朝鮮薊天然抗氧化劑及其提取方法
2023-05-25 13:37:16 1
專利名稱：朝鮮薊天然抗氧化劑及其提取方法
技術領域：
本發明涉及天然抗氧化劑提取技術，特別是一種朝鮮薊提取物作為天然抗氧化劑的新用途及其提取方法。
背景技術：
朝鮮薊(Cynara scolymus L.)，別名洋薊，洋百合，法國百合、荷花百合。菊科多年生大型草本，植株高達1.5米，葉大、羽狀深裂，夏季在莖頂著生直徑為15釐米左右的頭狀花，總苞片卵形呈覆瓦狀排列。花苞可食用。富含蛋白質(3.6％)、糖類(16％)、維生素A、B、C及Ca、P、Fe、Na等元素，營養很豐富。
研究表明朝鮮薊葉含有多種活性成份。如咖啡醯奎寧酸類衍生物(包括綠原酸(chlorogenic acid)、菜薊素(cynarin)、1，5二咖啡醯奎寧酸、3，5二咖啡醯奎寧酸等)和黃酮類化合物(包括木犀草素(cynaroside)、菜薊苦素(cynaropicrin)、藤黃菌素(luteolin)等)。中草藥藥用成分研究表明，上述成分具有1)保護和恢復肝臟機能；2)降低膽固醇和血脂濃度，促進脂肪的消化；3)預防疾病、增強免疫力、延緩衰老等保健作用。然而，朝鮮薊葉上述成分除具有以上活性外，還具有其它方面的有價值的活性和用途。
用DPPH·自由基分析法，即通過檢測樣品對自由基DPPH·的清除能力來評價該物質的抗氧化能力的方法去檢測朝鮮薊提取物的抗氧化性。其抗氧化能力用抑制率表示，抑制率越大，抗氧化能力越強。
對朝鮮薊提取物分離成分的抗氧化性能進行測定，並與天然抗氧化劑維生素C(Vc)和化學合成抗氧化劑特丁基對苯二酚(TBHQ)的50％時的濃度(IC50)值進行比較，朝鮮薊提取物各分離成分的抗氧化性能均比兩對照Vc和TBHQ高。
發明內容
本發明的目的是提供一種朝鮮薊提取物作為天然抗氧化劑的新用途及其提取方法。
為達到上述目的，本發明的技術解決方案是提供一種朝鮮薊天然抗氧化劑的提取方法，其包括下列步驟步驟1.稱取100g乾粉原料置於1000ml75％乙醇溶液的索氏提取器中，於沸水浴中提取，至索氏提取器內的溶液近乎無色為止；步驟2.往提取後的約1000ml溶液中加入400ml的氯仿液進行萃取，分層後，棄去下層的氯仿相，保留水相；步驟3.往上次萃取後的水相中加入400ml的乙酸乙酯液進行萃取，分層後，棄去上層的乙酸乙酯相，保留水相；步驟4.往第二次萃取後的水相中加入400ml的正丁醇液進行萃取，分層後，棄去下層的水相，保留正丁醇相；步驟5.將萃取後的正丁醇溶液置於Sephadex LH-20的凝膠柱上，用70％的甲醇洗脫，自動部份收集器收集，得60個分離試管，分為3個不同的組分，分別進行矽膠板分離鑑定和抗氧化活性測定；步驟6.將三種組分的分離液各自合併，濃縮5～10倍，用0.45μm膜過濾後，進入HPLC9.4×250mm Zorbax ODS製備柱分離；步驟7.得到成品朝鮮薊天然抗氧化劑。
所述的提取方法，其步驟1中，於沸水浴中提取的時間為9.5～10.5小時之間。
所述的提取方法，其步驟5中，所述分為3個不同的組分，是24～35管為第一組分，15～21管為第二組分，37～59管為第三組分。
所述的提取方法，其步驟7得到的天然抗氧化劑成品分別是，第一組分得到1-咖啡醯奎寧酸(1-CA)、3-咖啡醯奎寧酸(3-CA)；第二組分得到藤黃菌素-7-芸香糖苷(LTR)；第三組分得到1，3-二咖啡醯奎寧酸(1，3-DCA)、3，5-二咖啡醯奎寧酸(3，5-DCA)、1，5-二咖啡醯奎寧酸(1，5-DCA)、3，4-二咖啡醯奎寧酸(3，4-DCA)。
所述的提取方法，其步驟7得到天然抗氧化劑成品後，需對朝鮮薊提取物的抗氧化性進行測定。
