一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法
2023-04-29 20:50:41 1
一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法
【專利摘要】本發明公開了一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法，該方法採用反向液相色譜法測定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，並對黃豆和發酵後的豆豉進行了比較，本發明的測定與分析方法原理簡單，操作方便，尤其驗考察了甲醇－水系統、甲醇－０.２％磷酸系統、乙腈－水系統、乙腈－０.４％磷酸系統和乙腈－０.２％磷酸系統等流動相，結果表明乙腈－０.２％磷酸（３６∶６４）分離效果最好,在供試品的製備方法中，對無水乙醇、８０％乙醇、７５％乙醇、７０％乙醇、６５％乙醇、５０％乙醇、３０％乙醇超聲提取進行考察,結果表明７０％乙醇超聲提取３０ｍｉｎ效果最好,溶劑空白顯示對測定結果無影響，方法專屬性強，方法簡單易行。
【專利說明】一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法，屬於生物醫藥【技術領域】。
【背景技術】
[0002]我國食用黃豆已有5千年歷史，研究發現，食用黃豆對許多疾病，尤其是老年性疾病具有治療或保健作用，豆豉是我國具有民族特色的傳統大豆發酵製品，一直以其營養豐富、風味獨特在世界飲食文化中具有特殊的地位。豆豉不僅營養價值高，而且可入藥，中醫歷代醫書中都有豆豉治療疾病的記載，漢代張仲景的《傷寒論》中即有「桅子豉湯」，方中用桅子、豆豉煎湯治療外感風寒、不思飲食等症；李時珍的《本草綱目》中則有「豆豉開胃增食、消食化滯、發汗解表、除煩喘等療效」的記載，近年來，大豆及大豆製品的生物活性物質和保健作用逐漸成為研究的熱點，其中異黃酮是一類重要的生理活性物質，具有多種生理功能，如降低血糖濃度調節脂代謝、抗腫瘤作用、對血管的防護作用、雌激素雙向調節作用、預防骨質疏鬆症、較強的抗氧化活性和抗真菌活性等。黃豆中含有異黃酮，分為游離型的苷元(a g I y c ο η)和結合型的糖苷(g lucosid e )兩類，大豆發酵後苷轉變為苷元，而大豆苷元和染料木素是2種含量較高的苷元成分。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是:提供一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法，以提供一種新的檢測手段達到快速檢測大豆異黃酮類成分含量，以克服現有技術的不足。
[0004]本發明的技術方案
一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法，該方法採用反向液相色譜法測定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，並對黃豆和發酵後的豆豉進行了比較。
[0005]前述的一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法中，在所述反向液相色譜法測定中採用乙腈一 0.2 %磷酸系統實現分離，同時採用表明7 O %乙醇超聲提取3 Omi η。
[0006]由於採用上述技術方案，與現有技術相比，本發明的測定與分析方法原理簡單，操作方便，尤其驗考察了甲醇一水系統、甲醇一 0.2 %磷酸系統、乙腈一水系統、乙腈一0.4 %磷酸系統和乙腈一 0.2 %磷酸系統等流動相，結果表明乙腈一 0.2 %磷酸( 3 6:6 4 )分離效果最好，在供試品的製備方法中，對無水乙醇、8 O %乙醇、7 5 %乙醇、7 O %乙醇、6 5 %乙醇、5 O %乙醇、3 O %乙醇超聲提取進行考察，結果表明7 O %乙醇超聲提取3 Omi η效果最好，溶劑空白顯示對測定結果無影響，方法專屬性強，方法簡單易行。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0007]附圖1為對照組的黃酮含量色譜圖；
附圖2為豆鼓的黃酮含量色譜圖；
附圖3為黃豆的黃酮含量色譜圖；
附圖4為大豆苷元加樣回收率結果統計圖；
附圖5為染料木素加樣回收率顯示圖；
附圖6為3批黃豆及發酵後豆豉中異黃酮含量統計圖。
【具體實施方式】
[0008]下面結合附圖對本發明作進一步的詳細說明，但不作為對本發明的任何限制。
[0009]本發明的實施例:
I材料
AgilentllOO系列高效液相色譜儀，S G 8 2 O O H超聲儀(上海冠特超聲儀器有限公司)；豆豉由本實驗室自行分離的菌種發酵製得，黃豆購於超市；大豆苷元對照品(中國藥品生物製品檢定所，批號I I I 5 O 2 — 2 O O I O I)及染料木素對照品(中國藥品生物製品檢定所，批號I I I 7 O 4 — 2 O O 5 O I );乙腈為色譜純，水為純淨水，其餘試劑為分析純。
[0010]2 方法和結果
2.1 色譜條件
