一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法及應用的製作方法

2023-09-16 09:17:15

專利名稱：一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法及應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於納米功能材料、環境檢測、生物免疫技術和電化學分析領域，公開了一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法及應用。
背景技術：
雌激素是一種重要的生理激素，雌激素生物體的生理調節與不孕症、肥胖、絕經期的乳腺癌、前列腺癌、老年痴呆和骨質疏鬆症等多種人體疾病有關。人造雌激素如己烯雌酚、雙烯雌酚、己烷雌酚是醫學上常用於控制生理作用的藥物；也被廣泛用於促進牲畜生長，雌激素藥物一部分通過排洩物排出到環境水中，而其餘仍保存在生物體中。
己烯雌酚是人工合成的非留體雌激素物質，能產生與天然雌二醇相同的所有藥理與治療作用。主要用於雌激素低下症及激素平衡失調引起的功能性出血、閉經，還可用於死胎引產前，以提高子宮肌層對催產素的敏感性。許多證據證明這些天然的以及人工合成的藥物在低濃度(ng-mL—1)也可能成為人體健康的潛在危機，如癌症和其他病症等。在許多國家雌激素已經被禁止添加到動物的飼料中。因此，雌激素的禁止使用已經成為亟待解決的問題，而建立水中雌激素的高靈敏、特異性快速檢測方法迫在眉睫。目前對複合樣品中低濃度目標雌激素的檢測方法存在許多不足。電化學免疫傳感器具有樣品預處理簡單、成本低、靈敏度高、特異性強的優點，成為研究的重要手段。本實驗將Pt納米粒子雜化至孔徑較大的SBA-15的孔道及介孔壁上，製備了 Pt雜化的SBA-15納米複合材料(Pt@SBA-15)。該材料具有SBA-15和Pt納米粒子的雙重效應，是一種高催化活性的納米複合材料。採用Pt@SBA-15標記二抗，檢測其對底液中過氧化氫的催化性能，製備雙通道的絲網印刷電極生物傳感器，實現了環境樣品中兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇的同時檢測。

發明內容
本發明的目的之一是提供一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法。本發明的目的之二是將所製備的電化學傳感器，用於同時檢測兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇。本發明的技術方案，包括以下步驟。1.一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟:
(I)氨基化SBA-15的合成
將I g三嵌段共聚物E020P070E020 (P123)溶解在30 mL、1.5 2 mo I.!/1的HCl溶液中，加入2.215 g正矽酸乙酯(TE0S)，混合物在34°C下攪拌Γ5 h，轉移到高壓釜在100°C條件下加熱2(T22 h，冷卻後過濾，將獲得的白色粉末在空氣中乾燥，然後在560°C條件下煅燒3 4 h除去模板，合成製得SBA-15 ;將所合成的SBA-15，加l(Tl5 mL無水乙醇，置於100mL三口燒瓶中，油浴，加熱到70°C後，迅速加入50 μ 3_氨丙基三乙氧基矽烷，70°C恆溫回流3h，離心，用無水乙醇洗滌沉澱3次，室溫下真空乾燥9 11 h，得到氨基功能化的SBA-15。(2) Pt雜化的SBA-15的合成
將氨基功能化的SBA-15與HPtCl4以質量比1: 0.5 I混合併用水稀釋成溶液，將混合物在室溫下攪拌If 24 h，離心後用水重新稀釋，用稀HCl調節溶液的pH〈2，攪拌2(Γ25min，得到混合液；將4(Γ50 mmol-Γ1的NaBH4溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl4全部還原成金屬Pt，將混合液離心、真空乾燥，製得Pt雜化的SBA-15 (Pt@SBA_15)。(3)石墨烯(GS)溶液製備
