一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基的製作方法
2023-04-23 08:34:46 6
一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種用於發酵生產去甲基金黴素的培養基，所述培養基包括碳源、氮源、無機鹽和L-賴氨酸，通過限定培養基中碳源、氮源的濃度實現提高發酵得到的去甲基金黴素的發酵單位。使用本發明所述培養基發酵生產去甲基金黴素的發酵單位能達到120h周期7000μg/mL以上，遠高於目前使用的培養基，能夠為生產企業創造較高的經濟價值。同時，所述培養基中均為水溶性物質，菌體利用較充分，從而減少了固體殘渣的排放量，降低了能耗。
【專利說明】一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基
【技術領域】
[0001] 本發明屬於微生物發酵的【技術領域】，具體涉及一種發酵法生產去甲基金黴素的過 程中使用的培養基。
【背景技術】
[0002] 去甲基金黴素，英文名稱為Demethylchlortetracycline，簡稱DMCT，又稱 地美環素、去甲氯四環素，是四環族抗生素的衍生產品，由金色鏈黴菌（Sti^ptom yces aureofaciens)產生，在1957年由McCormick首先報導。去甲基金黴素的抗菌譜與金黴素 相似，比金黴素穩定，其抗菌作用比四環素、土黴素強，臨床用於肺炎、尿路感染、淋病、細菌 性痢疾、布氏桿菌病及小兒猩紅熱等。
[0003] 去甲基金黴素不僅臨床應用效果好，還可作為原料用於生產替加環素和二甲氨基 四環素，因此具有良好的發展前途。
[0004] 目前去甲基金黴素的主要生產方式為生物發酵法，中國專利201310575478. 2公 開了一種利用金色鏈黴菌發酵生產去甲基金黴素的培養基和培養方法，去甲基金黴素菌種 培養最高發酵單位為180h發酵周期13000mg/L，但是其發酵工藝為三級發酵工藝，且其培 養基中含有魚油和蚯蚓混合粉等動物基原材料，根據獸用及人用GMP管理規定，其在工業 生產中難以實現，無法實際應用。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種在微生物發酵法生產去甲基金黴素的過程中使用的培 養基，通過該培養基發酵得到的去甲基金黴素的發酵單位120h時在7000 μ g/mL以上，同時 使用該培養基製備去甲基金黴素只需一步發酵，操作過程非常簡單。
[0006] 為了實現本發明所述目的，發明人提供了以下技術方案。
[0007] -種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，包括碳源、氮源、無機鹽和胺基酸， 其中，所述培養基中碳源的濃度為20-80g/L，氮源的濃度為10-50g/L。
[0008] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述培養基中碳源的濃度為 40-60g/L，氮源的濃度為28g/L。
[0009] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述培養基中碳源的濃度為50g/L。
[0010] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述培養基中的碳源、氮源、無機 鹽、胺基酸均為水溶性物質。
[0011] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述碳源為可溶性澱粉、蔗糖、麥芽 糖、乳糖、葡萄糖中的一種或任意兩種的混合物。
[0012] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述氮源為酵母粉、酵母浸粉、酵母 膏、大豆蛋白腖中的一種或任意兩種的混合物。
[0013] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述無機鹽為硝酸鈉、磷酸氫二鉀 和氯化銅。
[0014] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述硝酸鈉的濃度為0. 5-2g/L，優 選為I. 2g/L，磷酸氫二鉀的濃度為0. 01-0. lg/L，優選為0. 08g/L，氯化銅的濃度為l-3g/L， 優選為I. 5g/L。
[0015] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述胺基酸為L-賴氨酸。
[0016] 上述用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，所述L-賴氨酸的濃度為l_15g/L， 優選9g/L。
[0017] 發明人在研究過程中發現，用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基中，碳源和氮 源的濃度是影響微生物發酵得到去甲基金黴素發酵單位高低的主要因素。本發明通過限定 培養基中碳源的濃度為20-80g/L，氮源的濃度為10-50g/L，提高了去甲基金黴素的產率， 所得去甲基金黴素的發酵單位120時在7000 μ g/mL以上。當碳源的濃度為50g/L，氮源的 濃度為28g/L時，所得去甲基金黴素的發酵單位能達到120h周期7930 μ g/mL。
[0018] 本發明所述培養基中硝酸鈉作為速效氮源，可以調節滲透壓，磷酸氫二鉀能夠維 持菌體生長，氯化銅為金屬離子，可以刺激產素，L-賴氨酸同樣也可以刺激產素。
[0019] 本發明所述培養基的成分均選用水可溶性物質，溶解充分，可使菌體充分利用營 養物質，同時減少了固體殘渣，提高了提取過程中的固液分離效率，減少了溶媒損耗，減少 了提取過程中淨化劑的使用量、減少了固體廢物的排放，降低了能耗，減輕了生產企業由於 發酵液後處理所帶來的經濟負擔。
【具體實施方式】
[0020] 下面通過具體實施例對本發明所述內容做進一步詳細的說明。
[0021] 實施例1
[0022] 稱取葡萄糖50g，酵母粉28g，硝酸鈉 I. 2g，磷酸氫二鉀0. 08g，氯化銅I. 5g，L-賴 氨酸9g，飲用水定容至1L。接入金色鏈黴菌的種子培養物，接種量10 %，溫度28°C，培養 120h放瓶，結果得到7930 μ g/mL的去甲基金黴素。
[0023] 實施例2-5
[0024] 表1列出了實施例2-5中培養基的配方組成及發酵得到的去甲基金黴素的發酵單 位，發酵方法同實施例1。
[0025] 表 1
[0026]
【權利要求】
1. 一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，包括碳源、氮源、無機鹽和胺基酸，其 特徵在於，所述培養基中碳源的濃度為20-80g/L，氮源的濃度為10-50g/L。
2. 根據權利要求1所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述培養基中碳源的濃度為40-60g/L，氮源的濃度為28g/L。
3. 根據權利要求2所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述培養基中碳源的濃度為50g/L。
4. 根據權利要求1所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述培養基中的碳源、氮源、無機鹽、胺基酸均為水溶性物質。
5. 根據權利要求1所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述碳源為可溶性澱粉、蔗糖、麥芽糖、乳糖、葡萄糖中的一種或任意兩種的混合物。
6. 根據權利要求1所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述氮源為酵母粉、酵母浸粉、酵母膏、大豆蛋白腖中的一種或任意兩種的混合物。
7. 根據權利要求1所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述無機鹽為硝酸鈉、磷酸氫二鉀和氯化銅。
8. 根據權利要求7所述一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於，所 述硝酸鈉的濃度為〇. 5-2g/L，優選為1. 2g/L，磷酸氫二鉀的濃度為0. 01-0. lg/L，優選為 0. 08g/L，氯化銅的濃度為l-3g/L，優選為1. 5g/L。
9. 根據權利要求1所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述胺基酸為L-賴氨酸。
10. 根據權利要求9所述的一種用於發酵法生產去甲基金黴素的培養基，其特徵在於， 所述L-賴氨酸的濃度為l-15g/L，優選9g/L。
【文檔編號】C12R1/485GK104404120SQ201410735106
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年12月5日 優先權日:2014年12月5日
【發明者】齊巧娟, 趙麗紅 申請人:河北聖雪大成製藥有限責任公司