中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法

2023-09-14 20:08:35 2

專利名稱：：中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法
技術領域：
：本發明涉及利用化學指示劑對非生物材料的檢測，尤其涉及二氫吡啶類降壓化合物的檢測方法。
背景技術：
：降壓西藥根據其藥理不同大致可分為五大類，利尿劑、e受體阻滯劑、鈣拮抗劑(ccB)、血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素II受體拮抗劑(ARB)。長期過量服用降壓西藥會帶來嚴重的副作用，如口唇麻木、頭痛、消化道出血、肝功能下降甚至喪失、誘發或使糖尿病惡化。一些不法廠商在巨大的經濟利益引誘下，利用消費者急於治療的心理和中藥無毒副作用的認識誤區，在中草藥降壓產品(包括中草藥製成的中成藥、保健品和食品)中大量摻雜國家法律法規明令禁止的化學降壓藥以增強其降壓效果。患者在不知情的情況下大量服用，嚴重危害了廣大消費者的健康。二氫吡啶類降壓化合物中以摻雜硝苯地平、尼莫地平和尼群地平最為常見。硝苯地平，其起效劑量為10mg，化學名稱為2，6-二甲基-4(2-硝基苯基)-1，4二氫-3，5-吡啶二甲酸二甲酯，該化合物為黃色結晶性粉末，無臭，無味，遇光不穩定，在丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中略溶，在水中幾乎不溶。2005年版《中國藥典》上記載的該化合物的化學鑑別方法為取本品約25mg，加丙酮lml溶解，加20%氫氧化鈉溶液3-5滴，振搖，溶液顯橙紅色。尼群地平，其起效劑量為10mg，化學名稱為2，6-二甲基-4(3-硝基苯基)_1，4二氫-3，5-吡啶二甲酸-甲乙酯，該化合物為黃色結晶或結晶性粉末，無臭，無味，遇光易變質，在丙酮或三氯甲烷中易溶，在甲醇或乙醇中略溶，在水中幾乎不溶。2005年版《中國藥典》上記載的該化合物的化學鑑別方法為取本品約50mg，加丙酮lml，加20%氫氧化鈉試液3-5滴，溶液顯橙紅色。尼莫地平，其起效劑量為10mg，化學名稱為2，6-二甲基-4(3-硝基苯基)-1，4二氫-3，5-吡啶二甲酸-2甲氧乙基-(l-甲乙基)酉旨，該化合物為黃色結晶性粉末或粉末，無臭，無味，遇光不穩定，在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中略溶，在乙醚中微溶，在水中幾乎不溶。2005年版《中國藥典》上記載的該化合物的化學鑑別方法為取本品約20mg，加乙醇2ml溶解後，加新制的5%硫酸亞鐵銨溶液2ml，1.5mol/L的硫酸溶液1滴與0.5mol/L的氫氧化鉀溶液lml，強烈振搖，1分鐘內沉澱由灰綠色變成紅棕色。藥典中硝苯地平和尼群地平的鑑別方法選用丙酮作為溶劑，而氫氧化鈉和氫氧化鉀在丙酮溶液中容易析出，按照藥典上記載的鑑別方法進行實驗，無法得到其描述的實驗結果。而藥典中尼莫地平的鑑別方法選用乙醇作為溶劑，眾所周知，氫氧化鈉和氫氧化鉀可溶於乙醇，但硝苯地平、尼群地平和尼莫地平在乙醇中幾乎不溶，因此，簡單的溶劑替換(乙醇替換丙酮)也無法檢測硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。另一方面，即使藥物純度高達90%以上(藥典中記載的鑑別方法所使用的純度)，其在20%的氫氧化鈉-水溶液中反應所呈現的顏色也很淺，更何況中草藥產品中的硝苯地平、尼群地平和尼莫地平含量較低(10%以下)，其在20%的氫氧化鈉-水溶液中反應更加不靈敏，顏色變化更加不明顯，加上中草藥降壓產品的提取液一般帶有較深的顏色(棕黃色)，反應的顏色的變化往往被覆蓋，無法判斷檢測結果。再者，20%的氫氧化鈉-水溶液為高濃度強鹼性溶液，具有強腐蝕性，儲藏和使用極其不方便。因此，使用藥典中記載的鑑別方法不適合用於檢測中草藥降壓產品中是否摻雜硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。