將2mg GS溶解於ImL高純水中，超聲0.5^2 h，製成濃度為Ζπ^πιΓ1 GS溶液。(4) PtiSBA-15/ 二抗溶液的製備
取I 2 mg Pt@SBA-15分散在I mL的pH 7.4的PBS緩衝溶液中，加入0.5 1.5 mL、質量分數2.5%的戊二醛溶液，攪拌2 4 h;加入廣2 mL兩種環境雌激素二抗(Ab2)中的一種，將上述混合物在室溫下攪拌1(T12 h，離心，製得兩種Pt@SBA-15/Ab2溶液，置於4°C下儲存，備用；所述兩種環 境雌激素二抗的濃度為40(T50(^g/mL。(5)雙通道免疫傳感器的構建
I)取一片雙通道絲網印刷電極，超純水衝洗；分別取4飛PLdmg.!!!!/1 GS溶液，滴塗到雙通道絲網印刷電極的2個工作電極表面上，室溫晾乾。2)在I)中得到的2個工作電極的表面上分別滴加6 8μ 的1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀醯亞胺(EDC/NHS)混合溶液，保持溼潤、孵化f 2 h，超純水清洗，晾乾；所述EDC和NHS的濃度分別為4 mg/mL和lmg/mL ；
3)分別取Γ8 PL兩種環境雌激素一抗(Ab1),分別滴塗於2)得到的對應的兩個工作電極表面上，4°C條件下晾乾；所述的環境雌激素選自己烯雌酚和雌二醇，兩種環境雌激素一抗的濃度為5 10Pg/mL。4)分別取4飛PL、質量分數為0.5 1 %的BSA溶液，滴塗於3)得到兩個工作電極表面上，保持電極溼潤3 4 h，4°C下晾乾，超純水清洗、晾乾，製得一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器。以上所述的環境雌激素選自己烯雌酚和雌二醇
2.如上所述的製備的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器，用於己烯雌酚和雌二醇的同時檢測，步驟如下:
(I)將製得的免疫傳感器溫育在一系列濃度的兩種環境雌激素對應的抗原溶液中，放置I h，4 °C下晾乾，清洗電極。(2)滴塗6 PL、Pt@SBA_15/Ab2溶液到(I)得到的電極表面上，晾乾、清洗，製得組裝的工作電極，置於4 C冰箱中備用。(3)將參比電極、對電極和組裝的工作電極連接在電化學工作站上，在電解槽中加入40^60 μ 、5 10 mmol/L H2O2的pH=7.0 7.8的PBS緩衝溶液，用循環伏安和方波伏安法檢測傳感器的電流響應，根據所得電流響應與己烯雌酚和雌二醇的標準溶液濃度之間的關係，繪製工作曲線。(4)將待測樣品代替己烯雌酚和雌二醇的標準溶液，按照所述己烯雌酚和雌二醇工作曲線的繪製方法進行檢測。
所述一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器，所用原材料均可在化學試劑公司或生物製藥公司購買。本發明具備以下優勢:
(I)本發明快速、準確，可用於兩種環境雌激素的同時檢測。(2)本發明採用的Pt@SBA-15和石墨烯均可增強電化學信號，從而提高了傳感器的靈敏度。(3)本發明使用印刷電極，其製備簡單、成本低、便於攜帶、樣品消耗少，易於微型化和集成化，應用範圍廣。(4)本發明與其它的絲網印刷電極傳感器相比，可以一次性同時檢測兩種環境雌激素，顯著提高了檢測效率，同時具有良好的準確性和精密度。該免疫傳感器的研製對環境分析和食品安全分析具有重要的科學意義和應用價值。
具體實施例方式下面結合實施例進一步說明本發明。實施例中所述的環境雌激素選自己烯雌酚和雌二醇。實施例1納米功能材料製備 (I)氨基化SBA-15的合成
將I g三嵌段共聚物E020P070E020(P123)溶解在30 mL、1.5 ι οΙ.Γ1的HCl溶液中，加入2.215 g正矽酸乙酯(TE0S)，混合物在34°C下攪拌4h，轉移到高壓釜在100°C條件下加熱20 h，冷卻後過濾，將獲得的白色粉末在空氣中乾燥，然後在560°C條件下煅燒3 h除去模板，合成製得SBA-15 ;將所合成`的SBA-15，加IOmL無水乙醇，置於三口燒瓶中，油浴，加熱到70°C後，迅速加入50 μ 3-氨丙基三乙氧基矽烷，70°C恆溫回流3h，離心，用無水乙醇洗滌沉澱3次，室溫下真空乾燥9 h，得到氨基功能化的SBA-15。(2) Pt雜化的SBA-15的合成
