一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法
2023-05-23 08:07:46
一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法
【專利摘要】本發明研究了一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的誘變育種等步驟，本發明方法所製備的吳茱萸可以提高突變頻率，得到豐富的變異體，繁殖率高，生長周期短，次生代謝物成分含量高。
【專利說明】 一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種吳茱萸的快速繁殖方法，屬於生物【技術領域】。
【背景技術】
[0002]吳茱萸,芸香科,別名吳萸、茶辣、漆辣子、臭辣子樹等，Tetradium ruticarpum, /Jn喬木或灌木，產秦嶺以南各地，但海南未見有自然分布，曾引進栽培，均生長不良。生於平地至海拔1500米山地疏林或灌木叢中，多見於向陽坡地。各地有小或大量栽種。吳茱萸對土壤要求不嚴，一般山坡地、平原、房前屋後、路旁均可種植。中性，微鹼性或微酸性的土壤都能生長，但作苗床時尤以土層深厚、較肥沃、排水良好的壤土或砂壤土為佳，低洼積水地不宜種植。是一種藥用植物，治吞酸，陰毒腹痛，疝氣，血痢，喉舌口瘡，現代研究表明對中樞神經系統，消化系統，心血管系統皆有很好的療效。常用的繁殖方式有根插繁殖，枝插繁殖，分櫱繁殖，但繁殖效果不理想，現代組培技術應用於吳茱萸的繁殖尚無人研究，利用組培技術結合誘變劑處理可以提高繁殖效率，提高吳茱萸的品質。
【發明內容】
[0003]本發明所要解決的技術問題是提供一種吳茱萸的組培快速繁殖方法，由該方法所製備可以提高突變頻率，得到豐富的變異體，繁殖率高，生長周期短，次生代謝物成分含量聞。
[0004]本發明所要解決的技術問題是通過以下方案來實現的:
取吳茱萸葉片，在流水衝洗3min，毛刷去除便面汙垢，超淨工作檯上次氯酸鈉處理14min,無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25 °C，誘導出來的愈傷組織30天後轉入附加了乙基半氨酸的培養基中進行右邊處理，誘變後的愈傷組織加入改良DCR+NAA4.8-5.4Mm/L+TDZ0.2-0.4Mm/L+氯化鈷0.01-0.05Mm/L+半乳糖60g/L培養基中進行愈傷組織分化植株再生。
[0005]採用本發明試管苗長勢好，誘導率高，周期短，操作可控，可進行工業擴大化生產。
[0006]下面將結合【具體實施方式】對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。
【具體實施方式】
[0007]實施例1
取吳茱萸葉片，在流水衝洗3min，毛刷去除便面汙垢，超淨工作檯上次氯酸鈉處理14min,無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，誘導出來的愈傷組織30天後轉入附加了乙基半氨酸的培養基中進行右邊處理，誘變後的愈傷組織加入改良DCR+NAA4.8Mm/L+TDZ0.2Mm/L+氯化鈷0.0lMm/L+半乳糖60g/L培養基中進行愈傷組織分化植株再生，誘導率90%。
[0008]實施例2
取吳茱萸葉片，在流水衝洗3min，毛刷去除便面汙垢，超淨工作檯上次氯酸鈉處理14min,無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，誘導出來的愈傷組織30天後轉入附加了乙基半氨酸的培養基中進行右邊處理，誘變後的愈傷組織加入改良DCR+NAA5.4Mm/L+TDZ0.4Mm/L+氯化鈷0.05Mm/L+半乳糖60g/L培養基中進行愈傷組織分化植株再生，誘導率91%。
[0009]實施例3
取吳茱萸葉片，在流水衝洗3min，毛刷去除便面汙垢，超淨工作檯上次氯酸鈉處理14min,無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分，滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，pH5.8，暗室培養，溫度25°C，誘導出來的愈傷組織30天後轉入附加了乙基半氨酸的培養基中進行右邊處理，誘變後的愈傷組織加入改良DCR+NAA5Mm/L+TDZ0.4Mm/L+氯化鈷0.0lMm/L+半乳糖60g/L培養基中進行愈傷組織分化植株再生，誘導率92%。
【權利要求】
1.一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，包括無菌外植體的獲得、愈傷組織的誘導、愈傷組織的誘變育種、生根誘導，其主要步驟如下: (1)取吳茱萸的葉片，在超淨工作檯上進行消毒處理； (2)取步驟(I)滅菌處理過的吳茱萸葉片接入培養基配方為DCR+NAA0.2mg/L+6-BA0.5mg/L誘導培養基中進行愈傷組織誘導培養，附加蔗糖30g/L，瓊脂6.5g/L，PH5.8，暗室培養，溫度25 0C ； (3)取步驟(2)誘導出來的愈傷組織30天後轉入附加了乙基半氨酸的培養基中進行右邊處理； (4)取步驟(3)誘變後的愈傷組織加入改良DCR+NAA4.8-5.4Mm/L+TDZ0.2-0.4Mm/L+氯化鈷0.01-0.05Mm/L+半乳糖60g/L培養基中進行愈傷組織分化植株再生。
2.按照權利要求1所述的一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(I)吳茱萸葉片，在流水衝洗3min，毛刷去除便面汙垢，超淨工作檯上次氯酸鈉處理14min，無菌水衝洗5遍，吸水紙吸去表面水分。
3.按照權利要求1所述的一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(3 )誘變育種選擇乙基半氨酸能提高誘變率，篩選出優良品種。
4.按照權利要求1所述的一種吳茱萸誘變育種的快速繁殖方法，其特徵在於:步驟(4)中添加了氯化鈷，可以提高其次生代謝物質的含量。
【文檔編號】A01H4/00GK104255470SQ201410463159
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月12日 優先權日:2014年9月12日
【發明者】楊存 申請人:南京通澤農業科技有限公司