組織保護活性多肽及其應用的製作方法

2023-05-02 16:05:46

組織保護活性多肽及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公布了一系列用於治療奶牛乳腺炎的多肽。本發明多肽可作為一種飼料添加劑。本發明多肽餵飼奶牛，對奶牛乳腺炎症，具有良好的治癒和預防作用。
【專利說明】組織保護活性多肽及其應用

【技術領域】
[0001]本發明屬於生物【技術領域】，具體地說，本發明涉及一組織保護活性多肽。

【背景技術】
[0002]奶牛乳腺炎是當前危害奶牛業發展，制約奶牛生產的一種重要疾病，值得奶牛生產者及畜牧工作者的高度重視和關注。發病情況及發病率的發生已成為一個世界性的問題。我國奶牛的發生更高，中國農業科學院蘭州中研究所對我國西北、華北、東北、中南、西南地區22個城市32個奶牛場的10371頭成年泌乳牛進行了調查，臨床型平均發病率為33.41% (9.7%~55.6% )，並對其中5個地區20個奶牛場的3384頭泌乳期奶牛進行了隱性檢查。結果表明隱性頭平均陽性檢出率73.91% (62.07%~93.95% )，乳區平均陽性檢出率為44.74% (35.29%~72.81% )，兩類的發病率均高於國外報導。
[0003]目前國內外對牛乳腺炎的治療主要是抗生素和疫苗，但抗生素在治療牛乳腺炎症中存在諸多不利的因素。
[0004]現有技術中，ZL201110235105.1提供了一種對牛乳腺炎具有治療作用的蛋白，為了提高蛋白的活性，針對蛋白的活性位點進行特異性的突變和取代，從而尋找活性更高的變體是常規的做法。為了進一步提高該蛋白的生物活性， 申請人:通過大量的實驗，針對該申請的蛋白胺基酸序列中特定的位點進行了點突變，從而獲得了一系列比該多肽本身具有更高生物學活性的治療牛乳腺炎的多肽。
[0005]發明詳述
[0006]本發明涉及的多肽，具有下列結構:
[0007](SLl):Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val ；
[0008](SL2):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly Val ；
[0009](SL3):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly ValSer ；
[0010](SL4):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Asp Asp Ala Leu Gly ValPro ；
[0011](SL5):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly ValPro ；
[0012](SL6):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val ；
[0013](SL7):Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val ；
[0014](SL8):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val ；
[0015](SL9):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys Pro Pro He Asp Ala Leu Gly ValSer ；
[0016](SLlO):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro He Asp Ala Leu Gly ValSer ；
[0017] (SLll):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro He Asp Ala Leu Gly Val ；
[0018](SL12):Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val Ser ；
[0019](SL13):Pro Leu Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro Ser Asp Ala Leu Gly ValSer Ser ；
[0020](SL14):1le Glu Pro Ser Pro Gly Lys He Pro Ser Asp Ala Leu Gly Val SerSer ；
[0021]對照1:Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val ；
[0022]對照2:Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ser Asp Asp Ala Leu Gly Val。
[0023]本發明的多肽合成後，可以做成游離態形式，也可以做成陽離子鹽，如:TFA鹽(三氟乙酸鹽)，HCl鹽(鹽酸鹽)，醋酸鹽形式。
[0024]採用本發明多肽配製奶牛飼料添加劑具有對於奶牛乳腺的保護作用和對乳腺炎的治療，預防作用。
[0025]本發明的多肽，可以選擇和一種或多種藥物載體組合，製成多種藥物劑型，用於治療。這些藥物劑型涵蓋:注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。劑量優選在10-5~10-2mg/kg體重的範圍內，以0.1% -0.5%的較高濃度全身或局部給藥。對於具體治療的最佳劑量的確定是本領域技術人員熟知的。

【具體實施方式】
[0026]實施例1:多肽的化學合成及穩定性和毒性試驗:
[0027]採用本領域常用的Fmoc固相法化學合成SL1-SL14以及對照I和對照2所述的多肽。
[0028]將本發明多肽於40°C保溫76天和120天測試其穩定性。穩定性試驗採用HPLC方法進行測定。水溶液中多肽的濃度為0.2% (w/v):柱，Kromasil100，5u，250x4.6mm;流動相，0.1 %三氟乙酸的水/乙睛溶液(O至50vol.%)，在25分鐘內梯度洗脫，流速lml/min ；檢測:UV，218nm。通過檢測可以表明，本發明多肽穩定性非常高。其溶液在40度，120天後依然具有98%以上的目標物質。對照肽I和2也在120天後分別具有96%和90%的目標物質
[0029]採用小鼠灌胃和注射方式測定本發明多肽的急性毒性。溶液配製:
[0030]米用本發明多肽25暈克,加滅菌水至20毫升，配置成濃度為1.25暈克/毫升的溶液，供口服灌胃。
[0031]米用本發明多肽25暈克,加滅菌水至10毫升,配置成濃度為2.5暈克/毫升的溶液，供腹腔注射用。給藥劑量計算:
[0032]小鼠口服灌胃給藥體積為40毫升/公斤體重，故給藥劑量為:
[0033]1.25mg/ml*40mi/kg = 50m/kg。
[0034]小鼠腹腔注射給藥體積為20毫升/公斤體重，故給藥劑量為:
[0035]2.5mg/ml*20ml/kg = 50mg/kg。
[0036]取健康小鼠80隻，分四組實驗。給藥後，在第7天和14天，觀察，稱重。並於實驗結束後稱重，處死，解剖觀察內部器官。
[0037]結論:
[0038]1、小鼠一日一次口服灌胃給藥，給藥劑量50毫克/公斤體重，未見明顯急性毒性反應。LD50 > 50mg/kg。
[0039]2、小鼠一日一次腹腔注射給藥，給藥劑量50毫克/公斤體重，未見明顯急性毒性反應。LD50 > 50mg/kg。
[0040]由上所述，本發明多肽在50毫克每公斤體重劑量下未見明顯急性毒性表現。對照肽同樣也未見明顯急性毒性表現。
[0041]實施例2
[0042]含本發明多肽的飼料添加劑的製備。
[0043]配方如下:
[0044]

【權利要求】
1.一種多肽，其特徵是，該多肽的胺基酸序列如SEQ ID N0.1-15所示。
2.一種藥物製劑，其特徵是，權利要求1記載的多肽，選擇與一種或多種藥物載體組合，製成多種藥物劑型，所述藥物劑型涵蓋:注射溶液、片劑、霜劑、膠囊、軟膏、洗劑、舌含片等劑型局部或全身給藥。
3.—種飼料，其特徵是，權利要求1或2記載的多肽或藥物製劑，添加入飼料或以飼料添加劑等各種方式製備的飼料。
4.權利要求1或2記載的多肽或藥物製劑或飼料在製備用於組織炎症的治療的藥物中的應用。
5.權利要求1、2或3記載的多肽、藥物製劑或飼料在製備用於治療奶牛乳腺炎的藥物中 的應用。
【文檔編號】C07K7/08GK104072588SQ201410292482
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年6月22日 優先權日:2014年6月22日
【發明者】馬恆標 申請人:馬恆標