穩定化的蛋白溶液的製作方法

2023-09-13 06:58:00

穩定化的蛋白溶液的製作方法
【專利摘要】本發明涉及在超濾期間通過添加蔗糖到高度濃縮的蛋白溶液中來穩定化高度濃縮的蛋白溶液的方法，特別地但不排他地涉及在超濾期間通過添加蔗糖到高度濃縮的抗體溶液中來穩定化高度濃縮的抗體溶液的方法。
【專利說明】穩定化的蛋白溶液
[0001] 描述 本發明涉及濃縮的含蛋白的溶液的超濾，特別是濃縮的含抗體的溶液的超濾，特別是 在超濾期間這些溶液的穩定化。

【背景技術】
[0002] 許多含有可注射蛋白的溶液，特別是含有抗體的溶液被供應到市場上。由於注射 體積的限制，這些溶液用於皮下注射的用途導致了對溶液的高濃度的需求。
[0003] 抗體純化的一般方法是現有技術中熟知的，並例如在Pete Gagnon: Purification Tools for monoclonal Antibodies (1996) ISBN-9653515-9-9 中描述。
[0004] 溶液中的抗體純化後，通過使用超濾（UF)增加抗體濃度以及，然後，在某一點上 (通常在大約50 g/L抗體（mAb)濃度)，通過超濾將製劑緩衝液滲濾到溶液中，然後通常將 配製的溶液進一步濃縮到100 g/L和300 g/L之間的其終濃度，不含蔗糖，通常在最終的超 濾濃縮後將蔗糖添加到產物中。在通過超濾濃縮蛋白/抗體期間，在膜表面的蛋白濃度(所 謂的壁面濃度）可增加到高水平。這可以證明對蛋白/抗體有害並引起它變性和沉澱。這 往往被認為是在計算的蛋白濃度和測量的蛋白濃度中觀察到差異的原因。
[0005] 對於通過滯留物中UV280 nm吸收實際測量的濃度通過在縮減係數（reduction factors)基礎上進行計算的不同濃度的問題影響超濾過程的產率。這個問題的已知解決方 案是嘗試通過用緩衝液衝洗組件（module)數次以回收蛋白，但回收的蛋白將表現出大大 降低的濃度。
[0006] 因此需要方法來解決超濾期間高度濃縮的蛋白溶液的變性和沉澱的問題。
[0007] 已經表明，蛋白溶液中的高濃度蔗糖可以穩定溶液中的蛋白，特別是在這些溶液 的延長儲存期間防止聚集。然而，感染風險可導致避免用蔗糖作為超濾期間或者其它純化 或濃縮步驟的組分。
[0008] 發明概述 本發明提供了高度濃縮的蛋白溶液的超濾方法。本發明還提供了在超濾期間穩定化高 度濃縮的蛋白溶液的方法。
[0009] 本發明提供了高度濃縮的蛋白溶液的超濾方法，由此在超濾期間通過添加蔗糖到 溶液中來穩定化蛋白溶液。本發明還提供了高度濃縮的蛋白溶液的超濾方法，其中蛋白是 抗體。
[0010] 發明描述 本發明提供了高度濃縮的蛋白溶液的超濾方法。本發明還提供了在超濾期間穩定化高 度濃縮的蛋白溶液的方法。
[0011] 已經令人驚奇地發現，在通過超濾進一步濃縮前將蔗糖添加到高度濃縮的蛋白溶 液中似乎保護蛋白免於超濾期間的變性和沉澱。這導致了蛋白更高的產率或回收率％以及 更低的濁度和聚集物形成，如超濾期間通過％HMWP所測量的。
[0012] 如本文所使用的術語"蛋白"、"多肽"和"肽"意思是由肽鍵連接的至少五個組成氨 基酸構成的化合物。組成胺基酸可來自由遺傳密碼編碼的胺基酸的組並且它們可以是並非 由遺傳密碼編碼的天然胺基酸以及合成胺基酸。非遺傳密碼編碼的天然胺基酸是例如羥脯 氨酸、Y-羧基穀氨酸、鳥氨酸、磷酸絲氨酸、D-丙氨酸和D-穀氨醯胺。合成胺基酸包含由 化學合成製備的胺基酸，即由遺傳密碼編碼的胺基酸的D-異構體，例如D-丙氨酸和D-亮 氨酸，Aib (α-氨基異丁酸)、Abu (α-氨基丁酸)、Tle (叔丁基甘氨酸)、β-丙氨酸、3-氨 甲基苯甲酸和鄰氨基苯甲酸。
