具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物及其製備方法和應用與流程
2023-05-25 17:23:21 4
本發明涉及一種植物提取物，具體是涉及一種具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物及其製備方法和應用。
背景技術：
惡性腫瘤是嚴重危害人類健康和生命的多發病和常見病，早在2000～3000年前埃及和我國已有關於腫瘤的記載。其中，在我國發病率最高的肝癌，因其隱匿性高，臨床治療效果差，已成為第二大致死癌種。在不同的治療手段中，化療，尤其是介入療法(局部化療)是治療中晚期肝癌的重要手段，但是化療藥的心毒性和腎毒性嚴重危害了患者的健康，因此，天然產物在抗肝癌中的作用越來越被人類重視。
番荔枝為番荔枝科的重要植物，其果實為熱帶著名水果，又名釋迦、佛頭果。其種子作為廣東省地方中藥，廣泛用於腫瘤的治療。有文獻報導，番荔枝種子提取物番荔枝內脂具有很好的抗腫瘤活性。但是，目前還沒有番荔枝果實的果皮抗腫瘤活性成分的報導。
番荔枝果實果皮為番荔枝果肉食用後丟棄的廢棄物，為了使廢棄物變廢為寶，本發明對番荔枝果實果皮揮髮油進行了系統研究，並篩選出其抗腫瘤活性。
技術實現要素：
發明目的：本發明的目的是在番荔枝現有活性成分的基礎之上，充分利用廢棄的番荔枝果實果皮，並篩選其功效，擴大藥源，提供一種抗腫瘤活性強的番荔枝果皮揮髮油提取物。
技術方案：為了實現以上目的，本發明採取的技術方案為：
一種具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物，它包括下列重量百分比的原料
斯巴醇32.51％，棕櫚酸9.41％，乙酸-1,7,7-三甲基-二環[2.2.1]庚-2-酯3.7％，(6,8-順-羥甲基-4-異丙基-7-亞甲基-二環[3.2.1]八-1-基)-甲醇3.2％，(1S-內)-1,7,7-三甲基-二環[2.2.1]庚-2-醇3.17％，(1α,4aβ,5α,8aα)-十氫-5-(羥甲基)-5,8a-二甲基-2-順(亞甲基)-1-萘戊醇2.9％，8-異丙基-4a,5,5,8-四甲基-2-亞甲基-1a-丙基-1,1a,2,3,4,4a,5,8-十氫環丙基甲醯乙酸乙酯[d]萘2.67％，2,4-二氯-5-三氟甲苯2.31％，2-亞甲基-6,8,8-三甲基-三環[5.2.2.0(1,6)]十一烷基-3-醇2.22％，9-十八炔1.86％，長松香芹醇1.73％，羥甲唑啉1.71％，氧化馬兜鈴烯1.68％，(1S-順)-1,2,3,5,6,8a-六氫-4,7-二甲基-1-(1-異丙基)-萘1.55％，2-異丙基-5-甲基-9-亞甲基-雙環[4.4.0]十-1-烯1.45％，1,3,4,6,7,8a-六氫-1,1,5,5-四甲基-2H-2,4a-甲氧基萘乙醯胺-8(5H)-酮1.28％，5-烯-3β-甾醇1.21％，(3β,5α,11β)-3,11-二甾醇1.18％，6,6-二甲基-二環[3.1.1]-2-酮-2-聯苯1.11％，[1S-(1α,7α,8aα)]-1,2,3,5,6,7,8,8a-八氫-1,8a-二甲基-7-(1-異丙烯基)-萘1.07％，3,7,11,15-四甲基-2-十六烯酸-1-醇1.04％，2,6,6,10,11-五甲基-14-氧雜三環[9..2.1.0(1,10)]十四烷1.03％，[1S-(1α,3α.,5α)]-6,6-二甲基-2-亞甲基-雙環[3.1.1]庚-3-醇1.02％，7-十四炔1.02％。
本發明所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物的製備方法，它包括以下步驟：
(1)取番荔枝果皮，加入果皮重量5～10倍體積量的水，採用揮髮油提取器，水蒸氣蒸餾法提取3-8小時，分去水層，得番荔枝果皮揮髮油粗提物；
(2)用乙醚清洗揮髮油提取器1-2次，合併乙醚層和揮髮油層，常溫揮去乙醚即得番荔枝果皮揮髮油提取物。