發明內容本發明所要解決的技術問題是提供一種中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法。本發明所要解決的技術問題還在於提供一種實施中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法的專用試劑盒。本發明的技術方案是這樣的-一種中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法，該快篩方法由以下步驟組成(1)取樣品，破碎，加入相當於樣品質量5-10倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解，過濾，保留濾液；'(2)取lml步驟(l)所得的濾液，滴加3-5滴質量濃度為2%-3%的氫氧化鉀-乙醇溶液，搖勻，觀察顏色變化；若溶液變成紅棕色，則表明樣品中摻雜有二氫吡啶類降壓化合物；所述的二氫吡啶類降壓化合物為硝苯地平、尼群地平和尼莫地平中的一種或兩種以上。本發明上述技術方案中，滴加氫氧化鉀-乙醇後溶液顏色的深淺與樣品中所摻雜的二氫吡啶類降壓化合物的量有關，所摻雜的二氫吡啶類降壓化合物越多，溶液顏色越深。為了方便地實施本發明方法，本發明還提供所述方法的專用試劑盒，該試劑盒包括試劑A:體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為2%-3%的氫氧化鉀-乙醇溶液。本發明所述的試劑盒還包括至少一個濾頭、至少一支帶刻度的注射器和至少一個帶塞樣品瓶。本發明所述的方法選用體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液作為溶劑，既使得硝苯地平、尼群地平和尼莫地平能夠完全溶解，又使得氫氧化鉀不析出，確保了反應的順利進行，並提高了反應的靈敏度；選用2%3%的氫氧化鉀-乙醇溶液作為指示劑避免了使用具有強腐蝕性的高濃度鹼溶液，並進一步提高了反應的靈敏度，使得顏色變化更加明顯，有助於檢測結果的判斷。與現有的檢測方法相比，本發明具有以下優點1、成本低廉。與高效液相色譜、薄層層析等方法相比，本發明方法具有成本低廉的特點，適合大批量藥物的篩查和檢驗，具有較高的推廣和應用價值。2、操作簡單。本發明方法的操作極其簡單，都是本領域最簡單最基本的操作，無需專業的技術人員進行專門的操作。3、檢測時間短。本發明方法的檢測時間非常短，完成檢測的全過程只需5分鐘。本發明的有益效果由以下實驗證明。實驗一溶劑的選擇研究1、試劑(1)丙酮;(2)乙醇；(3)體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；(4)質量濃度為20%的氫氧化鈉-水溶液；(5)質量濃度為20%的氫氧化鉀-水溶液；(6)質量濃度為2%的氫氧化鈉_乙醇溶液(7)質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液。2、實驗儀器樣品瓶、試管、滴管、濾頭和注射器。3、樣品硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。4、實驗方法5(1)取丙酮3管，每管lml,第一管加入100mg(起效劑量的IO倍)硝苯地平，第二管加入100mg尼群地平，第三管加入100mg尼莫地平，各振搖l分鐘，靜置；分別以乙醇和體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液替換丙酮重複上述實驗；(2)取丙酮4管，每管lml，第一管滴加4滴質量濃度為20%的氫氧化鈉-水溶液，第二管滴加4滴質量濃度為20%的氫氧化鉀-水溶液，第三管滴加4滴質量濃度為2%的氫氧化鈉-乙醇溶液，第四管滴加4滴質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液，各振搖1分鐘，靜置；分別以乙醇和體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液替換丙酮重複上述實驗。tableseeoriginaldocumentpage6由表1可知，硝苯地平、尼群地平和尼莫地平在乙醇中幾乎不溶；由表2可知，氫氧化鈉和氫氧化鉀在丙酮中容易析出，因此，乙醇和丙酮都不適宜作為溶劑用於這三種藥物的檢測方法中。而體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液既使得硝苯地平、尼群地平和尼莫地平能夠完全溶解(參見表l),又可以使得氫氧化鈉和氫氧化鉀不析出(參見表2),滿足作為溶劑的要求。實驗二指示劑對檢測結果的影響1、試劑(1)體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；(2)質量濃度為20%、30%、35°/。