蟲草頭孢菌連續發酵工藝的製作方法
2023-04-30 14:40:36 5
專利名稱：蟲草頭孢菌連續發酵工藝的製作方法
技術領域：
本發明是一種不經過代謝產物提取工藝的微生物發酵工程，特別是用於靈芝、密環菌、蟲草菌等有效組分與菌體不需要分離的發酵技術。
目前蟲草頭孢菌是採用間歇性發酵工藝生產的，工藝環節多，中間間歇時間長，效率低，能耗大，尚不能滿足我國醫藥工業發展的需要。
本發明的目的是為克服老式的間歇性發酵工藝的缺點，減少工藝環節，提高工作效率，減少成本，提高產品質量和產量，用蟲草頭孢菌連續發酵工藝代替原來的間歇性發酵工藝來滿足我國醫藥工業發展的需要。
蟲草頭孢菌是從冬蟲夏草新鮮樣本中分離出來的一株藥用真菌，與天然蟲草成份相比，二者具有相同的成份。本連續發酵工藝是去掉了間歇式發酵工藝中的清缸、上料、滅菌、冷卻等準備性工藝環節，全過程在密閉的管道化設備中進行，減少了汙染，提高了產品質量和產量。
1、蟲草頭孢菌的分離採冬蟲夏草產區新鮮樣本，去泥、清洗，經表面消毒，去蟲體的表皮避開腸道，把白色菌核切成小塊排列於盛有培養基的培養皿中，一周後長出白色菌絲，在P、D、A培養基進行純培養。
2、蟲草頭孢菌的培養經過培養基的篩選，培養成份的組合和培養基配方，採用蛋白腖2～8g，酵母粉2～10g，花生粉10～20g，蔗糖10～20g，MgSo40.2～0.5g，KH2PO40.3～1g，水1000ml，培養溫度25℃～30℃，經過4天的培養基培養，在整個斜面上長滿白色茸毛狀菌絲。
3、蟲草頭孢菌的深層培養蟲草頭孢菌經搖床振蕩擴大培養，接種到種子罐擴大深層培養，培養基配方為花生0.5%～1%，酵母粉0.3%～0.5%，蔗糖1.5～2.0%，MgSo40.2～0.5g，KH2PO40.3～1g。然後經過管道，壓入經過培養料滅菌的發酵罐內發酵生產，經過該菌的生長，對數生長期，在菌絲衰老前，代謝產物達到最高峰時進行出罐。但從生長到生長盛期，時間較長，佔整個生長期的 2/3 左右時間。而增加種子量，可以顯著縮短這段時間。分析該菌的生長特點，以及取其菌體作為產品的特點，經試驗可以採用連續發酵工藝，發酵工藝流程圖。
該工藝的主要特點是，除第一次需從外界接入種子外，以後就利用發酵罐內的發酵液作為種子，間隔一定時間進行補料，發酵一定時間後就出罐，為此反覆循環，完全在密閉的管道內進行。
用原來的間歇性發酵工藝，是採用二級發酵工藝，工藝流程是搖床液體振蕩→種子罐擴大→發酵罐生產→出罐→乾燥→包裝。搖床培養要48小時，種子罐發酵36小時，發酵罐經48小時發酵後出罐，再經清罐、上料，滅菌，冷卻等工序需12小時，共計要148小時，而連續發酵工藝是不斷補料，不斷出罐，周期是8小時，減少了工藝環節，縮短了時間。另外，用連續發酵工藝去掉了清罐，上料，滅菌，冷卻等準備性工藝環節，全過程在密閉的管道化設備中進行，減少了汙染機會，降低了成本，提高了產品的質量和產量。另外，蟲草頭孢菌體是治療難治性心律失常的新的有效藥物，對治療緩慢性心律失常，該藥有獨到之處。經專家鑑定，該藥具有保健，滋補之作用。因天然蟲草價格昂貴，分離出蟲草菌進行發酵生產，可以滿足社會的治療用藥，保健用藥的需要，同時不斷地改進生產方式，可以不斷地提高產品質量和產量。可見，大量生產該藥的系列產品，對發展我國醫藥工業，確保廣大人民群眾的身體健康，具有重要意義。
