一種檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的方法
2023-05-25 20:59:41 2
專利名稱：一種檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的方法。
背景技術：
中藥注射劑臨床不良反應已經成為中藥現代化發展的巨大障礙，其中，休克是最嚴重，常常導致死亡的不良反應。從臨床發生的休克案例來看，休克的發生可存在於首次用藥、數日用藥後和大量用藥的過程中；即有迅速休克者，也有逐步衰竭後呈現休剋死亡者。 可見，單純以過敏性休克概括中藥注射劑不良反應而進行質量控制和工藝水平的研究，具有較大的片面性。1.從質量控制出發的安全性生產措施並未能夠有效避免中藥注射劑休克不良反應的發生一直以來，認為中藥注射劑發生休克不良反應的原因是中藥注射劑達不到質量要求，也即中藥靜脈注射給藥發生的休克等不良反應是由於生產工藝的提取、配置過程中，混雜物質未能夠獲得有效控制而存在於注射液中所致。因此，各生產企業加大了製劑工藝過程的質量控制，特別是2001年後，幾個主要的中藥注射液生產企業實現了指紋圖譜質量控制和生產全過程的標準化，但是，臨床應用中仍有休克不良反應的發生。可見，注射液本身藥效成分導致休克的因素當為重點研究的對象。2.中藥注射劑發生休克的反應具有多樣性，血管性因素導致血流動力障礙多於過敏反應對於中藥注射劑引發休克，既往主要著眼於導致過敏反應的有害因素。應該說這與青黴素等許多化學及生物藥的臨床過敏反應先入為主的思維影響有關。誠然，中藥注射劑臨床發生的休克有屬過敏性休克者，在相關機制研究中發現鞣質、蛋白質等可刺激機體產生相應的抗體而造成過敏反應等。但是，從已經發生的休克反應及搶救結果來看，多數案例並沒有像青黴素過敏休克的搶救那樣成功。主要是因為其發生常常隱匿，呈漸進加重過程，出現休克徵象時循環已近衰竭，並呈現大循環障礙與微循環異常不協調甚至矛盾的血流動力障礙，而且，可發生於首次用藥、數日用藥後和大量用藥的過程中，無規律可循。綜合分析顯示，這是一種以微血管損害為起源的血流動力障礙，進而發生休克的病理生理過程。3.發揮治療效應的藥物組分具有在一定條件下引發血流動力障礙而致休克的傾向我們在以往的研究中發現，金銀花中以綠原酸為核心的有機酸部分屬於清開靈注射液的藥效組分，在阻抑炎症反應上具有突出的效應，但其對血管內皮細胞的影響進而導致血流動力障礙又可引發休克病理生理過程。另外，其他在臨床發生休克不良反應的中藥注射液如雙黃連粉針、魚腥草注射液、正清風痛寧注射液、穿琥寧注射液等等均含有較大量的有機酸類物質。因此，研究該類物質引發休克的病理機制，從而探索一種檢測含綠原酸類中藥注射劑臨床用藥安全性的方法，避免該類注射液「毒性物質」引發休克等不良反應，具有重要的現實意義和經濟價值。
發明內容
本發明目的在於提供一種檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的方法。本發明目的是通過如下技術方案實現的分離血清，使用丙二醛(MDA)試劑盒進行MDA含量測定，計算MDA含量，血清中MDA含量彡4. 37nmol/mL·所述丙二醛(MDA)試劑盒可以從市場上購買。本發明優選如下技術方案(a)分離血清；(b)使用50T丙二醛(MDA)試劑盒(生產廠家南京建成生物工程研究所或南京建成科技有限公司)配製試劑試劑一液體IOmlX 1瓶，4°C保存；試劑二 液體6mlX 1瓶，每瓶加170ml雙蒸水混勻，4°C冷藏；試劑三粉劑X 1支，將粉劑加入到90-100°C的雙蒸水30ml中，(在溶解過程中可適當加熱)，充分溶解後用雙蒸水補足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的試劑避光室溫
保存；標準品10n mol/ml四乙氧基丙烷5ml X 1瓶，4°C冷藏。(c)測定吸光度值 取血清樣品、無水乙醇、標準品、試劑一、試劑二、試劑三、50 %冰醋酸，按如下配比分別配到4個試管中；取標準品、試劑一、3ml試劑二、Iml試劑三，配製成標準管；取無水乙醇、試劑一、 3ml試劑二，Iml試劑三，配製成標準空白管；取血清樣品、試劑一、3ml試劑二，Iml試劑三， 配製成測定管；取血清樣品、試劑一、3ml試劑二，lml50%冰醋酸，配製成測定空白管；4個試管中血清樣品、試劑一、無水乙醇和標準品的用量均相同，為0. 1-0. 2ml ；將試管中試劑混勻，試管口用保鮮薄膜紮緊，用針頭刺一小孔，95°C水浴(或用鍋開蓋煮沸)40分鐘，取出後流水冷卻，532nm處，Icm光徑，蒸餾水調零，測定各管吸光度值。(d)計算血清中MDA含量按以下計算公式計算出血清中MDA含量
權利要求
1.一種檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的方法，其特徵在於該方法包括以下步驟分離血清，使用MDA試劑盒進行MDA含量測定，並計算MDA含量，血清中MDA含量 ^ 4. 37nmol/ml。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於該方法包括以下步驟(a)分離血清；(b)使用南京建成生物工程研究所或南京建成科技有限公司生產的50T丙二MDA試劑盒，配製試劑；試劑一液體IOml X 1瓶，4°C保存；試劑二 液體6ml X 1瓶，每瓶加170ml雙蒸水混勻，4°C冷藏；試劑三粉劑Xl支，將粉劑加入到90-100°C的雙蒸水30ml中，充分溶解後用雙蒸水補足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的試劑避光室溫保存； 標準品10n mol/ml四乙氧基丙烷5mlXl瓶，4°C冷藏；(c)測定吸光度值取血清樣品、無水乙醇、標準品、試劑一、試劑二、試劑三、50%冰醋酸，按如下配比分別配到4個試管中；取標準品、試劑一、3ml試劑二、Iml試劑三，配製成標準管；取無水乙醇、試劑一、3ml試劑二，Iml試劑三，配製成標準空白管；取血清樣品、試劑一、3ml試劑二，Iml試劑三，配製成測定管；取血清樣品、試劑一、3ml試劑二，lml50%冰醋酸，配製成測定空白管；4個試管中血清樣品、試劑一、無水乙醇和標準品的用量均相同，為0. 1-0. 2ml ；將試管中試劑混勻，試管口用保鮮薄膜紮緊，用針頭刺一小孔，95°C水浴40分鐘，取出後流水冷卻，532nm處，Icm光徑，蒸餾水調零，測定各管吸光度值；(d)按以下計算公式計算出血清中MDA含量
3.MDA試劑盒在製備檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的製劑中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性的方法。該方法為分離血清，使用丙二醛(MDA)試劑盒進行MDA含量測定，並計算MDA含量，血清中MDA含量≥4.37nmol/ml。本發明經過實驗研究發現中藥注射液中綠原酸在大量使用時會增加血清中過氧化損傷產物MDA(丙二醛)的含量，應當預先引起警惕。可將血清中MDA含量作為檢測含綠原酸類中藥注射劑安全性生物試劑盒的目標因子。
文檔編號G01N21/31GK102200505SQ20111007107
公開日2011年9月28日 申請日期2011年3月23日 優先權日2011年3月23日
發明者常鋮, 李衛紅, 李澎濤, 王甫, 胡京紅, 都文淵 申請人:北京中醫藥大學