一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯製備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法

2023-04-23 06:52:06 2

專利名稱：一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯製備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法
技術領域：
本發明涉及一種製備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，尤其涉及了一種酶輕 化3 β -膽固醇乙酸酯製備7 β -羥基-3 β膽固醇乙酸酯的方法。
背景技術：
維生素D，是固醇類衍生物，在人體內的主要作用是促進骨質鈣化，調節鈣、磷代謝 及細胞生長分化，還是一種良好的選擇性免疫調節劑。其中又以活性維生素D3的生理作用 最強，圖(III)所示的為維生素D3中的一種。
權利要求
1. 一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯製備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，其特徵在 於，包括下列步驟步驟a:將化合物3 β-膽固醇乙酸酯(I)溶解於助溶劑中，然後將溶解後的3β-膽固 醇乙酸酯(I)溶液投放到緩衝溶液中，加入酶製劑和雙氧水溶液，調節ρΗ值於6 10之 間，於搖床中或者動力攪拌裝置中充分攪拌反應，控制反應溫度為15 50°C，反應時間為 0.5-9h ；步驟b 採用TLC矽膠板或高效液相色譜對反應過程進行跟蹤監測，直至反應進行完畢；步驟c 反應完畢後，用有機溶劑萃取反應液，然後減壓除去有機溶劑，得到化合物 7β-羥基-3β-膽固醇乙酸酯(II)的粗品； 上述酶製劑為未經純化的游離酶粉末； 反應方程式為
2.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特徵在於所述的步驟a中的攪拌轉速控制在50-200r/min。
3.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特徵在於所述的酶製劑為細胞色素Ρ450單加氧酶、細胞色素Ρ450羥化 酶、秀麗隱杆線蟲單加氧酶中的任何一種。
4.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特徵在於所述的步驟a中雙氧水溶液的濃度為1 100mM。
5.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯製備7β-羥基-3β膽固醇乙 酸酯的方法，其特徵在於所述的步驟b中的跟蹤監測採用TLC矽膠板跟蹤監測反應進度， 使用乙酸乙酯與石油醚的混合試劑作為展開劑，通過監測反應中新產生的點的濃度和剩下 的點的濃度來判斷反應終點。
6.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特徵在於所述的步驟b中的跟蹤監測採用高效液相色譜跟蹤監測反應 進度，通過監測液相色譜中化合物7 β -羥基-3 β -膽固醇乙酸酯的形成和化合物3 β -膽 固醇乙酸酯(I)的消失來判斷反應終點。
7.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -輕基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特徵在於所述的步驟c中的有機溶劑為乙醚、甲苯、氯苯、二氯甲烷、乙 酸乙酯、異丙醚、正己烷、甲酸乙酯、環己烷中的任何一種。
8.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -輕基-3 β膽固醇乙酸酯的方法，其特徵在於所述的助溶劑為叔丁醇、乙醇、甲醇、異丙醇、丙酮、丁酮中的任 何一種，緩衝溶液為2 15mM，pH = 6. 0 10. 0的Tris鹽酸緩衝溶液或2 15mM，pH = 6. 8 10. 0的PBS磷酸緩衝溶液。
9.根據權利要求1或8所述的一種酶羥化3β -膽固醇乙酸酯製備7 β -羥基-3 β膽 固醇乙酸酯的方法，其特徵在於所述的助溶劑與緩衝溶液的體積比為1 20-1 5。
10.根據權利要求1所述的一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯製備7 β-羥基-3 β膽固醇 乙酸酯的方法，其特徵在於所述的化合物3β-膽固醇乙酸酯⑴與酶製劑的質量之比為 1 0. 001 0. 1。
全文摘要
本發明涉及一種製備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，尤其涉及了一種酶羥化3β-膽固醇乙酸酯製備7β-羥基-3β膽固醇乙酸酯的方法，包括下列步驟將化合物3β-膽固醇乙酸酯溶解於助溶劑中，將溶解後的3β-膽固醇乙酸酯溶液投放到緩衝溶液中，加入酶製劑和雙氧水溶液，調節pH值6～10，充分攪拌反應，反應溫度為15～50℃，反應時間為0.5-9h；採用TLC矽膠板或高效液相色譜對反應過程進行跟蹤監測，直至反應進行完畢；用有機溶劑萃取反應液，減壓除去有機溶劑，得化合物7β-羥基-3β-膽固醇乙酸酯的粗品。本發明反應條件溫和易控，合成操作比較簡單，成本低廉，產率高，革除了高毒性化學試劑，對環境友好。
文檔編號C12P33/06GK102002518SQ20101052350
公開日2011年4月6日 申請日期2010年10月28日 優先權日2010年10月28日
發明者於洪巍, 徐紅娜, 王博 申請人:浙江大學