基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針及其製備方法
2023-04-27 10:55:06 2
專利名稱：基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種螢光探針，尤其是涉及一種以二甲胺基硫代甲醯基為酚羥基保護基團、以部花菁為螢光團的螢光探針及其製備和在中性條件下水溶液中次氯酸螢光法檢測中的應用。
背景技術：
次氯酸(HClO)是生物體髓過氧化物酶(myeloperoxidase，ΜΡ0)介導產生的一種重要的活性氧物種，在多種生理、病理過程中扮演重要角色。設計合成具有高靈敏性、專一性強的Hao螢光探針，建立應用於細胞內Hao的螢光顯微成像方法，實現目標分子實時、 原位的示蹤，為研究生物體內與Hao相關的分子和細胞事件，以及與之相關的疾病的藥物篩選與評價提供可靠信息，具有重要的科學意義及應用前景。該領域已成為人們研究的熱
；ο近幾年來，已報導了數種針對ΗαΟ的螢光探針，如DCFH、DHR (參見文獻: A. Bizyukin, et al，Bull. Exp. Biol. Med. 1995，119，347. )、APF (參見文獻T. Nagano， et al, J. Biol. Chem. 2003，278，3170. )、MitoAR(參見文獻:T. Nagano, et al, J. Am. Chem. Soc. 2007，129，10324.)等，但以上探針除了能夠檢測Η(Π0，對其他的活性氧物種亦有不同程度的螢光響應。由於每種活性氧都有其各自獨特的生理活性，因此對專一性強的HClO 螢光探針的需求顯得尤為迫切。已報導的另外一些Hao探針中，有的需在強鹼性(如ρΗ 12)的苛刻條件下使用(參見文獻H.M.Ma，et al，Chem. Eur. J. 2008，14，4719.)，或水溶性差(參見文獻:W. Tan et al, Chem. Eur. J. 2009，15,2305.)，無法真正應用於生物體系中。 目前，能夠實際應用於中性條件下水溶液中Hao檢測的螢光探針極少，且需在繁瑣苛刻的條件下高成本製備而得(參見文獻T.Nagano，et al, J. Am. Chem. Soc. 2007,129, 7313.； 文獻J.Tae，et al, Org. Lett. 2009,11, (4)，859.；文獻R. Weissleder，P. Libby，et al, Chem. Biol. 2007，14，1221.)。
發明內容
本發明的目的在於針對已報導的各種ΗαΟ螢光探針所存在的不足與缺陷，提供一類高靈敏、高選擇性的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針及其製備方法。所述基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針(以下記為探針丄)的分子結構式如下
權利要求
1.基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針，其特徵在於其分子結構式如下 所述基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針為含有部花菁螢光團結構的、以二甲胺基硫代甲醯基為酚羥基保護基的二甲胺基硫代甲脂基部花菁化合物。
2.如權利要求1所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於其步驟為1)中間體A的合成在容器中按摩爾比加入1.O份的氫化鈉，隊氣氛下加入DMF，冰浴下攪拌後將溶有1. O份對羥基苯甲醛的乾燥DMF溶液滴入其中，維持隊氣氛，攪拌後撤去冰浴，在隊氣氛下將混合物加入另一事先溶解有1. O份二甲胺基硫代甲醯氯的乾燥DMF溶液，反應混合物以二氯甲烷稀釋1. O 2. O倍，所得有機相依次以飽和氯化鈉和水洗滌，旋轉蒸發抽乾二氯甲烷，以柱色譜分離，得白色的中間體A ；2)中間體B的合成在容器中按摩爾比加入1.O份2，3，3-trimethyl-3H-indole,及 3. O份l，4-butane sultone於鄰二氯苯溶劑中，溶解，於氮氣氛下油浴中加熱回流攪拌，反應混合物冷卻後倒入冰凍的丙酮中，有黑紅色固體析出，以冰凍丙酮洗滌，得呈粉紅色粉末的中間體B ；3)目標產物基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成在容器中等摩爾比加入中間體A和中間體B，以乙醇溶解，再加入1. O 3. O份哌啶；混合物在氮氣氣氛下反應，再旋轉蒸發抽乾溶劑，固體殘餘物以柱色譜分離，得橙黃色的目標產物基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針。
3.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟1)中，所述氫化鈉的質量分數為55% 65%。
4.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟1)中，所述在K氣氛下將混合物加入另一事先溶解有1. O份二甲胺基硫代甲醯氯的乾燥DMF溶液，是待溫度自然升至室溫後，在隊氣氛下將混合物加入另一事先溶解有1. O 份二甲胺基硫代甲醯氯的乾燥DMF溶液。
5.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟1)中，所述依次以飽和氯化鈉和水洗滌，是先以飽和氯化鈉洗3次、再以水洗1次。
6.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟1)中，所述柱色譜採用二氯甲烷/石油醚=1 3。
7.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟2)中，所述油浴的溫度為120°C。
8.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟3)中，所述乙醇的加入量為lO.OmL。
9.如權利要求2所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針的合成方法，其特徵在於在步驟幻中，所述柱色譜採用二氯甲烷/乙醇=20 3。
10.如權利要求1所述的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針應用於中性條件下水溶液中Hao的螢光檢測。
全文摘要
基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針及其製備方法，涉及一種螢光探針。提供一類高靈敏、高選擇性的基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針及其製備方法。基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針為含有部花菁螢光團結構的、以二甲胺基硫代甲醯基為酚羥基保護基的二甲胺基硫代甲脂基部花菁化合物。先合成中間體A，再合成中間體B，最後合成目標產物基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針。所述基於部花菁的檢測次氯酸的螢光探針可應用於中性條件下水溶液中HClO的螢光檢測。
文檔編號C09K11/06GK102391855SQ201110284700
公開日2012年3月28日 申請日期2011年9月22日 優先權日2011年9月22日
發明者王淑萍, 詹心琪, 鄭洪 申請人:廈門大學