所述的提取方法，其所述抗氧化性測定，方法是精確吸取2mL2×10-4mol/L的DPPH·溶液與2mL朝鮮薊分離樣品溶液混合均勻後，以溶劑為對照，用分光光度計測定該混合液在波長517nm處的吸光值(ABS)；將所得數據代入下列公式計算其抑制率抑制率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％其中Ai為待測樣品液與等體積的DPPH·溶液混合後在波長517nm處的ABS值；Aj為待測樣品液與等體積的溶劑混合後在波長517nm處的ABS值；Ac為DPPH·溶液與等體積的溶劑混合後在波長517nm處的ABS值。
一種朝鮮薊天然抗氧化劑，包括1-咖啡醯奎寧酸、3-咖啡醯奎寧酸(綠原酸)、1，3-二咖啡醯奎寧酸、藤黃菌素-7-芸香糖苷、3，5-二咖啡醯奎寧酸、1，5-二咖啡醯奎寧酸、3，4-二咖啡醯奎寧酸。
本發明朝鮮薊乾粉提液工藝流程，主要得到抗氧化提取物7種，此7種具有抗氧化活性的天然提取物與其它天然和合成抗氧化劑(Vc和TBHQ)比較具有明顯優勢，分別是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。
圖1本發明朝鮮薊提取物活性成分分離製備圖。
具體實施例方式
實施例1分離提取方法，如附圖1所示步驟1.索氏提取稱取100g乾粉原料置於1000ml75％乙醇溶液的索氏提取器中，於沸水浴中提取10小時左右，至索氏提取器內的溶液近乎無色為止。
步驟2.第一次萃取分離往提取後的約1000ml溶液中加入400ml的氯仿液進行萃取，分層後，棄去下層的氯仿相，保留水相。
步驟3.第二次萃取分離往上次萃取後的水相中加入400ml的乙酸乙酯液進行萃取，分層後，棄去上層的乙酸乙酯相，保留水相。
步驟4.第二次萃取分離往第二次萃取後的水相中加入400ml的正丁醇液進行萃取，分層後，棄去下層的水相，保留正丁醇相。
步驟5.Sephadex LH-20柱層析分離將萃取後的正丁醇溶液置於Sephadex LH-20的凝膠柱上，用70％的甲醇洗脫，自動部份收集器收集，得60個分離試管，分別進行矽膠板分離鑑定和抗氧化活性測定，分為3個不同的組分24～35管為第一組分，15～21管為第二組分，37～59為第三組分。
步驟6.製備柱分離將三種組分的分離液各自合併，濃縮5～10倍，0.45μm膜過濾後，進入HPLC9.4×250mm Zorbax ODS製備柱分離，得到天然抗氧化劑成品。其中24～35管的第一組分得到1-咖啡醯奎寧酸(1-CA)、3-咖啡醯奎寧酸(3-CA)；15～21管的第二組分得到藤黃菌素-7-芸香糖苷(LTR)；37～59管的第三組分得到1，3-二咖啡醯奎寧酸(1，3-DCA)、3，5-二咖啡醯奎寧酸(3，5-DCA)、1，5-二咖啡醯奎寧酸(1，5-DCA)、3，4-二咖啡醯奎寧酸(3，4-DCA)。
步驟7.朝鮮薊提取物的抗氧化性的測定精確吸取2mL2×10-4mol/L的DPPH·溶液與2mL樣品溶液混合均勻後，以溶劑為對照，用分光光度計測定該混合液在波長517nm處的吸光值(ABS)。將所得數據代入下列公式計算其抑制率，從而評價其抗氧化能力。
抑制率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％其中Ai為待測樣品液與等體積的DPPH·溶液混合後在波長517nm處的ABS值；Aj為待測樣品液與等體積的溶劑混合後在波長517nm處的ABS值；Ac為DPPH·溶液與等體積的溶劑混合後在波長517nm處的ABS值。
對朝鮮薊提取物分離成分的抗氧化性能，經測定各分離成分對DPPH·自由基的抑制率為50％時的濃度(IC50)，並與天然抗氧化劑維生素C(Vc)和化學合成抗氧化劑特丁基對苯二酚(TBHQ)的IC50值進行比較。如表1。
表1樣品IC50(mg/ml)1-CA0.083-CA0.03LTR 0.031，3-DCA0.083，5-DCA0.0151，5-DCA0.0253，4-DCA0.05對照Vc 0.1TBHQ0.15從表1可以看出朝鮮薊提取物各分離成分的抗氧化性能均比兩對照Vc和TBHQ高，分別是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。
