一種大豆dna的提取方法
2023-05-25 03:20:31
一種大豆dna的提取方法
【專利摘要】本發明屬於生物【技術領域】，涉及一種大豆DNA的提取方法。一種大豆DNA的提取方法，主要步驟包括：首先將大豆粉碎成粉末狀，與CTAB裂解緩衝液充分混合裂解，然後加入酚：氯仿：異戊醇抽提蛋白，離心後上清液加入氯仿：異戊醇進行抽提，離心後上清液加入等體積的異丙醇進行沉澱30min，離心棄上清，保留沉澱，再用無水乙醇溶液洗滌沉澱，離心後的沉澱乾燥後用TE溶解，加入RNAse酶37℃孵育30min，所得溶液即為大豆DNA溶液，-20℃貯存備用。本發明的大豆DNA的提取方法的有益效果是：可以從大豆乾種子中提取到高質量的適宜於PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利於快速檢測。
【專利說明】一種大豆DNA的提取方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物【技術領域】，涉及一種大豆DNA的提取方法。
【背景技術】
[0002]大豆是我國乃至全世界重要的經濟與糧食作物，是食用油和植物蛋白最豐富、最廉價的來源。為了提高大豆的產量，滿足人們對大豆的需求量，科研人員採用基因工程與分子輔助育種方法，培育了一些高產、優質和抗逆以及適合農場機械化種植的轉基因大豆品種。2010年國際農業生物技術應用服務組織(ISAAA)的數據顯示:2010年轉基因大豆仍然是最主要的轉基因作物，種植面積約7330萬公頃，佔全球轉基因作物種植面積的50%左右。中國從上世紀末開始進口耐除草劑轉基因大豆，各種與轉基因大豆相關的產品越來越多地進入市場。為保障廣大消費者的知情權和選擇權，滿足國際貿易的需要，建立準確、快速、高效的轉基因成分檢測技術至關重要。核酸檢測技術，尤其是常規聚合酶鏈式反應(PCR)和實時螢光PCR法，核酸檢測的關鍵因素是提取到高質量的DNA。在做PCR試驗時，首先面臨的一個問題即是模板DNA的提取。對於大豆來說，一般實驗室都是利用幼苗葉片為材料，經液氮研磨提取DNA。此過程必須要經過浸種催芽、幼苗培養、液氮研磨等過程，一般要用兩周左右的時間才能進行DNA的提取並進一步開展實驗。常規提取方法耗費時間長，步驟繁瑣，並且提取的DNA純度不高，質量差等。
【發明內容】
[0003]本發明的目的是建立簡單、高效、穩定的一種提取大豆DNA的方法。
[0004]為實現上述目的，本發明所採用的技術方案是:一種大豆DNA的提取方法，包括以下步驟:(I)首先將大豆粉碎成粉末狀，分別稱取0.1g製備好的樣品，加入到兩支2ml離心管中；(2)加入2%CTAB裂解緩衝液，震蕩混勻，65°C孵育30min。(3)加入酚:氯仿:異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心20min。(4)吸取上清液,放入1.5ml離心管中，加入氯仿:異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心15min。(5)吸取上清液，放入另一 1.5ml離心管中，力口入等體積的異丙醇，沉澱30min, 12000r/min離心lOmin。(6)棄去上清,加入無水乙醇溶液洗漆，12000r/min,離心lmin。(7)棄去上清,沉澱室溫乾燥,加入50ul TE溶液溶解沉澱。
(8)加入5ulRNAse酶溶液，37°C孵育30min，-20°C貯存備用。
[0005]步驟(I)中所述的樣品為大豆乾種子經粉碎後，直徑小於0.1mm的顆粒。
[0006]步驟(2)中2%CTAB 裂解緩衝液的配方為:CTAB 4g,50mmoITris-HCL ΡΗ8.0、0.7molNaCl、1mmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巰基乙醇。
[0007]本發明的大豆DNA的提取方法的有益效果是:可以從大豆乾種子中提取到高質量的適宜於PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時短、利於快速檢測。用本發明的方法得到的DNA 濃度為 118.15ngM, OD260/ OD280 的值為 1.85。
【具體實施方式】
[0008]本發明的一種提取大豆乾種子DNA方法，包括以下步驟:
(O首先將大豆粉碎成粉末狀，達到直徑小於0.1mm的顆粒；分別稱取0.1g製備好的樣品，加入到兩支2ml尚心管中；
(2)加入600ul2%CTAB裂解緩衝液，震蕩混勻，65°C孵育30min ；2%CTAB裂解緩衝液:CTAB 4g、50mmolTris-HCL PH8.0,0.7moINaCIUOmmolEDTA PH8.0、20mmol 2-巰基乙醇；
(3)加入500ul酹:氯仿:異戍醇，震蕩均勻，12000r/min離心20min,酹、氯仿、異戍醇的體積比為25:24:1 ；
(4)吸取上清液，放入1.5ml離心管中，加入250ul氯仿:異戊醇，震蕩均勻，12000r/min離心15min ;氯仿、異戍醇的體積比為24:1 ;
(5)吸取上清液，放入另一1.5ml離心管中，加入等體積的異丙醇，沉澱30min，12000r/min 離心 1min ；
(6)棄去上清,加入無水乙醇溶液洗漆，12000r/min,離心Imin；
(7)棄去上清，乾燥，加入50ulTE溶液溶解沉澱；
(8)加入5ulRNAse酶溶液，37°C孵育30min;-20°C貯存備用。
【權利要求】
1.一種大豆0嫩的提取方法，包括以下步驟:(1)首先將大豆粉碎成粉末狀，分別稱取0.18製備好的樣品，加入到兩支21111離心管中；(2)加入2%^1八8裂解緩衝液，震蕩混勻，65。〇孵育 30111111 ； (3)加入酹:氯仿:異戍醇，震蕩均勻，120001-/111111離心20111111； (4)吸取上清液，放入1.51111離心管中，加入氯仿:異戊醇，震蕩均勻，1200017111111離心15111111 ； (5)吸取上清液，放入另一1.51111離心管中，加入等體積的異丙醇，沉澱30111111，120001-/111111 離心 10111111 ； (6)棄去上清，加入無水乙醇溶液洗漆，120001-/111111,離心1111111； (7)棄去上清，沉澱室溫乾燥，加入5011112溶液溶解沉澱； (8)加入51111？嫩86酶溶液，371孵育30111111，-201貯存備用。
2.根據權利要求1所述的大豆0嫩的提取方法，其特徵在於:步驟(1)中所述的樣品為大豆乾種子經粉碎後，直徑小於0.1皿的顆粒。
3.根據權利要求1所述的大豆0嫩的提取方法，其特徵在於:步驟(2)中2%^1仙裂解緩衝液的配方為刃了仙 4^,501111110111-18-1101 ^118.0,0.711101^01,101111110121)1^ ？肋』、20臟012-巰基乙醇。
【文檔編號】C12N15/10GK104450677SQ201410609628
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月4日 優先權日:2014年11月4日
【發明者】劉曼, 逄淑梅, 牟特 申請人:青島康大分析檢測有限公司