[0013] 如本文所使用的術語"抗體"和/或"mAb"涵蓋單克隆抗體(包括具有免疫球蛋白 Fc區的全長抗體)、帶有多表位特異性的抗體組合物、雙特異性抗體、雙體（diabodies)和 單鏈分子，以及抗體片段(例如Fab、F(ab'） 2和Fv)。
[0014] 如本文所使用的術語"單克隆抗體"是指從基本均一的抗體群獲得的抗體，即組成 群的個體抗體是相同的，除了可少量存在的可能天然發生的突變。單克隆抗體是高度特異 性的，針對單一抗原位點。此外，與通常包括針對不同決定簇(表位）的不同抗體的常規(多 克隆）抗體製劑相反，每個單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。除了它們的特異性之外， 單克隆抗體還有利的是它們是通過雜交瘤培養而合成的，沒有被其它免疫球蛋白汙染。修 飾語"單克隆"表明了從基本均一的抗體群獲得的抗體的特徵，並且不被理解為需要通過 任何特定方法生產抗體。例如，根據本發明的要使用的單克隆抗體可以通過由Kohler等 Nature, 256: 495 (1975)中首次描述的雜交瘤方法製備，或者可以通過重組DNA方法(參 見例如美國專利號4, 816, 567)製備。"單克隆抗體"也可以從噬菌體抗體庫中分離，使用 例如 Clackson 等 Nature, 352: 624-628 (1"1)中以及 Marks 等 J. Mol. Biol.，222: 581-597 (1991)中描述的技術。
[0015] 本文的單克隆抗體可擴展到包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白），其中重鏈和/或輕 鏈部分與源自特定種或者屬於特定抗體類或亞類的抗體中相應的序列相同或同源，而一條 或多條鏈的其餘部分與源自另一種或者屬於另一抗體類或亞類的抗體中相應的序列相同 或同源，以及這些抗體的片段，只要它們表現出希望的生物活性(美國專利號4, 816, 567 ; Morrison 等 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81: 6851-6855 (1984))。
[0016] 可配製到本發明穩定組合物中的合適抗體的實例包括：3F8、阿巴伏單抗 (Abagovomab)、阿昔單抗（Abciximab)、ACZ885 (卡那奴單抗（canakinumab))、阿達木單 抗（Adalimumab)、阿德木單抗（Adecatumumab)、阿非莫單抗（AfeIimomab)、阿託珠單抗 (Afutuzumab)、培阿珠單抗（Alacizumab pegol)、阿侖珠單抗（Alemtuzumab)、噴替酸阿 妥莫單抗（Altumomab pentetate)、馬安莫單抗（Anatumomab mafenatox)、安蘆珠單抗 (Anrukinzumab (IMA-638))、阿泊珠單抗（Apolizumab)、阿西莫單抗（Arcitumomab)、阿塞 珠單抗（Aselizumab)、Atlizumab(託珠單抗（tocilizumab))、阿託木單抗（Atorolimumab)、 巴匹珠單抗（Bapineuzumab)、巴利昔單抗（Basiliximab)、巴維昔單抗（Bavituximab)、 貝妥莫單抗（Bectumomab)、貝利木單抗（BeIimumab)、柏替木單抗（BertiIimumab)、貝 索單抗（Besilesomab)、貝伐珠單抗（Bevacizumab)、比西單抗（Biciromab)、莫比伐單 抗(Bivatuzumab mertansine)、蘭妥莫單抗（Blinatumomab)、Brentuximabvedotiru 布雷奴單抗（Briakinumab)、卡那奴單抗（Canakinumab)、美坎珠單抗（Cantuzumab