一種精確鑑定長豐鯽的方法
2023-09-17 19:52:40 1
一種精確鑑定長豐鯽的方法
【專利摘要】本發明公開了一種精確鑑定長豐鯽的方法，通過比較鯽魚線粒體NADH4基因中110-866位點序列信息與鯉魚線粒體基因序列的相似度，或是通過流式細胞術鑑定染色體倍性，或是二者結合，可快速、精確區分長豐鯽與其他所有鯽魚種群。可以對於長豐鯽魚品種種質鑑定以及商業養殖中產生的糾紛提供準確的鑑定依據。
【專利說明】一種精確鑑定長豐鯽的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於鑑定魚類物種的生物【技術領域】，具體涉及一種精確鑑定長豐鯽的方 法。
【背景技術】
[0002] 銀鯽是我國水產養殖種的重要種類，生產上應用的有異育銀鯽、方正銀鯽、長豐鯽 以及眾多的銀鯽地方種。銀鯽在生產中種類較為混雜，各種養殖銀鯽形態學均符合國家銀 鯽標準（GB 16874-2006)，僅僅依靠形態學鑑別長豐鯽同其他鯽魚是無效的。因此發明精確 鑑別長豐鯽和各養殖種群的鑑別方法是必要的，可以較好的保護長豐鯽種質資源以及解決 農業生產上的各種商業糾紛。
[0003] 長豐鯽是中國水產科學研究院長江水產研究所自1991年從普通銀鯽中開 始進行系統選育。長豐鯽形態與銀鯽相同，主要形態構造特徵符合銀鯽國家標準（GB 16874-2006)。長豐鯽為通過人工選育的的新品種，具有明顯的生長優勢和抗病性，在生產 上應用較為廣泛，目前已在市場上廣泛流通。
[0004] 本發明專利提供了精確聯合兩種方案對長豐鯽進行鑑別的技術方案。本方法利用 長豐鯽獨特基因信息可以精確區分長豐鯽和其他鯽魚。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在於提供了一種精確鑑定長豐鯽的方法，該方法簡單，準確，可靠， 穩定性強，解決了長豐鯽和其他鯽魚無法精確區分的問題。
[0006] 為了達到上述目的，本發明採取以下技術措施：
[0007] -種精確鑑定長豐鯽的方法，為以下兩種方法之一或其結合：
[0008] 1)比較鯽魚線粒體NADH4基因中110-866位點序列信息與鯉魚線粒體基因序列的 相似度，相似度為99%或以上為長豐鯽，否則不是。
[0009] 2)利用流式細胞術進行鯽魚倍性鑑別，4倍體為長豐鯽，否則不是。
[0010] 以上所述的方法中，優選的，方法1)具體為：利用引物F :CCTCCTAATTGCCTCCATCA ; R :CCCATGTGACTTACGGATGA對鯽魚的線粒體NADH4基因進行擴增，與SEQ ID NO. 1所示序列 進行比對，序列相似度99%或以上則為長豐鯽。
[0011] 以上所述的方法，一種精確鑑定長豐鯽的方法，包括以下步驟：
[0012] 1)利用引物 F :CCTCCTAATTGCCTCCATCA ;R :CCCATGTGACTTACGGATGA 對鯽魚的線粒 體NADH4基因進行擴增，與SEQ ID NO. 1所示序列進行比，序列相似度99%或以上則為長豐 鯽，用於進一步的步驟2)的確認；
[0013] 2)進一步利用流式細胞術進行鯽魚倍性鑑別，4倍體為長豐鯽，否則不是。
[0014] 本發明提供的鑑別方法，方法可靠，利用基因信息鑑定穩定性強，可做為法律依 據。
[0015] 與現有技術相比，本發明具有以下優點：
[0016] 本發明首次針對長豐鯽養殖品種，發明了一種準確對長豐鯽和其他鯽魚的鑑定技 術，彌補了形態學鑑別的不足，為長豐鯽品種保護與解決養殖種的商業糾紛提供了參考。
[0017] 目前生產上所有的養殖銀鯽均為2倍體或者3倍體。經研究發現長豐鯽為4倍體， 不同於目前生產上所有的養殖種，利用流式細胞術可以進行初步鑑別。同時在我們對長豐 鯽線粒體基因組測序後發現，長豐鯽線粒體NADH4基因中110-866位點連續757個鹼基序 列為鯉魚線粒體基因信息，而其他鯽魚在此位點均為鯽魚基因信息序列差異達到12%。該 位點的鯉魚基因組信息為長豐鯽獨特的基因信息，利用該基因信息，可以精確區分長豐鯽 與其他所有鯽魚種群。可以對於長豐鯽魚品種種質鑑定以及商業養殖中產生的糾紛提供準 確的鑑定依據。
[0018] 本發明的方法，可準確將長豐鯽與市面上已有的異育銀鯽、方正銀鯽、滁州鯽以及 眾多的銀鯽地方種。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019] 圖1為實施例2中雞血DNA血紅細胞相對含量示意圖。
[0020] 圖中所示峰值為200。
[0021] 圖2為實施例2中異育銀鯽血紅細胞DNA相對含量示意圖。
[0022] 圖中所示峰值為300。
[0023] 圖3為實施例2中長豐鯽血紅細胞DNA相對含量示意圖。
[0024] 圖中所示峰值為400。
【具體實施方式】
[0025] 本發明所述技術方案，如未特別說明，均為本領域的常規技術。本發明實施例1-3 利用了 50條長豐鯽和50條異育銀鯽中科3號的混合群體，以測定本發明所述技術方案的 準確性。實施例1 :
[0026] -種精確鑑定長豐鯽的方法，包括以下步驟：
[0027] 長豐鯽線粒體NADH4基因鑑定：
[0028] (1)使用TIANGEN基因組DNA提取試劑盒提取長豐鯽DNA，進行PCR反應：
[0029] 引物為：F:CCTCCTAATTGCCTCCATCA;R:CCCATGTGACTTACGGATGA。
[0030] PCR反應體系
[0031]
【權利要求】
1. 一種精確鑑定長豐鯽的方法，為以下兩種方法之一： 1) 比較鯽魚線粒體NADH4基因中110-866位點序列信息與鯉魚線粒體基因序列的相似 度，相似度為99%或以上為長豐鯽，否則不是； 2) 利用流式細胞術進行鯽魚倍性鑑別，4倍體為長豐鯽，否則不是。
2. 根據權利要求1所述的方法，包括以下步驟： 1) 利用引物 F :CCTCCTAATTGCCTCCATCA ;R :CCCATGTGACTTACGGATGA 對鯽魚的線粒體 NADH4基因進行擴增，與SEQ ID NO. 1所示序列進行比，序列相似度99%或以上則為長豐鯽， 用於進一步的步驟2)的確認； 2) 進一步利用流式細胞術進行鯽魚倍性鑑別，4倍體為長豐鯽，否則不是。
【文檔編號】C12Q1/68GK104450921SQ201410770622
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月12日 優先權日:2014年12月12日
【發明者】李忠, 梁宏偉, 鄒桂偉, 羅相忠 申請人:中國水產科學研究院長江水產研究所