實施例採冬蟲夏草產區新鮮樣本，去泥，清洗，經表面消毒，去蟲體的表皮避開腸道，把白色菌核切成小塊排列於盛有培養基的培養皿中，一周後長出白色菌絲，在P、D、A培養基進行純培養。蟲草頭孢菌在馬鈴薯，葡萄糖，瓊脂上，在28℃中培養5天，菌落圓形，邊緣整齊，平坦，較緊密，白色，茸毛呈短絨狀，無擴散於培養基的色素。分生孢子梗透明，直或稍彎，單生或2～3個聚生，但不呈輪狀，末端或基端無明顯膨大，15-40×1.5-2μm，分子孢子頭呈假頭狀，直徑20×35μm，由大約20個分生孢子粘聚而成，分生孢子無色，單孢，橢圓形2.5～6(8)×1.5～1.8(2)μm。
蟲草頭孢菌發酵培養基配方花生粉5g，酵母10g，蔗糖15g，MgSo40.5g，KH2Po41g，PH6.5～6.0，水1000ml，在上述培養基經發酵一定時間後，開始產生孢梗及孢子，由於發酵過程中不斷攪拌，所以孢子梗上產生的分生孢子頭僅存一個孢子，即一個孢子梗上一個分生孢子。隨著發酵時間增長，菌絲密度增大，PH值下降，大量產生代謝產物，經還原糖和氨態氚等測試，到發酵完成後進行出罐。
蟲草頭孢菌深層培養的培養基配方花生粉5g，酵母10g，蔗糖15g，MgSo40.5g，KH2Po41g，PH6.5～6.0，水1000ml，從種子罐內發酵成熟的種子移入發酵罐內，當發酵完成後，取出一定量的發酵液，補入同量的培養液，繼續發酵，為此反覆，不斷補料，不斷出罐，整個發酵工藝過程是連續的。
權利要求
1.蟲草頭孢菌(Cephalosporium Sinensis Yu.etChen.SP.nov)連續發酵工藝的特徵是(a)分離從冬蟲夏草新鮮樣本中分離而得，(b)斜面培養基由蛋白腖，酵母，花生粉，蔗糖，MgSo4，KH2PO4和水組成，培養溫度在25℃～30℃，(c)深層培養的培養基為花生，酵母，蔗糖，MgSO4，KH2PO4，(d)連續發酵從種子罐內發酵成熟的種子移入發酵罐內，當發酵完成後，取出一定量的發酵液，補入同量的培養液，繼續發酵，反覆循環成連續性生產。
2.根據權利要求1所述的連續發酵工藝。其特徵是斜面培養基配方為蛋白腖2～8g，酵母粉2～10g，花生粉10～20g，蔗糖10～20g，MgSo40.2～0.5g，KH2Po40.3～1g，水1000ml。
3.根據權利要求1或2所述的連續發酵工藝，其特徵是深層培養的培養基配方為花生0.5～1.0%，酵母粉0.3%～05.%，蔗糖15%～20%，MgSo40.2～0.5g，KH2Po40.3～1g。
全文摘要
蟲草頭孢菌是從冬蟲夏草中分離得到的一株藥用菌和食用菌，具有治病和保健之功能。該菌體一般是用間歇性發酵工藝生產而得，本發明是用發酵罐發酵、補料、出罐的反覆循環連續發酵工藝進行生產，取消了清罐、空消、進料、實消的工藝，延長了實際生產時間，能較大幅度的提高產量，而且，連續發酵工藝能夠達到管道化生產，減少了汙染的機會，從而提高了產品的質量。
文檔編號C12N1/14GK1040391SQ8910400
公開日1990年3月14日 申請日期1989年6月13日 優先權日1989年6月13日
發明者俞永信, 方良珍 申請人:俞永信, 方良珍