一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法
2023-05-25 03:29:36 1
專利名稱：一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法
技術領域：
本發明屬於生物檢測技術領域，具體涉及一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法。
背景技術：
蛋白晶片作為一種高通量檢測系統，需將蛋白質固定在固相基質的表面形成微陣列，最後通過特定的檢測方式來分析蛋白之間的相互作用或測定目標分子的含量。蛋白晶片的檢測方式有放射分析、螢光分析和化學發光分析等，與前兩者相比，化學發光法隨著其底物的不斷改進，具有如下優勢信號強，靈敏度高，可以檢測飛克級的目標分析物；穩定性好，發光持續時間達幾個小時，有利於檢測的準確性和重複性。無論採用何種檢測方式， 點形的均一性對蛋白晶片檢測的準確性來說是至關重要的。點形的不均一主要是指點的中空和拖尾，前者與基質表面的化學性質和點樣緩衝液成分相關，後者除了這兩個因素，還與特定的檢測方式有關。化學發光分析中，如果發光方式不當會導致晶片點出現拖尾，不僅削弱本身的信號強度，也會對周圍點的信號產生幹擾。不同檢測方式下，固相蛋白晶片中出現點拖尾的現象雖有報導；基質表面的化學性質或者點樣緩衝液中的成分對點形的影響報導也有不少，但是迄今為止未找到通過改變化學發光方式來抑制點拖尾的方法固相蛋白晶片的拖尾現象。如用化學發光分析鈣調蛋白時，出現信號漂白的同時，也出現了點拖尾的現象(參考文獻:Schweitzer Barry ；Predki Paul ；SnyderMichael. Preteomics 2003，3，2190—2199)基質表面的化學性質對蛋白晶片點形的影響。如用聚-L-賴氨酸修飾的玻片獲得的點形比用凝膠修飾的玻片獲得的點形更加均一(參考文獻jeurynck-krvoss Shannon L. ；White Amanda Μ. ；Baird Cheryl L, et al. AnalBiochem. 2007，371 (1) :105-115.)點樣緩衝液成分對蛋白晶片點形的影響。如與含有甘油的點樣緩衝液相比，含有聚乙烯醇的點樣緩衝液產生的點形更規則，更均一。(參考文獻mi Peng ；Grainger David W. J Proteome Res. 2006,5(11) :2956-2965.)這些文獻報導中雖然提到了蛋白晶片點的拖尾現象以及部分影響因素，但沒有提及化學發光分析中抑制點拖尾的方法。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在於提供一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法。作為本發明的一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法，是以蛋白晶片酶免化學發光產生的點形為研究對象，在加入一層含表面活性劑的緩衝液的基礎上再加入化學發光底物進行酶促反應，然後捕獲圖像。
該方法具體包括如下步驟(1)配置含表面活性劑的Tris緩衝液，所述表面活性劑為Tween-20或 TritonX-IOO ；濃度為 0. 1% -0. 5% (M/V)；(2)將一定體積的步驟(1)所配置含表面活性劑的Tris緩衝液加到晶片基質表面形成溶液層；(3)在步驟⑵所形成的溶液層的基礎上，再添加化學發光底物混合溶液；其中含表面活性劑的緩衝液與底物混合溶液的體積比為1 :3-1:9;(4)靜止進行酶促反應Imin後，用蛋白晶片檢測儀來捕獲圖像。所述1Tris緩衝液由0. lmol/L Tris,0. 85% (M/V)NaCl組成，以去離子水配製，用鹽酸調節PH = 7. 4 士 0.2。本發明具有如下有益效果和實質性特點所制蛋白晶片點的均一性強，檢測的準確性高，方法成本低廉，操作簡便。
圖1為本發明加入化學發光底物混合溶液之前先加入含表面活性劑的緩衝液時的蛋白晶片照片。圖2為加入化學發光底物混合溶液之前未加入含表面活性劑的緩衝液時的蛋白晶片照片。
具體實施例方式以下對本發明的實施例作詳細說明本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和過程，但本發明的保護範圍不限於下述的實施例。實施例應用本發明所述技術手段與原有技術的對比實驗首先配置含Tween-20 的 Tris 緩衝液0. lmol/L Tris,0. 85% (M/V)NaCl，0· 2% Tween-20 (M/V)，以去離子水配製，用鹽酸調節pH = 7.4 ；待晶片經免疫反應、洗滌、晾乾後， 分別滴加5微升上述緩衝液於以玻片為基質的單個晶片表面(< Icm2)，輕輕晃動使之鋪開形成溶液層；然後再分別滴加20微升按1 1(H202:魯米諾及增強子)混合的底物溶液，送至檢測儀內，辣根過氧化氫酶酶促反應Imin後獲取晶片圖片(如圖1所示)；或者在沒有緩衝液層的情況下，直接加底物混合溶液，送至檢測儀內，酶促反應Imin後獲取晶片圖片(如圖2所示)。經過對比觀察可以很明顯看出，在完成免疫反應，並經過洗滌、晾乾後的蛋白晶片固相表面直接加入化學發光底物混合溶液後，液體在固相表面擴散的過程中由於界面張力需要一段時間，因此一部分光子會隨著液體的擴散而擴散，形成「彗星」似的拖尾現象(如圖2所示)；在加入化學發光底物混合溶液之前先加入含表面活性劑的緩衝液，形成一個溶液層，然後再加入化學發光底物混合物，由於液體在溶液中的擴散速率與酶促反應產生光子的速率相當，因此產生的點形較為規整，即是點本身的形狀(如圖1所示)，證明此方法能有效抑制點的拖尾。以上顯示和描述了本發明的基本原理和主要特徵和本發明的優點。本行業的技術人員應該了解，本發明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發明的原理，在不脫離本發明精神和範圍的前提下，本發明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發明範圍內。本發明要求保護範圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
權利要求
1.一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法，其特徵在於，具體包括如下步驟(1)配置含表面活性劑的Tris緩衝液，所述表面活性劑為Tween-20或TritonX-IOO； 濃度為 0. -0. 5% (M/V)；(2)將一定體積的步驟(1)所配置含表面活性劑的Tris緩衝液加到晶片基質表面形成溶液層；(3)在步驟( 所形成的溶液層的基礎上，再添加化學發光底物混合溶液；其中含表面活性劑的緩衝液與底物混合溶液的體積比為1 :3-1:9;(4)靜止進行酶促反應Imin後，用蛋白晶片檢測儀來捕獲圖像。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述Tris緩衝液由0.lmol/L Tris, 0. 85% (M/V)NaCl組成，以去離子水配製，用鹽酸調節pH = 7. 4士0. 2。
全文摘要
本發明公開的一種通過改變化學發光方式抑制固相蛋白晶片點拖尾的方法，它以固相蛋白晶片中酶免化學發光產生的點形為研究對象，在加入一層含表面活性劑的緩衝液的基礎上再加入化學發光底物進行酶促反應，然後捕獲圖像。所制蛋白晶片點的均一性強，檢測的準確性高，方法成本低廉，操作簡便。
文檔編號G01N21/76GK102175668SQ20111003034
公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月28日 優先權日2011年1月28日
發明者姚湧, 徐宏科, 楊小麗, 柳飛舟, 石怡, 範文燕 申請人:上海銘源數康生物晶片有限公司