mertansine)、噴替酸卡羅單抗（Capromab pendetide)、卡妥索單抗（Catumaxomab)、西 地珠單抗（Cedelizumab)、Certlizumabpegol、西妥昔單抗（Cetuximab)、泊西他珠單 抗（Citatuzumab bogatox)、西妥木單抗（Cixutumumab)、克立昔單抗（Clenoliximab)、 Clivatuzumabtetraxetan、CNTO 148 (戈利木單抗（golimumab))、CNTO 1275 (烏司奴單 抗（ustekinumab))、可那木單抗（Conatumumab)、達西珠單抗（Dacetuzumab)、達克珠單抗 (Daclizumab)、地舒單抗（Denosumab)、地莫單抗（Detumomab)、阿度莫單抗（Dorlimomab aritox)、Dorlixizumab、依美昔單抗（Ecromeximab)、依庫珠單抗（Eculizumab)、埃巴 單抗（Edobacomab)、依屈洛單抗（Edrecolomab)、依法珠單抗（Efalizumab)、依芬古單 抗（Efungumab)、艾西莫單抗（Elsilimomab)、培化恩莫單抗（Enlimomabpegol)、西依匹 莫單抗（Epitumomabcituxetan)、依帕珠單抗（Epratuzumab)、厄利珠單抗（Erlizumab)、 厄馬索單抗（Ertumaxomab)、埃達珠單抗（Etaracizumab)、艾韋單抗（Exbivirumab)、 法索單抗（Fanolesomab)、法拉莫單抗（Faralimomab)、泛維珠單抗（Felvizumab)、非 扎奴單抗（Fezakinumab)、芬妥木單抗（Figitumumab)、芳妥珠單抗（Fontolizumab)、 福拉韋單抗（Foravirumab)、非蘇木單抗（Fresolimumab)、加利昔單抗（Galiximab)、 更汀蘆單抗（Gantenerumab)、加維莫單抗（Gavilimomab)、吉妥珠單抗奧佐米星 (Gemtuzumabozogamicin)、戈利木單抗（Golimumab)、戈利昔單抗（Gomiliximab)、伊巴珠 單抗（Ibalizumab)、替伊莫單抗（Ibritumomab tiuxetan)、伊戈伏單抗（Igovomab)、英西 單抗（Imciromab)、英利昔單抗（Infliximab)、英妥木單抗（Intetumumab)、伊諾莫單抗 (Inolimomab)、伊珠單抗奧加米星（Inotuzumabozogamicin)、伊匹木單抗（Ipilimumab)、 伊妥木單抗（Iratumumab)、凱利昔單抗（Keliximab)、拉貝珠單抗（Labetuzumab)、來瑞 珠單抗（Lebrikizumab)、來馬索單抗（Lemalesomab)、樂德木單抗（Lerdelimumab)、來 沙木單抗（Lexatumumab)、利韋單抗（Libivirumab)、林妥珠單抗（Lintuzumab)、魯卡 木單抗（Lucatumumab)、魯昔單抗（Lumiliximab)、馬帕木單抗（Mapatumumab)、馬司莫 單抗（Mas I imomab)、馬妥珠單抗（Matuzumab)、美泊珠單抗（Mepo I i zumab)、美替木單 抗（Metelimumab)、米拉珠單抗（Milatuzumab)、明瑞莫單抗（Minretumomab)、米妥莫單 抗（Mitumomab)、莫羅木單抗（Morolimumab)、莫維珠單抗（Motavizumab)、莫羅單抗-⑶3 (Muromonab_CD3)、MY0-029 (司他蘆單抗（stamulumab))、他那可單抗（Nacolomab