三倍體對蝦育苗方法
2023-05-14 18:30:21 1
專利名稱:三倍體對蝦育苗方法
一種三倍體對蝦育苗方法,屬於水產養殖技術領域。主要用來培育對蝦養殖新品種。
在現有技術中,魚類和貝類三倍體育種研究開發的較多,而且某些種類如太平洋牡蠣等已經進入大規模應用階段,在美國已申請到專利。而對蝦三倍體育苗只有本發明人單位的相建海於1990年跟美國的Clark合作,以銳脊單肢蝦為對象,開展了蝦類染色體組操作可行性的研究,當時僅在實驗室內獲得銳脊單肢蝦的三倍體的幼體-蚤狀幼體;另據報導青島海洋大學的戴繼勳等1991年在實驗室利用溫度和細胞松馳素B誘導中國對蝦三倍體,結果也是只在實驗室獲得少量蚤狀幼體。由於對蝦夜間和凌晨產卵的繁殖習性,難以獲得批量受精卵,故以往的實驗都只能在實驗室中用200-300個受精卵進行誘導,且僅育出少量的對蝦無節幼體和蚤狀幼體;而沒有培育出幼蝦,更不用說養成了,因此均未進入實用階段。此外,利用染色體製片進行倍性和誘導率的檢測費時費力,不適用於規模生產;利用細胞松馳素B作誘導劑毒性大,誘導過程複雜,生產成本高。
本發明的目的在於提供一種切實可行,能改變對蝦繁殖習性,誘導工作在白天進行,誘導過程簡便,誘導劑毒性低,成本低,工藝流程可操作性強,誘導率高,檢測迅速,適於規模生產的三倍體對蝦育苗方法,不僅能培育出幼蝦而且還能養成。
根據對蝦的生理生態尤其是繁殖習性、光控和生殖學原理及6-DMAP以及流式細胞計的特點,針對已有技術中所存在的主要問題,本發明的基本構思是利用調節、控制親蝦產卵的環境條件,促使對蝦改變其產卵習慣,即由夜間產卵改成便於操作和把握開始誘導之零時的白天產卵,以便獲得適時的批量受精卵,並用6-DMAP作誘導劑來誘導三倍體,用流式細胞計檢測倍性以便能早期、迅速、準確地確定誘導率,從而實現發明目的。
本發明所述的三倍體對蝦育苗方法,其特徵在於該方法包括(1)改對蝦夜間產卵為白天產卵,(2)用6-DMAP作誘導劑誘導對蝦三倍體,(3)將對蝦胚胎或幼體、成體製成細胞懸液,用流式細胞計測定細胞中的相對DNA含量,進而確定對蝦染色體倍性這樣三個步驟。
上述的(1)改對蝦夜間產卵為白天產卵其方法是將卵巢發育至四期的親蝦蓄養在體積為3-6M3的養殖池中,7-19時用黑布遮擋光線,19時至次日7時則將黑布撤掉並用200-500Lux日光燈照射,養殖水溫從11-13℃逐漸升至16-17℃,養殖水的PH值為7.9-8.3。
上述的(2)用6-DMAP作誘導劑誘導對蝦三倍體,其方法是將6-DMAP用海水配製成200-400μM的處理液,在親蝦產卵後8-20分鐘,用孔徑為140μm的尼龍網將受精卵收集起來放進處理液中浸泡8-16分鐘,然後用海水洗卵2-3次,最後將卵放進孵化池中進行孵化。
上述的(3)確定對蝦染色體倍性的方法是取對蝦精巢,在等滲液中研磨,以40μm篩絹過濾,製成濃度為106細胞/ml,用PI染色,用流式細胞計測出單倍體的DNA含量,No,另將誘導得到的對蝦胚胎或幼體、成體的組織在等滲液中研磨,以40μm篩絹過濾,製成濃度為106細胞/ml,用PI染色,用流式細胞計測出單倍體的DNA含量N,以N/No確定染色體的倍性。
本發明的優點是整個工藝流程只有三個步驟且可操作性強,容易掌握,能改變對蝦的產卵習慣,白天產卵既便於操作,又能清楚地觀察到產卵的全過程以便較準確地把握操作開始的零時並能獲得批量的受精卵,用6-DMAP作誘導劑,不僅無毒性,費用低,而且誘導率可高達75%以上;利用流式細胞計檢測不僅省時省力,而且能早期快速準確地確定誘導率。用本發明不僅能批量的育出三倍體對蝦幼蝦苗,而且能夠養成,通過對比試驗證明成活率可提高21.6%,比二倍體體長增加15%以上。