作為優選方案，以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物在製備抗癌藥物中的應用。
作為優選方案，以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物在製備抗癌藥物中的應用，把番荔枝果皮揮髮油提取物和藥學上可接受的載體製成片劑、膠囊劑、脂肪乳劑、栓劑、微囊、滴丸或軟膏劑的藥物。
作為優選方案，以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物在製備抗肝癌、肺癌、乳腺癌、直腸癌藥物中的應用。
作為優選方案，以上所述的具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物在製備抗肝癌、肺癌、乳腺癌、直腸癌藥物中的應用，把番荔枝果皮揮髮油提取物和藥學上可接受的載體製成片劑、膠囊劑、脂肪乳劑、栓劑、微囊、滴丸、軟膏劑劑型的藥物。
有益效果：本發明提供的具有抗腫瘤活性的番荔枝果皮揮髮油提取物與現有技術相比的優點有：
現有技術中番荔枝果皮作為廢物扔棄，不僅浪費資源，汙染環境，本發明通過大量實驗篩選，變廢為寶，以現有資源開出番荔枝果皮揮髮油抗腫瘤成分，經過體外MTT實驗表明，本發明製備得到的番荔枝果皮揮髮油對肝癌等腫瘤細胞具有很好的殺滅活性，並且流式細胞實驗表明，番荔枝果皮揮髮油能阻滯細胞分裂於G1期並誘導細胞凋亡。本發明可以充分利用番荔枝丟棄果皮，可形成產業化，具有重要的社會效益和經濟效應。
附圖說明
圖1為番荔枝果皮揮髮油提取物GC-MS總離子流圖；
圖2為不同濃度的番荔枝果皮揮髮油提取物對SMMC-7721細胞抑制作用的柱狀圖。
具體實施方式
根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結果僅用於說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。
實施例1
1、番荔枝果皮揮髮油的製備
取乾燥番荔枝果皮20g，粉碎後至500mL磨口燒瓶，加200mL蒸餾水，連接揮髮油提取裝置，採用水蒸氣蒸餾法加熱提取5-8h，收集所得揮髮油至離心管，乙醚蕩洗揮髮油提取器2次，合併乙醚層和揮髮油，常溫通風櫥下揮幹乙醚，加入無水硫酸鈉，至-20℃保存。
2、番荔枝果皮揮髮油成分分析
GC-MS分析條件為：氦氣流速1.0mL/min，柱溫設置為60℃維持4分鐘，以5℃/min的速度升至170℃，170℃維持4min，然後以5℃/min的速度升至250℃，250℃維持5min，進樣1μL，荔枝果皮揮髮油GC-MS總離子流圖如圖1；共鑑定出49個化合物，見表1。
表1番荔枝果皮揮髮油中化學成分
實施例2番荔枝果皮揮髮油體外對人腫瘤細胞的抑制作用
1、採用MTT法測試揮髮油對SMMC-7721細胞的殺傷作用：在96孔板中每孔種8000個細胞，24h後，加入實施例1製備得到的不同濃度的揮髮油，分別為3.1μg/mL，6.2μg/mL，12.5μg/mL，25μg/mL，50μg/mL，100μg/mL和200μg/mL，48h後，每孔加20μL的MTT，孵育4h，除去培養液，加150μLDMSO，與酶標儀上490nm下檢測吸光度值，計算IC50值抗腫瘤結果如圖2所示，以上實驗重複三次，得IC50為54.81μg/mL。
2、將SMMC-7721細胞接種於6孔板中，每孔2*105個細胞，12h後，給藥不同濃度的揮髮油(20μg/mL、40μg/mL)。24h後，收集細胞，部分染色凋亡試劑，部分染色周期試劑，採用流式細胞儀測試。結果顯示，番荔枝果皮揮髮油能阻斷細胞分裂於G1期，同時誘導細胞凋亡，對細胞凋亡的誘導呈劑量依賴性。
由以上抗腫瘤試驗結果表明，本發明提供的番荔枝果皮揮髮油對肝癌細胞具有很好的抑制作用，並且實驗過程中，未見有明顯毒副作用，臨床應用安全。有望開發成抗腫瘤藥物，並且番荔枝果皮資源廣泛，可實現產業化發展，成本較低，臨床上易推廣應用。