tafenatox)、他那莫單抗（Naptumomabestafenatox)、那他珠單抗（Natalizumab)、奈巴 庫單抗（Nebacumab)、奈妥木單抗（Necitumumab)、奈瑞莫單抗（Nerelimomab)、尼妥珠單 抗（Nimotuzumab)、疏諾莫單抗（Nofetumomabmerpentan)、奧瑞珠單抗（Ocrelizumab)、奧 度莫單抗（Odulimomab)、奧法木單抗（Ofatumumab)、奧馬珠單抗（Omalizumab)、莫妥珠 單抗（Oportuzumabmonatox)、奧戈伏單抗（Oregovomab)、奧昔珠單抗（Otelixizumab)、 帕昔單抗（Pagibaximab)、帕利珠單抗（Pal ivizumab)、帕木單抗（Panitumumab)JQE 庫單抗（Panobacumab)、帕考珠單抗（Pascolizumab)、帕尼單抗（Pemtumomab)、培妥珠 單抗（Pertuzumab)、培克珠單抗（Pexelizumab)、平妥莫單抗（Pintumomab)、普立昔單 抗（Priliximab)、普立木單抗（Pritumumab)、PRO 140、雷韋單抗（Rafivirumab)、雷莫 蘆單抗（Ramucirumab)、雷珠單抗（Ranibizumab)、雷昔庫單抗（Raxibacumab)、瑞加 韋單抗（Regavirumab)、瑞利珠單抗（Reslizumab)、利妥木單抗（Rilotumumab)、利妥 昔單抗（Rituximab)、羅妥木單抗（Robatumumab)、隆利珠單抗（Rontalizumab)、羅維 珠單抗（Rove Ii zumab)、蘆利珠單抗（Rup Ii zumab)、沙妥莫單抗（Satumomab)、司韋單 抗（Sevirumab)、西羅珠單抗（Sibrotuzumab)、西法木單抗（Sifalimumab)、塞妥昔單抗 (Siltuximab)、西利珠單抗（Siplizumab)、蘇蘭珠單抗（Solanezumab)、Sonepcizumab、 松妥珠單抗（Sontuzumab)、司他蘆單抗（Stamulumab)、硫索單抗（Sulesomab)、替珠單抗 (Tacatuzumab tetraxetan)、他度珠單抗（Tadocizumab)、他利珠單抗（Talizumab)、他尼珠 單抗（Tanezumab)、帕他莫單抗（Taplitumomab paptox)、替非珠單抗（Tefibazumab)、阿替 莫單抗（Telimomab aritox)、替妥莫單抗（Tenatumomab)、替奈昔單抗（Teneliximab)、替 利珠單抗（Teplizumab)、TGN1412、Ticilimumab (曲美木單抗（tremelimumab))、替加珠單 抗（Tigatuzumab)、TNX_355 (伊巴珠單抗（ibalizumab))、TNX-650、TNX-901 (那他珠單抗 (talizumab))、託珠單抗（Tocilizumab (atlizumab))、託利珠單抗（Toralizumab)、託西 莫單抗（Tositumomab)、曲司珠單抗（Trastuzumab)、曲美木單抗（Tremelimumab)、西莫白 介素單抗（Tucotuzumabcelmoleukin)、妥韋單抗（Tuvirumab)、烏珠單抗（Urtoxazumab)、 烏司奴單抗（Ustekinumab)、伐利昔單抗（Vapaliximab)、維多珠單抗（Vedolizumab)、維 妥珠單抗（Veltuzumab)、維帕莫單抗（Vepalimomab)、維西珠單抗（Visilizumab)、伏洛昔 單抗（Volociximab)、伏妥木單抗（Votumumab)、扎蘆木單抗（Zalutumumab、扎木單抗 (Zanolimumab)、齊拉木單抗（Ziralimumab)、阿佐莫單抗（Zolimomab aritox)等。