本發明的最佳實施例之一是1993年5月在本申請人的試驗場做的實驗。將卵巢發育至四期的親蝦蓄養在體積為4M3的養殖池中,白天用黑布遮擋光線,時間為700-1900; 晚上將黑布撤掉,用光照強度為200-500Lux的日光燈照射,時間為1900-2400-700,養殖水溫從12℃逐漸升到16.5℃,養殖水PH值7.9-8.3。
將6-DMAP用海水配製成200-400μm的處理液,在上述的親蝦產卵後8-20分鐘,用孔徑為140μm的尼龍網將受精卵收集起來放進該處理液中浸泡12分鐘左右,泡過後用海水洗卵2次後立即放到孵化池中進行孵化,在誘導的早期用流式細胞計測定細胞中的DNA總量,確定其倍性。誘導率可達75%。共培育出三倍體中國對蝦稚蝦1.2萬尾,在室內養至11月6日,體長達8.25-10.30cm。
作為本實施例的變更1、除中國對蝦外,可用於其他蝦類,如斑節對蝦、長毛對蝦、日本對蝦、墨吉對蝦、南美白對蝦、新對蝦類和其他蝦類;2、本發明的方法還可用於蝦類四倍體和非整倍體的誘導實施。
權利要求
1.一種三倍體對蝦育苗方法,其特徵在於該方法包括(1)改對蝦夜間產卵為白天產卵,(2)用6-DMAP作誘導劑誘導對蝦三倍體,(3)將對蝦胚胎或幼體、成體製成細胞懸液,用流式細胞計測定細胞中的相對DNA含量,進而確定對蝦染色體倍性這樣三個步驟。
2.根據權利要求1所述的三倍體對蝦育苗方法,其特徵在於上述的(1)改對蝦夜間產卵為白天產卵其方法是將卵巢發育至四期的親蝦蓄養在體積為3-6M3的養殖池中,7-19時用黑布遮擋光線,19時至次日7時則將黑布撤掉並用200-500Lux日光燈照射,養殖水溫從11-13℃逐漸升至16-17℃,養殖水的PH值為7.9-8.3。
3.根據權利要求1所述的三倍體對蝦育苗方法,其特徵在於上述的(2)用6-DMAP作誘導劑誘導對蝦三倍體,其方法是將6-DMAP用海水配製成200-400μM的處理液,在親蝦產卵後8-20分鐘,用孔徑為140μm的尼龍網將受精卵收集起來放進處理液中浸泡8-16分鐘,然後用海水洗卵2-3次,最後將卵放進孵化池中進行孵化。
4.根據權利要求1所述的三倍體對蝦育苗方法,其特徵在於上述的(3)確定對蝦染色體倍性的方法是取對蝦精巢,在等滲液中研磨,以40μm篩絹過濾,製成濃度為106細胞/ml,用PI染色,用流式細胞計測出單倍體的DNA含量,No,另將誘導得到的對蝦胚胎或幼體、成體的組織在等滲液中研磨,以40μm篩絹過濾,製成濃度為106細胞/ml,用PI染色,用流式細胞計測出單倍體的DNA含量N,以N/No確定染色體的倍性。
全文摘要
一種三倍體對蝦育苗方法,屬水產養殖技術,主要用來培育對蝦養殖新品種。其特徵是該方法包括:改對蝦夜間產卵為白天產卵和用6-DMAP作誘導劑誘導對蝦三倍體以及用流式細胞計檢測倍性這樣三個步驟。具有工藝流程短,可操作性強,容易掌握,能改變對蝦產卵習性,白天產卵既便於操作,又能清楚地觀察到產卵的全過程並能獲得批量受精卵,誘導劑無毒性,費用低,誘導率高,不僅能批量育出對蝦三倍體,而且能養成等優點。
文檔編號A01K61/00GK1177437SQ9710609
公開日1998年4月1日 申請日期1997年9月9日 優先權日1997年9月9日
發明者相建海 申請人:中國科學院海洋研究所