將氨基功能化的SBA-15與HPtCl4以質量比1: 0.5混合併用水稀釋成溶液，將混合物在室溫下攪拌18 h，離心後用水重新稀釋，用稀HCl調節溶液的pH〈2，攪拌20 min，得到混合液；將40 mmol-Γ1的NaBH4溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl4全部還原成金屬Pt，將混合液離心、真空乾燥，製得Pt雜化的SBA-15 (Pt@SBA-15)。(3)石墨烯(GS)溶液製備
將2.0 mg GS溶解於ImL高純水中，超聲0.5 h，製成濃度為Zmg.mL—1 GS溶液。實施例2納米功能材料製備 (I)氨基化SBA-15的合成
將I g三嵌段共聚物E020P070E020(P123)溶解在30 mL、1.8 ι οΙ.Γ1的HCl溶液中，加入2.215 g正矽酸乙酯(TE0S)，混合物在34°C下攪拌4.5h，轉移到高壓釜在100°C條件下加熱21 h，冷卻後過濾，將獲得的白色粉末在空氣中乾燥，然後在560°C條件下煅燒3.5 h除去模板，合成製得SBA-15 ;將所合成的SBA-15，加入12 mL無水乙醇，置於100 mL三口燒瓶中，油浴，加熱到70°C後，迅速加入50 μ 3-氨丙基三乙氧基矽烷，70°C恆溫回流3h，離心，用無水乙醇洗滌沉澱3次，室溫下真空乾燥10 h，得到氨基功能化的SBA-15。(2) Pt雜化的SBA-15的合成將氨基功能化的SBA-15與HPtCl4以質量比1: 0.7混合併用水稀釋成溶液，將混合物在室溫下攪拌21h，離心後用水重新稀釋，用稀HCl調節溶液的pH〈2，攪拌22 min，得到混合液；將45 mmol-Γ1的NaBH4溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl4全部還原成金屬Pt，將混合液離心、真空乾燥，製得Pt雜化的SBA-15 (Pt@SBA-15)。(3)石墨烯(GS)溶液製備
將2mg GS溶解於ImL高純水中，超聲I h，製成濃度為2 mg-πιΓ1 GS溶液。實施例3納米功能材料製備 (1)氨基化SBA-15的合成
將I g三嵌段共聚物E020P070E020 (P123)溶解在30 mL、2 mol.L—1的HCl溶液中，加入2.215 g正矽酸乙酯(TE0S)，混合物在34°C下攪拌5 h，轉移到高壓釜在100°C條件下加熱22 h，冷卻後過濾，將獲得的白色粉末在空氣中乾燥，然後在560°C條件下煅燒4 h除去模板，合成製得SBA-15 ;將所合成的SBA-15，加入15 mL無水乙醇，置於100 mL三口燒瓶中，油浴，加熱到70°C後，迅速加入50 μ 3-氨丙基三乙氧基矽烷，70°C恆溫回流3h，離心，用無水乙醇洗滌沉澱3次，室溫下真空乾燥11 h，得到氨基功能化的SBA-15。(2) Pt雜化的SBA-15的合成
將氨基功能化的SBA-15與HPtCl4以質量比1:1混合併用水稀釋成溶液，將混合物在室溫下攪拌24 h，離心後用水重新稀釋，用稀HCl調節溶液的pH〈2，攪拌25 min，得到混合液；將50 mmol-Γ1的NaBH4溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl4全部還原成金屬Pt，將混合液離心、真空乾燥，製得Pt雜化的SBA-15 (Pt@SBA-15)。(3)石墨烯(GS)溶液製備
將2 mg GS溶解於ImL高純水中，超聲2 h，製成濃度為Zmg'mL—1 GS溶液。實施例4
PtOSBA-15/ 二抗溶液的製備
取I mg PtiSBA-15分散在I mL的pH 7.4的PBS緩衝溶液中，加入0.5 mL、2.5%的戊二醛溶液，攪拌2 h;加入I mL兩種環境雌激素二抗(Ab2)中的一種，將上述混合物在室溫下攪拌10h，離心，製得兩種Pt@SBA-15/Ab2溶液，置於4 C下儲存，備用；所述兩種環境雌激素二抗的濃度為40(^g/mL。實施例5 PtiSBA-15/ 二抗溶液的製備