[0017] 在一個實施方案中，所述蛋白是免疫球蛋白。在一個實施方案中，所述蛋白是抗 體。在一個實施方案中，所述蛋白是單克隆抗體（mAb)。在一個實施方案中，所述蛋白是 IgG4抗體。
[0018] 在一個實施方案中，所述抗體是單克隆抗-IL20抗體。在一個實施方案中，所述抗 體是如W02010/000721中所描述的抗-IL20抗體。在一個實施方案中，所述抗-IL20單克 隆抗體是如W02010/000721中所描述的15D2或5B7。
[0019] 將理解的是，本發明發現了以高濃度存在於待超濾溶液中的蛋白的特別實用性。 因此，在一個實施方案中，所述蛋白以40 g/L或更高濃度存在於待超濾溶液中，例如40、 45、40、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、175、200、250、300 g/L 或更1?。
[0020] 最終超濾滯留物將具有更高的蛋白濃度，例如75 g/L和400 g/L之間的量，例如 75 g/L和350 g/L之間、例如75 g/L和300 g/L之間、例如100 g/L和250 g/L之間、例 如75 g/L和200 g/L之間、例如75 g/L和150 g/L之間、例如75 g/L和100 g/L之間。 在一個實施方案中，所述蛋白以100 g/L和400 g/L之間，例如100 g/L和350 g/L之間、 例如100 g/L和300 g/L之間、例如100 g/L和250 g/L之間、例如如100 g/L和200 g/L 之間、例如100 g/L和150 g/L之間的濃度存在於超濾滯留物中。在一個實施方案中，蛋白 以125 g/L和400 g/L之間，例如125 g/L和350 g/L之間、例如125g/L和300 g/L之間、 例如125 g/L和250 g/L之間、例如125 g/L和200 g/L之間、例如125 g/L和150 g/L之 間的濃度存在於超濾滯留物中。在一個實施方案中，蛋白以150 g/L和400 g/L之間，例如 150 g/L和350 g/L之間、例如150 g/L和300 g/L之間、例如150g/L和250 g/L之間、例 如150g/L和200 g/L之間的濃度存在。
[0021] 如本文所使用的術語組合物中蛋白的"穩定性"是指溶液中蛋白的生物穩定性、物 理穩定性或化學穩定性。在製備過程中，蛋白結構中的化學共價改變導致了化學降解產物 的形成，所述化學降解產物與天然蛋白結構相比具有潛在的更低生物效價和/或潛在的增 加的免疫原性。
[0022] 取決於天然蛋白的類型和性質以及蛋白的暴露環境，可形成各種化學降解產物。 化學降解的消除最可能是不可以完全避免的，並且在蛋白組合物的儲存和使用期間，增加 量的化學降解產物是是經常可見的，這是本領域技術人員所熟知的。大多數蛋白都易於脫 醯胺，這是穀氨醯胺醯或天冬醯胺醯殘基的側鏈醯胺基團被水解後形成游離羧酸的過程。 其它降解途徑參與了高分子量轉化產物的形成，其中兩個或更多蛋白分子通過轉醯胺作用 和/或二硫鍵相互作用彼此共價結合，導致了共價結合二聚體、寡聚體和多聚體降解產物 {Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T. J. & Manning M. C., Plenum AferZorA 7效J?)。可提及氧化作用（例如甲硫氨酸殘基的氧化作用）作為化學降解 的另一變型。蛋白組合物的化學穩定性可通過以下來評估：測量經暴露於不同環境條件後 不同時間點的化學降解產物的量(降解產物的形成往往可通過例如增加溫度而加速)。各單 獨降解產物的量通常通過使用各種層析技術(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)取決於分子 大小和/或電荷分離降解產物來確定。
