植物病理生物學測定方法與流程

2023-09-11 06:04:55 1

本發明涉及生物檢測領域，特別是指植物病理生物學測定方法。

背景技術：

近年來，廣東省部分菸草生產地區出現菸草畸形生長現象，大田表現為整塊田發生，卻畸形症狀整齊一致。廣東煙區、湖南煙區及江西煙區相繼出現菸葉畸形現象，且有進一步擴展蔓延的趨勢，嚴重影響烤菸的產量和質量以及菸農的經濟收入。

解決菸草畸形生長的問題，首先要解決的，即是了解導致菸草畸形的原因，這需要科學，準確，可靠的研究分析方法進行確定，在現有的一些測定方法中，由於一般為囊括範圍較大的統一性的測定方法，雖然具有一定的指導意義，但在對具體的種類操作中，則可能會出現一定的差異，導致測定結果不準確，甚至不可行，而測定結果的不準，直接對治理菸草畸形將產生非常大的影響，因此，如何針對菸草進一步提高檢測的準確度，如何根據菸草的特性進行測定方法的優化，成為解決問題的關鍵。

技術實現要素：

本發明提出一種植物病理生物學測定方法，解決現有技術中，針對菸草畸形的病因測定方法中，生物學測定針對性不強，導致結果不準的問題。

本發明的技術方案是這樣實現的：植物病理生物學測定方法，包括以下步驟：

(1)從田間採回的菸草畸形葉，取1.0g葉加上10mL 0.02mol/L磷酸緩衝液在研缽中完全碾碎，通過機械摩擦接種法，接種溫室培育的4～6葉期幼苗的頂部平展葉的若干種鑑別寄主各15株；

(2)以0.02mol/L磷酸緩衝液接種菸草為陰性對照，接種菸草花葉病毒(TMV)為陽性對照。

(3)觀察植株的畸形、不良症狀並判定。

根據上述的方法與參數的設定，進行接種後的觀察，並判定結果，其中，結合發明人多年的菸草種植經驗，在參數的設置上，針對菸草的接種量，以及接種時間上，均進行了優化，保證了接種的有效性。

進一步，步驟(1)中，鑑別寄主包括普通煙(G-28和K326)、心葉煙、莧色黎(學名)、黃瓜(學名)、西葫蘆(學名)，這些鑑別寄主的選取，也是針對當地的生長特性，精心選定而成。

進一步，為進一步提高接種的有效性，以及判定的準確性，在過程控制上，進行更加精確的限定，包括：接種的植株置於網室內，保持溫度20～27℃；接種後72h內經常灑水保持葉面溼潤；5d後第二次接種；從接種第7d起，每天觀察植株表現；第10d仍未顯症者，再接種一次；觀察植株一直到開花才結束。

本發明相比於傳統的通用性的生物學測定技術而言，針對菸草的生長特性，結果多年的菸草種植經驗，對測定的參數控制，接種優化，鑑別寄主的選取上，均進行了調整，極大的提高了菸草生物學測定的可靠性，在菸草畸形的檢測中，更加有效。

具體實施方式

下面將結合本發明的實施例，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

實施例1

本實施例的實施地點為五華煙區的周江煙田。

從田間採回的菸草畸形葉，通過機械摩擦接種法接種普通煙(G-28和K326)、心葉煙、莧色黎、黃瓜、西葫蘆等鑑別寄主。結果顯示，在接種5d後，其作為陽性對照(接種TMV)的菸草出現明顯的花葉症狀，而陰性對照在觀察結束時都無任何症狀，這表明本次實驗的接種方法是可行的。而用田間採回的菸草畸形葉接種菸草、以及其它任何病毒鑑別寄主，直至接種的所有植株開花，任何植株都沒有畸形或任何其它不良症狀出現。這表明，這些畸形菸草葉標樣不能使這些鑑別寄主發病或致畸，這些畸形葉可能不是由植物病毒引起的。

實施例2

本實施例的實施地點為五華煙區的平南煙田。

從田間採回的菸草畸形葉，通過機械摩擦接種法接種普通煙(G-28和K326)、心葉煙、莧色黎、黃瓜、西葫蘆等鑑別寄主。結果顯示，在接種5d後，其作為陽性對照(接種TMV)的菸草出現明顯的花葉症狀，而陰性對照在觀察結束時都無任何症狀，這表明本次實驗的接種方法是可行的。用田間採回的菸草畸形葉接種菸草、以及其它病毒鑑別寄主，接種的植株開花超過50％有畸形或其它不良症狀出現。這表明，這些畸形菸草葉標樣使這些鑑別寄主發病或致畸，這些畸形葉可能是由植物病毒引起的。

以上所述僅為本發明的較佳實施例而已，並不用以限制本發明，凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。