色譜柱 Diamons i I C18(250 mm X 4.6 mm, 5 μ m),保護柱 Phenomenex C18(4.6 mm X 3 mm, 5 μ m),流動相乙臆一0.2 % 憐酸(3 6: 6 4 )，流速為I.0 m I / m i η，柱溫3 O °C，檢測波長2 6 O n m，在此條件下能同時檢測染料木素和大豆苷元並產生較好分離且空白無幹擾。
[0011]2.2 溶液製備
精密稱取染料木素對照品2 4.91m g，加無水乙醇定容至25ml為貯備液一；精密稱取大豆苷元對照品2 4.31 m g用無水乙醇定容至25ml作為貯備液二，精密吸取貯備液一和貯備液二各I m I，用無水乙醇稀釋至10ml作為對照品溶液，其中含染料木素為9.9 6 4 m g / L ,大豆苷元為9.7 2 4 m g / L ,分別將豆豉、黃豆粉碎，稱取粉末各I g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入7 0%乙醇2 5ml，密塞，稱定重量，超聲處理3 O m i η,放冷,用7 O %乙醇補足減失的重量,搖勻過濾,取續濾液過
0.4 5 μ m微孔濾膜，即得供試品溶液。
[0012]2.3 取上述各種溶液各2 O μ I按2.1項下的色譜條件注入色譜儀檢測，見附圖1、2和3。
[0013]2.4 線性關係考察
精密吸取對照品溶液4、8、12、16&24μ 1，分別注入液相色譜儀中，測定峰面積值，以進樣量為橫坐標、峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程:大豆苷元為Y =
4.7369Χ+23.3 3 2 ( r = 0.9996 )，在 0.0389 ?0.2334μ g呈良好線性關係；染料木素為Υ=6.7678Χ+4.2 I O 7 ( r = 0.9999)，在
0.0399?0.2391μ g呈良好線性關係。
[0014]2.5 精密度試驗精密吸取2 O μ I對照品溶液連續進樣5次，測得大豆苷元峰面積的R S D為
0.4 6%,染料木素峰面積的RSDSl.60%。
[0015]2.6 重複性試驗
稱取同一批號的豆豉供試品樣品5份，按供試品溶液製備方法分別製備供試品溶液，按2.3項下方法進行測定，結果豆豉中大豆苷元的R S D = 2.2 O %，染料木素R S D=1.6 9 %。
[0016]2.7 穩定性實驗
吸取豆豉供試品溶液，在O、2、4、6、I 2 h內分別進樣2 O μ I，結果表明豆豉供試品溶液中大豆苷元和染料木素在I 2 h內基本穩定。
[0017]2.8 回收率試驗
稱取批號2 0 0 9 0 9 0 9 ?妓樣品0.7 g，精S稱定，加入直具塞維形瓶中，每份分為3份分別加入對照品溶液，結果見附圖4和附圖5，從附圖4和附圖5可以看出，大豆苷元平均回收率為94.9 2 %, R S D = 1.5 O % ;染料木素為99.35% ,RSD =
1.4 4 %。
[0018]2.9 樣品測定
按「2.2」項方法製備供試品溶液，按「2.3」項下條件，測定黃豆及發酵後的3批豆豉(幹品)，外標法計算含量，結果見表3。附圖6，3批豆豉的大豆苷元平均含量為I 2 3.2 7 μ g/g，RSD=1.8 7% ;黃豆中大豆苷元平均含量為2 9.8 0，RSD=1.03%, 3批豆豉的染料木素平均含量為64.5 5 μ g/g ,RSD =1.72% ;黃豆中染料木素平均含量為26.1 8 μ g/g，RSD=1.78%。
[0019]3 討論
實驗考察了甲醇一水系統、甲醇一0.2%磷酸系統、乙腈一水系統、乙腈一0.4%磷酸系統和乙腈一 0.2 %磷酸系統等流動相，結果表明乙腈一 0.2%磷酸(3 6:
64)分離效果最好，在供試品的製備方法中，對無水乙醇、8 O %乙醇、7 5 %乙醇、
7O %乙醇、6 5 %乙醇、5 O %乙醇、3 O %乙醇超聲提取進行考察，結果表明7 O %乙醇超聲提取3 Omi η效果最好。溶劑空白顯示對測定結果無影響，方法專屬性強，方法簡單易行。
[0020]實驗同時測定了黃豆和發酵後豆豉樣品中大豆苷元和染料木素的含量，發現豆豉中這2種成分的含量明顯的比黃豆高。查閱文獻，發現未發酵的大豆製品主要以苷的形式存在，發酵後受菌種、溫度、溼度、酸度等影響，異黃酮甙元與糖發生解離，使游離甙元含量提高，發酵比未發酵豆製品有更高的生物利用率。
【權利要求】
1.一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法，其特徵在於:該方法採用反向液相色譜法測定豆豉中大豆苷元和染料木素的含量，並對黃豆和發酵後的豆豉進行了比較。
2.根據權利要求1所述的一種測定豆豉中大豆異黃酮類成分含量的測定與分析方法，其特徵在於:在所述反向液相色譜法測定中採用乙腈一 0.2 %磷酸系統實現分離，同時採用表明7 O %乙醇超聲提取3 O m i η。
【文檔編號】G01N30/02GK104458951SQ201410739981
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月8日 優先權日:2014年12月8日
【發明者】敖雲霞 申請人:敖雲霞