[0023] 本領域可獲得用於測量蛋白穩定性的各種分析技術/7TOiei/?價嘆 Delivery, 247-301，Vincent Lee Ed. & Marcel Dekker, NY. Pubs 1991 .,^XB^Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90, 1993) 〇
[0024] SEC-HPLC特別用於蛋白聚集物的定量。樣品可以例如使用TSK G3000 SWXL柱進行 分析，等度洗脫，以及隨後在214或280 nm進行UV檢測。此方法用於確定根據凝膠樹脂大 小分離的單體IgG含量以及由二聚體種類或更大種類所組成的高分子量蛋白（HMWP)的％。 單體含量和％ HMWP是相對於通過該方法檢測到的總蛋白含量而確定的。
[0025] 蛋白溶液的物理穩定性可由熟知的方法測量，包括通過測量吸收或光密度來測量 光衰減。這樣的測量方法與溶液濁度有關。
[0026] 如本文所使用的術語溶液的"濁度"是指蛋白溶液中的雲霧狀物或混濁的存在。 在蛋白溶液中，濁度通常是在320-800 nm之間的波長下使用UV-可見光分光光度計測量。 濁度的程度可通過參照具有已知濁度的溶液生成的標準曲線來計算。對於含蛋白的藥物溶 液，參考標準可基於歐洲藥典（Ph. Eur.)第2. 2. 1部分，它定義了可視澄清度並描述了相 對於水的濁度的標準水平。
[0027] 如本文所使用的術語超濾（UF)是指各種膜過濾，其中靜水壓力迫使液體或溶液 通過半透膜。高分子量溶質被截留(滯留物)，而水和低分子量溶質通過膜(滲透物或濾液)。 這種分離方法在工業和研究中使用，用於純化和濃縮高分子（1〇 3 -IO6 Da)溶液(特別是蛋 白溶液)。超濾特別應用於錯流過濾（cross-flow filtration)模式。如本文所使用的術語 滯留物是指被截留的東西，也就是液體或溶液中不能通過超濾膜的部分或內含物。如本文 所使用的術語濾液是指在超濾期間通過膜且未被截留的液體或溶液部分或一部分。
[0028] 濃縮因子（concentration factor)是在超濾濃縮期間滯留物體積減少量的倒數。 當滯留物體積減少到時，濃縮因子將是2。如本文所使用的術語"計算的濃度"是指通過 原始mAb濃度乘以濃縮因子而計算得到的估計濃度。
[0029] 如本文所使用的術語"產率"或"回收率％"是指在超濾步驟期間或步驟間滯留物 或者多種滯留物(如果已經進行了多次超濾或衝洗步驟的話）中回收的蛋白的量，相比與待 超濾的起始蛋白溶液中的蛋白總量而目。
[0030] 如本文所使用的術語錯流過濾是指蛋白純化方法，也被稱為切向流過濾，其是一 種過濾類型(特定單元操作)。錯流過濾與死端式過濾不同，死端式過濾中進料通過膜或床， 固體被捕獲在過濾器中以及濾液在另一端釋放。錯流過濾的得名是因為進料流的大部分切 向經過過濾器表面，而不是進入過濾器裡。它最主要的優點是濾餅(其可以堵塞過濾器）在 過濾過程中基本上被衝洗掉了，增加了過濾器單元可被操作的時間長度。其可以是連續的 過程，不同於分批式的死端過濾。
[0031] 在錯流過濾中，進料以相對於滲透物一側的正壓力通過濾膜(切向）。小於膜孔徑 的材料部分作為滲透物或濾液通過膜；所有其它材料都作為滯留物被截留在膜的進料側。
[0032] 通過允許滲透物流動的發生而減少了流體體積。小於膜孔徑的溶劑、溶質和顆粒 通過膜，而大於孔徑的顆粒則被截留，以及因此而被濃縮。在生物加工應用中，濃縮之後可 進行滲濾。