取1.5mg PtiSBA-15分散在I mL的pH 7.4的PBS緩衝溶液中，加入1.0 mL、2.5%的戊二醛溶液，攪拌3 h ;加入1.5mL兩種環境雌激素二抗(Ab2)中的一種，將上述混合物在室溫下攪拌llh，離心，製得兩種Pt@SBA-15/Ab2溶液，置於4 C下儲存，備用；所述兩種環境雌激素二抗的濃度為450Pg/mL。實施例6 PtiSBA-15/ 二抗溶液的製備
取2 mg PtiSBA-15分散在I mL的pH 7.4的PBS緩衝溶液中，加入1.5 mL、2.5%的戊二醛溶液，攪拌4 h ;加入2.0 mL兩種環境雌激素二抗(Ab2)中的一種，將上述混合物在室溫下攪拌12 h，離心，製得兩種Pt@SBA-15/Ab2溶液，置於4 C下儲存，備用；所述兩種環境雌激素二抗的濃度為500Pg/mL。
實施例7
雙通道免疫傳感器的構建
(I)取一片雙通道絲網印刷電極，超純水衝洗；分別取4μ 、2 mg-πιΓ1 GS溶液，滴塗到雙通道絲網印刷電極的2個工作電極表面上，室溫晾乾。(2)在(I)中得到的2個工作電極的表面上分別滴加6μ 的1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀醯亞胺(EDC/NHS)混合溶液，保持溼潤、孵化I h，超純水清洗，晾乾；所述EDC和NHS的濃度分別為I mg/mL和lmg/mL ；
(3)分別取4 PL兩種環境雌激素一抗(Ab1),分別滴塗於(2)得到的對應的兩個工作電極表面上，4 °C條件下晾乾。(4)分別取4 PL，質量分數為0.8 %的BSA溶液，滴塗於(3)得到兩個工作電極表面上，保持電極溼潤3.5 h，4°C下晾乾，超純水清洗、晾乾，製得一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器。實施例8
雙通道免疫傳感器的構建
(I)取一片雙通道絲網印刷電極，超純水衝洗；分別取5μ 、2 mg-πιΓ1 GS溶液，滴塗到雙通道絲網印刷電極的2個工作電極表面上，室溫晾乾。(2)在(I)中得到的2個工作電極的表面上分別滴加7PL的1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀醯亞胺(EDC/NHS)混合溶液，保持溼潤、孵化1.5 h，超純水清洗，晾乾；所述 EDC和NHS的濃度分別為2 mg/mL和lmg/mL。(3)分別取6μ L兩種環境雌激素一抗(Ab1),分別滴塗於(2)得到的對應的兩個工作電極表面上，4 °C條件下晾乾。(4)分別取5 PL，質量分數為0.5%的BSA溶液，滴塗於(3)得到兩個工作電極表面上，保持電極溼潤3.5 h，4°C下晾乾，超純水清洗、晾乾，製得一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器。實施例9
雙通道免疫傳感器的構建
(I)取一片雙通道絲網印刷電極，超純水衝洗；分別取6 PLdmgmr1 GS溶液，滴塗到雙通道絲網印刷電極的2個工作電極表面上，室溫晾乾。(2)在(I)中得到的2個工作電極的表面上分別滴加8μ 的1_(3_ 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀醯亞胺(EDC/NHS)混合溶液，保持溼潤、孵化2 h，超純水清洗，晾乾；所述EDC和NHS的濃度分別為4 mg/mL和lmg/mL。(3)分別取8 PL兩種環境雌激素一抗(Ab1),分別滴塗於(2)得到的對應的兩個工作電極表面上，4 °C條件下晾乾。(4)分別取6 μ ，質量分數為I %的BSA溶液，滴塗於(3)得到兩個工作電極表面上，保持電極溼潤4 h，4°C下晾乾，超純水清洗、晾乾，製得一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器。實施例10