權利要求
1.一種朝鮮薊天然抗氧化劑的提取方法，其特徵在於，包括下列步驟步驟1.稱取100g乾粉原料置於1000ml 75％乙醇溶液的索氏提取器中，於沸水浴中提取，至索氏提取器內的溶液近乎無色為止；步驟2.往提取後的約1000ml溶液中加入400ml的氯仿液進行萃取，分層後，棄去下層的氯仿相，保留水相；步驟3.往上次萃取後的水相中加入400ml的乙酸乙酯液進行萃取，分層後，棄去上層的乙酸乙酯相，保留水相；步驟4.往第二次萃取後的水相中加入400ml的正丁醇液進行萃取，分層後，棄去下層的水相，保留正丁醇相；步驟5.將萃取後的正丁醇溶液置於Sephadex LH-20的凝膠柱上，用70％的甲醇洗脫，自動部份收集器收集，得60個分離試管，分為3個不同的組分，分別進行矽膠板分離鑑定和抗氧化活性測定；步驟6.將三種組分的分離液各自合併，濃縮5～10倍，用0.45μm膜過濾後，進入HPLC 9.4×250mm Zorbax ODS製備柱分離；步驟7.得到成品朝鮮薊天然抗氧化劑。
2.如權利要求1所述的提取方法，其特徵在於，步驟1中，於沸水浴中提取的時間為9.5～10.5小時之間。
3.如權利要求1所述的提取方法，其特徵在於，步驟5中，所述分為3個不同的組分，是24～35管為第一組分，15～21管為第二組分，37～59管為第三組分。
4.如權利要求1所述的提取方法，其特徵在於，步驟7得到的天然抗氧化劑成品分別是，第一組分得到1-咖啡醯奎寧酸(1-CA)、3-咖啡醯奎寧酸(3-CA)；第二組分得到藤黃菌素-7-芸香糖苷(LTR)；第三組分得到1，3-二咖啡醯奎寧酸(1，3-DCA)、3，5-二咖啡醯奎寧酸(3，5-DCA)、1，5-二咖啡醯奎寧酸(1，5-DCA)、3，4-二咖啡醯奎寧酸(3，4-DCA)。
5.如權利要求1所述的提取方法，其特徵在於，步驟7得到天然抗氧化劑成品後，需對朝鮮薊提取物的抗氧化性進行測定。
6.如權利要求5所述的提取方法，其特徵在於，所述抗氧化性測定，方法是精確吸取2mL 2×10-4mol/L的DPPH·溶液與2mL朝鮮薊分離樣品溶液混合均勻後，以溶劑為對照，用分光光度計測定該混合液在波長517nm處的吸光值(ABS)；將所得數據代入下列公式計算其抑制率抑制率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％其中Ai為待測樣品液與等體積的DPPH溶液混合後在波長517nm處的ABS值；Aj為待測樣品液與等體積的溶劑混合後在波長517nm處的ABS值；Ac為DPPH·溶液與等體積的溶劑混合後在波長517nm處的ABS值。
7.一種朝鮮薊天然抗氧化劑，其特徵在於，包括1-咖啡醯奎寧酸、3-咖啡醯奎寧酸(綠原酸)、1，3-二咖啡醯奎寧酸、藤黃菌素-7-芸香糖苷、3，5-二咖啡醯奎寧酸、1，5-二咖啡醯奎寧酸、3，4-二咖啡醯奎寧酸。
全文摘要
本發明涉及天然抗氧化劑提取技術，特別是一種朝鮮薊提取物作為天然抗氧化劑的新用途及其提取方法。本發明將朝鮮薊乾粉通過索氏提取得到的原提取液，分別進行氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到的正丁醇相進行Sephadex LH－20柱層析分離，得到三個不同組分，再分別進行高壓液相製備柱分離，得到7種不同的天然抗氧化劑。此7種天然抗氧化劑與其它天然和合成抗氧化劑(Vc和TBHQ)比較具有明顯優勢，分別是Vc的1.2～7倍、TBHQ的2～10倍。
文檔編號C09K15/34GK1570020SQ03150268
公開日2005年1月26日 申請日期2003年7月23日 優先權日2003年7月23日
發明者張洪勳, 朱顯峰, 羅國添 申請人:昆明英之源農業科技開發有限公司