[0033] 如本文所使用的術語滲濾是指溶液或液體的稀釋和再濃縮，其中為了從溶液或液 體中有效地去除滲透物組分，可以以滲透物流速同樣的速度添加新鮮溶劑到進料中代替滲 透物體積，使得體系中的體積保持恆定。這類似於衝洗濾餅以除去可溶性組分。 實施例
[0034] 實施例1 : 為了在含有抗-IL-20抗體的溶液中進行超濾優化程序，在配備有Pellicon 3， Ultracel 30 K膜，88 cm2組件（Millipore)的Akta錯流設備上針對溶液B (5X滯留物 體積）進行溶液A的滲濾。
[0035] 溶液 A :: 100 g / L抗 IL20 150 mM鹿糖 25 mM精氨酸 25 mM NaCl 33 mM組氨酸 pH 值 6. 5。
[0036] 溶液 B : 25 mM精氨酸 25 mM NaCl 33 mM組氨酸 pH 值 6. 5。
[0037] 在Akta錯流設備上也配備有換熱器（Exergy, series 17 model00402)用於調節 滯留物溫度至45°C。Delta P (Pin-Pout)為2 bar且TMP (透膜壓力）為I bar。滲濾之 後，再根據表1用超濾濃縮滯留物。
[0038] 滲濾的效果是將溶液的外觀由澄清變成乳狀，指示蛋白的沉澱。
[0039] 濃縮因子是在超濾濃縮期間滯留物體積減少的倒數。當滯留物體積減少到1A時， 濃縮因子將是2。通過使用這個因子與原始濃度相乘來確定計算的mAb濃度：108. 3 X 2 = 216. 6。
[0040] 在含有和不含150 mM蔗糖的溶液B中抗-IL20溶液的下述濃縮期間，測量mAb含 量並與計算的含量(通過濃縮因子計算）相比，表1。
[0041] 表1、添加和不添加蔗糖時計算的濃度與測量的(真實）濃度的比較。

【權利要求】
1. 高度濃縮的蛋白溶液的超濾方法，其中當所述溶液的蛋白濃度在40和60 g/L之間 時將蔗糖添加到所述溶液中，然後通過超濾進一步濃縮。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中所述高度濃縮的超濾滯留物中計算的蛋白濃度和 測量的蛋白濃度之間的差異減少。
3. 根據權利要求1或2所述的方法，其中所述高度濃縮的超濾滯留物中計算的蛋白濃 度和測量的蛋白濃度之間的差異小於30%。
4. 根據權利要求1所述的方法，其中蔗糖的添加穩定化待超濾的高度濃縮的溶液。
5. 根據權利要求1或4所述的方法，其中高度濃縮的超濾滯留物中的HMWP聚集物的水 平為1%或低於1%。
6. 根據權利要求1所述的方法，其中超濾期間蛋白的回收率增加。
7. 根據權利要求1或6所述的方法，其中超濾期間蛋白的回收率是待超濾高度濃縮蛋 白溶液中蛋白總量的94%或更高。
8. 根據前述權利要求任一項所述的方法，其中將所述蔗糖以50 mM和300 mM之間的濃 度添加到高度濃縮的蛋白溶液中。
9. 根據前述權利要求任一項所述的方法，其中所述蛋白是抗體。
10. 根據前述權利要求任一項所述的方法，其中所述抗體是單克隆抗體。
11. 根據前述權利要求任一項所述的方法，其中所述抗體是抗-IL-20單克隆抗體。
12. 濃縮根據前述權利要求任一項所述的蛋白或抗體溶液中的蛋白或抗體的方法，用 於藥物組合物中。
13. 治療炎性疾病的方法，其包含給患者施用權利要求12中所述的藥物組合物。
【文檔編號】C07K16/24GK104271600SQ201380024981
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2013年3月15日 優先權日:2012年5月14日
【發明者】O.E.詹森 申請人:諾和諾德A/S（股份有限公司）