上述製備的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器，用於己烯雌酚和雌二醇的同時檢測，步驟如下:(I)將製得的免疫傳感器溫育在一系列濃度的兩種環境雌激素對應的抗原溶液中，放置I h，4°C下晾乾，清洗電極。(2)滴塗6 PL、Pt@SBA-15/Ab2溶液到(I)得到的電極表面上，晾乾、清洗，製得組裝的工作電極，置於4 C冰箱中備用。(3)將參比電極、對電極和組裝的工作電極連接在電化學工作站上，在電解槽中加入40μ 、5 mmol/L H2O2的pH=7.0的PBS緩衝溶液，用循環伏安和方波伏安法檢測傳感器的電流響應，根據所得電流響應與己烯雌酚和雌二醇的標準溶液濃度之間的關係，繪製工作曲線。(4)將待測樣品代替己烯雌酚和雌二醇的標準溶液，按照所述己烯雌酚和雌二醇工作曲線的繪製方法進行檢測。實施例11
上述製備的一種同時檢 測兩種環境雌激素的傳感器，用於己烯雌酚和雌二醇的同時檢測，步驟如下:
(I)將製得的免疫傳感器溫育在一系列濃度的兩種環境雌激素對應的抗原溶液中，放置I h，4 °C下晾乾，清洗電極。(2)滴塗6 PL、Pt@SBA_15/Ab2溶液到(I)得到的電極表面上，晾乾、清洗，製得組裝的工作電極，置於4°C冰箱中備用。(3)將參比電極、對電極和組裝的工作電極連接在電化學工作站上，在電解槽中加入50 μ 、7 mmol/L H2O2的pH=7.4的PBS緩衝溶液，用循環伏安和方波伏安法檢測傳感器的電流響應，根據所得電流響應與己烯雌酚和雌二醇的標準溶液濃度之間的關係，繪製工作曲線。(4)將待測樣品代替己烯雌酚和雌二醇的標準溶液，按照所述己烯雌酚和雌二醇工作曲線的繪製方法進行檢測。實施例12
上述製備的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器，用於己烯雌酚和雌二醇的同時檢測，步驟如下:
(I)將製得的免疫傳感器溫育在一系列濃度的兩種環境雌激素對應的抗原溶液中，放置I h，4 °C下晾乾，清洗電極。(2)滴塗6PL、PtiSBA-15/Ab2溶液到(I)得到的電極表面上，晾乾、清洗，製得組裝的工作電極，置於4 C冰箱中備用。(3)將參比電極、對電極和組裝的工作電極連接在電化學工作站上，在電解槽中加入60 μ 、10 mmol/L H2O2的pH=7.8的PBS緩衝溶液，用循環伏安和方波伏安法檢測傳感器的電流響應，根據所得電流響應與己烯雌酚和雌二醇的標準溶液濃度之間的關係，繪製工作曲線。(4)將待測樣品代替己烯雌酚和雌二醇的標準溶液，按照所述己烯雌酚和雌二醇工作曲線的繪製方法進行檢測。實施例1(Γ12用於兩種環境刺激素己烯雌酚和雌二醇的檢測，己烯雌酚的線性範圍0.001 10.0 ng-mr1，檢測限為0.28 pg-πιΓ1 ;雌二醇的線性範圍為0.005 8.0 ng-πι Λ檢測限為1.2 pg'mL—1。
權利要求
1.一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法，其特徵在於，包括以下步驟: (1)氨基化SBA-15的合成 將I g三嵌段共聚物E020P070E020 (P123)溶解在30 mL、1.5 2 mold HCl溶液中，加入2.215 g正矽酸乙酯(TEOS)，混合物在34°C下攪拌Γ5 h，轉移到高壓釜在100°C條件下加熱2(T22 h，冷卻後過濾，將獲得的白色粉末在空氣中乾燥，然後在560°C條件下煅燒3 4 h除去模板，合成製得SBA-15 ;將所合成的SBA-15，加l(Tl5mL無水乙醇，置於100 mL三口燒瓶中，油浴，加熱到70°C後，迅速加入50 μ L 3-氨丙基三乙氧基矽烷，70°C恆溫回流3h，離心，用無水乙醇洗滌沉澱3次，室溫下真空乾燥擴11 h，得到氨基功能化的SBA-15 ； (2)Pt雜化的SBA-15的合成 將氨基功能化的SBA-15與HPtCl4以質量比1: 0.5 I混合併用水稀釋成溶液，將混合物在室溫下攪拌If 24 h，離心後用水重新稀釋，用稀HCl調節溶液的pH〈2，攪拌2(Γ25min，得到混合液；將4(Γ50 mmol-Γ1的NaBH4溶液逐滴加入到所述的混合液中，直到所有的HPtCl4全部還原成金屬Pt，將混合液離心、真空乾燥，製得Pt雜化的SBA-15 (PtiSBA-15)； (3)石墨烯(GS)溶液製備 將2.0 mg GS溶解於ImL高純水中，超聲0.5^2 h，製成濃度為GS溶液； (4)PtOSBA-15/ 二抗溶液的製備 取I 2 mg Pt@SBA-15分散在I mL的pH 7.4的PBS緩衝溶液中，加入0.5 1.5 mL、質量分數為2.5%的戊二醛溶液，攪拌2 4 11;加入廣2 mL兩種環境雌激素二抗(Ab2)中的一種，將上述混合物在室溫下 攪拌1(T12 h，離心，製得兩種Pt@SBA-15/Ab2溶液，置於4 C下儲存，備用； (5)雙通道免疫傳感器的構建 I)取一片雙通道絲網印刷電極，超純水衝洗；分別取4飛PLdmg.!!!!