一種檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法

2023-09-09 22:28:55 1

專利名稱：一種檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法
技術領域：
本發明屬於分析化學領域，涉及常見胺基酸的液相色譜檢測方法，具體涉及一種檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法及用途。
背景技術：
已知胺基酸(Amino acid)為含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱，其示生物功能大分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質。現有技術公開了氨基連在α-碳上的為α-胺基酸；天然胺基酸均為α-胺基酸。其中，常見的20種L-α-胺基酸包括(I)精氨酸，(2)天冬醯胺，(3)穀氨醯胺，(4)絲氨酸，(5)天冬氨酸，
(6)穀氨酸，(7)蘇氨酸，(8)甘氨酸，(9)丙氨酸，(10)脯氨酸，(11)甲硫氨酸，(12)纈氨酸，(13)苯丙氨酸，(14)色氨酸，(15)異亮氨酸，(16)亮氨酸，(17)組氨酸，(18)半胱氨酸，(19)賴氨酸，(20)酪氨酸，它們的結構通式為
權利要求
1.一種檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法，其特徵在於，其包括步驟將待測樣品經過樣品預處理後，加入反應溶劑及衍生化試劑進行衍生化反應，然後採用高效液相色譜法測定20種常見胺基酸衍生物的濃度，確定胺基酸的含量。
2.按權利要求I所述的檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法，其特徵在於，所述的反應試劑為不含有活潑胺基的有機溶劑，選自乙腈、甲醇、丙酮、四氫呋喃、甲苯、苯或乙醚。
3.按權利要求I所述的檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法，其特徵在於，所述的樣品預處理是，取適量待測中性水溶液樣品，加入乙腈稀釋或沉澱蛋白。
4.按權利要求I所述的檢測多種常見胺基酸的液相色譜方 法，其特徵在於，所述的樣品選自植物天然提取物、藥品、保健食品或飼料；或血漿、尿液、腦脊液、生物組織材料。
5.按權利要求I所述的檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法，其特徵在於，按下述步驟測定動植物天然提取物、藥品、保健食品或飼料中20種常見胺基酸濃度 定量分取動植物天然提取物樣品，加入定量的反應試劑混勻，再加入硼酸鹽緩衝液及過量的衍生化試劑進行反應，渦旋混勻，放置一段時間後，用液相色譜法測定胺基酸衍生物的濃度； 所述的衍生化試劑為9-氯甲酸芴甲酯，其分子式為FMOC-C1，結構式如通式(I )，
6.按權利要求I所述的檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法，其特徵在於，按下述步驟測定血漿、尿液、腦脊液、生物組織材料中20種常見胺基酸濃度， 定量稱取待測樣品，加入定量的蛋白沉澱試劑，渦旋混勻，高速離心，取上清液，加入硼酸鹽緩衝液及過量的衍生化試劑反應，渦旋混勻，放置一段時間後，用液相色譜法測定胺基酸衍生物的濃度； 所述的蛋白沉澱試劑選自乙腈或者甲醇； 所述的高效液相色譜法，是採用紫外檢測器測定20種常見胺基酸衍生物的峰面積，用標準曲線校正方程換算成胺基酸的濃度；其中，液相色譜柱採用通用型，填料選自十八烷基鍵合相矽膠或辛烷基鍵合相矽膠；流動相由乙腈和50 mM pH值為4. 15的乙酸鈉緩衝液組成，梯度洗脫，檢測波長為UV 263nm。
7.按權利要求5或6的方法，其特徵在於，所述的20種常見胺基酸的線性範圍為O.17 98. 40 μ g/mL。
8.按權利要求5或6的方法，其特徵在於，所述的20種常見胺基酸的最低檢測限為O.05 O. 13 μ g/mL，其中，進樣量為20 μ L0
9.權利要求I的檢測多種常見胺基酸的液相色譜方法在測定中藥板藍根中胺基酸濃度中的用途。
全文摘要
本發明屬分析化學領域，涉及一種檢測常見胺基酸的液相色譜方法以及其在中藥板藍根中的應用。本發明是將待測樣品經過樣品預處理後，加入反應溶劑及衍生化試劑進行衍生化反應，然後採用高效液相色譜法測定20種常見胺基酸的濃度。本發明的方法採用通用型的液相色譜柱和紫外檢測器對胺基酸進行高效液相色譜測定，並能排除其他物質對胺基酸的幹擾。本發明可用於動植物天然提取物、藥品、保健食品、飼料以及血漿、尿液、腦脊液、生物組織等生物材料中胺基酸濃度的定量測定，且也可準確測定中藥板藍根中胺基酸的含量。
文檔編號G01N30/06GK102621250SQ20111003284
公開日2012年8月1日 申請日期2011年1月30日 優先權日2011年1月30日
發明者周威, 段更利 申請人:復旦大學