一種穀氨酸脫氫酶的突變體酶及其構建方法

2023-09-19 01:50:40 1

專利名稱：一種穀氨酸脫氫酶的突變體酶及其構建方法
技術領域：
本發明涉及利用突變體酶及其構建方法，特別屬於穀氨酸脫氫酶的突變體酶及其構建方法。
背景技術：
胺基酸脫氫酶家族(amino acid dehydrogenases, EC 1. 4. 1)，該家族蛋白利用 NAD+或者NADP+為輔因子催化胺基酸氧化脫氨形成相應的酮酸。反應如下所示
權利要求
1.一種穀氨酸脫氫酶的突變體酶，其特徵在於它具有SEQ ID NO :1，所示的胺基酸序列。
2.一種編碼權利要求1所述的穀氨酸脫氫酶的突變體酶的基因。
3.權利要求1所述的一種穀氨酸脫氫酶的突變體酶的構建方法，包括以下步驟: 從鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)中獲得穀氨酸脫氫酶基因，通過突變引物獲得了突變的基因片段，將突變基因片段與pET28b質粒連接，構建重組表達質粒 pET28b-KA/LG;該重組質粒轉化大腸桿菌感受態細胞，構建用於突變體酶表達的基因工程菌 Rosetta(DE3)/pET28b-KA/LG ；所述的166位的突變引物為·166 位 anti-sense :5' -GATATCCCCCCCAGGCACGTCG-3『； 166 位 sense :5' -GATACCGACGTGCCTGGGGGGGATA-3『； 92位突變引物為·92 位 anti-sense :5' -GCATACCGCCAAGATAGGGGCCGATAG-3『； 92 位 sense:5' ~TCGGCCCCTATCTTGGCGGTATGCG~3『。
全文摘要
本發明公開了一種穀氨酸脫氫酶的突變體酶及其構建方法，所述的突變體酶具有SEQ ID NO1，所示的胺基酸序列。該突變基因在異源宿主大腸桿菌中獲得了良好表達，表達蛋白是一類能催化多種胺基酸的脫氫酶。本發明過程主要包括以下步驟(1)獲得穀氨酸脫氫酶基因gdh並構建重組質粒；(2)突變菌株的構建；3)表達菌株構建；(4)表達和純化。本發明與現有技術相比，所生成的工程菌不僅能催化穀氨酸，而且還能催化甲硫氨酸和正亮氨酸。
文檔編號C12N15/53GK102199578SQ20111005983
公開日2011年9月28日 申請日期2011年3月14日 優先權日2011年3月14日
發明者宋平, 曹正宇, 朱國萍, 潘蔚, 王文才, 王暉, 王鵬, 靳明明 申請人:安徽師範大學