/1 GS溶液，滴塗到雙通道絲網印刷電極的2個工作電極表面上，室溫晾乾； 2)在I)中得到的2個工作電極的表面上分別滴加的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀醯亞胺(EDC/NHS)混合溶液，保持溼潤、孵化f 2 h，超純水清洗，晾乾；所述EDC和NHS的濃度分別為4 mg/mL和lmg/mL ； 3)分別取Γ8PL兩種環境雌激素一抗(Ab1),分別滴塗於2)得到的對應的兩個工作電極表面上，4 °C條件下晾乾； 4)分別取Γ6PL、質量分數為0.5 1溶液，滴塗於3)得到兩個工作電極表面上，保持電極溼潤:Γ4 h，4 °C下晾乾，超純水清洗、晾乾，製得一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器。
2.如權利要求1所述的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法，所述的環境雌激素選自己烯雌酚和雌二醇。
3.如權利要求1所述的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法，(4)中所述兩種環境雌激素二抗的濃度為40(T50(^g/mL。
4.如權利要求1所述的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法，(5)中所述兩種環境雌激素一抗的濃度為5 l(^g/mL。
5.如權利要求1所述的製備的一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器，用於兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇的同時檢測，步驟如下: (1)將製得的免疫傳感器溫育在一系列濃度不同的己烯雌酚和雌二醇對應的抗原溶液中，放置I h，4 °C下晾乾，清洗電極； (2)滴塗6μ 、PtiSBA-15/Ab2溶液到(I)得到的電極表面上，晾乾、清洗，製得組裝的工作電極，置於4 C冰箱中備用； (3 )將參比電極、對電極和組裝的工作電極連接在電化學工作站上，在電解槽中加入40 60 μ 、5 10 mmol/L H2O2的pH=7.0 7.8的PBS緩衝溶液，用循環伏安和方波伏安法檢測傳感器的電流響應，根據所得電流響應與兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇的標準溶液濃度之間的關係，繪製工作曲線； (4)將待測樣品代替兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇的標準溶液，按照所述己烯雌酚和雌二醇工作曲線的繪製方 法進行檢測。
全文摘要
本發明提供了一種同時檢測兩種環境雌激素的傳感器的製備方法及應用，屬於納米功能材料、環境檢測、生物免疫技術和電化學分析領域。將Pt雜化的SBA-15納米複合材料標記二抗，通過測定材料對底液中過氧化氫的催化性能，製備一種雙通道印刷電極電化學免疫傳感器，實現對兩種環境雌激素己烯雌酚和雌二醇的同時檢測。本發明製備簡單、加工方便、便於攜帶；該檢測方法簡單、快速、靈敏度高、特異性好。
文檔編號G01N27/48GK103235144SQ20131013686
公開日2013年8月7日 申請日期2013年4月19日 優先權日2013年4月19日
發明者魏琴, 杜斌, 於海琴, 吳丹, 張勇, 毛珂霞, 李賀, 馬洪敏 申請人:濟南大學