間在12. Omin左右。
權利要求
一種分離分析非布司他(Febuxostat)高效液相色譜方法，其特徵在於以氨基鍵合矽膠或烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，以有機相-緩衝液為流動相。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於選擇氨基鍵合矽膠或十八烷基矽烷鍵合矽 膠為固定相的色譜柱，優選十八烷基矽烷鍵合矽膠的色譜柱。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述有機相選自甲醇、乙醇、乙腈、四氫呋 喃，優選甲醇、四氫呋喃。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述有機相與緩衝液的比例範圍為 15 85 35 65，優選 25 75。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述緩衝液選自磷酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩 衝液，優選磷酸鹽緩衝液，最優選磷酸二氫鉀緩衝液。
6.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於所述緩衝液的濃度範圍為0.Olmol/L 0. 05mol/L，優選 0. 01mol/L。
7.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述的方法包括以下幾個步驟(1)取待處理樣品適量，加有機溶劑溶解，配製成混合樣品溶液。(2)設置流動相流速為0.5 1. 5mL/min，檢測波長為314nm。(3)取(1)的混合樣品溶液2-50μ 1注入液相色譜儀，完成非布司他原料藥及其中間體 的分離與分析。
8.根據權利要求7所述的方法，其特徵為樣品溶液的配製中採用的有機溶劑為甲 醇_四氫呋喃(4 1)。
9.根據權利要求7所述的方法，其特徵為流動相的流速為l.OmL/min。
全文摘要
本發明提供了一種通過高效液相色譜法分離與分析非布司他的方法，選擇氨基鍵合矽膠或十八烷基矽烷鍵合矽膠為固定相的色譜柱，採用該方法可以實現非布司他及其雜質的快速分離和分析。
文檔編號G01N30/50GK101881756SQ20091003129
公開日2010年11月10日 申請日期2009年5月4日 優先權日2009年5月4日
發明者倪桃, 冒宜蘭, 馮明聲, 姚曉敏, 張璐, 曹於平, 鄭文豔 申請人:南京海辰藥業有限公司