、40%的氫氧化鈉-水溶液；(3)質量濃度為20%、30%、35%、40%的氫氧化鉀_水溶液；(4)質量濃度為1%、2%、3°/。、4%的氫氧化鈉-乙醇溶液；(5)質量濃度為1°/。、2%、3%、4%的氫氧化鉀-乙醇溶液。'2、實驗儀器試管、滴管、濾頭和注射器。3、樣品樣品1:取清腦降壓片4片，破碎，加入相當於清腦降壓片質量6倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；振搖使其溶解，靜置，過濾，保留濾液；樣品2:取腦立清膠囊4粒，其內容物摻入2mg硝苯地平、2mg尼群地平和lmg尼莫地平，加入相當於腦立清膠囊、硝苯地平、尼群地平和尼莫地平總質量6倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；振搖使其溶解，靜置，過濾，保留濾液；樣品3:取複方丹參片4片，破碎，摻入5mg硝苯地平，加入相當於複方丹參片和硝苯地平總質量6倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；振搖使其溶解，靜置，過濾，保留濾液；樣品4:取複方丹參片4片，破碎，摻入5mg尼群地平，加入相當於複方丹參片和尼群地平總質量6倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；振搖使其溶解，靜置，過濾，保留濾液；樣品5:取清腦降壓片4片，破碎，摻入5mg尼莫地平，加入相當於清腦降壓片和尼莫地平總質量6倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；振搖使其溶解，靜置，過濾，保留濾液；樣品6:取腦立清膠囊4粒，其內容物摻入lmg硝苯地平和lmg尼莫地平，加入相當於腦立清膠囊、硝苯地平和尼莫地平總質量6倍的體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；振搖使其溶解，靜置，過濾，保留濾液。4、實驗方法(1)取樣品1的濾液4管，每管lml，第一管滴加3滴質量濃度為2(m的氫氧化鈉-水溶液，第二管滴加3滴質量濃度為30%的氫氧化鈉-水溶液，第三管滴加3滴質量濃度為35%的氫氧化鈉-水溶液，第四管滴加3滴質量濃度為4(W的氫氧化鈉-水溶液，搖勻，觀察顏色變化；其他各樣品分別代替樣品1重複上述實驗；(2)取樣品1的濾液4管，每管lml，第一管滴加3滴質量濃度為10%的氫氧化鉀-水溶液，第二管滴加3滴質量濃度為20%的氫氧化鉀-水溶液，第三管滴加3滴質量濃度為30%的氫氧化鉀-水溶液，第四管滴加3滴質量濃度為35%的氫氧化鉀-水溶液，搖勻，觀察顏色變化；其他各樣品分別代替樣品1重複上述實驗；(3)取樣品1的濾液4管，每管lml，第一管滴加3滴質量濃度為1%的氫氧化鈉-乙醇溶液，第二管滴加3滴質量濃度為2%的氫氧化鈉-乙醇溶液，第三管滴加3滴質量濃度為3%的氫氧化鈉乙醇溶液，第四管滴加3滴質量濃度為4%的氫氧化鈉_乙醇溶液，搖勻，觀察顏色變化；其他各樣品分別代替樣品1重複上述實驗；(4)取樣品1的濾液4管，每管lml，第一管滴加3滴質量濃度為1%的氫氧化鉀_乙醇溶液，第二管滴加3滴質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液，第三管滴加3滴質量濃度為3%的氫氧化鉀-乙醇溶液，第四管滴加3滴質量濃度為4%的氫氧化鉀-乙醇溶液，搖勻，觀察顏色變化；其他各樣品分別代替樣品1重複上述實驗。表3-1不同濃度的氫氧化鈉-水溶液對檢測結果的影響tableseeoriginaldocumentpage8表3-2不同濃度的氫氧化鉀-水溶液對檢測結果的影響tableseeoriginaldocumentpage8表3-3不同濃度的氫氧化鈉-乙醇溶液對檢測結果的影響tableseeoriginaldocumentpage8表3-4不同濃度的氫氧化鉀-乙醇溶液對檢測結果的影響tableseeoriginaldocumentpage9注表3-1至3-4中，表示顏色變化度，兩個"+"以上表示肉眼可區分，表示無顏色變化。表3-1和表3-2表明，當硝苯地平、尼群地平和尼莫地平含量較少、溶液背景色較深時，即使在氫氧化鈉-水溶液和氫氧化鉀-水溶液的質量濃度高達40%的條件下，也不能觀察到溶液的顏色變化。表3-3中，將指示劑替換為氫氧化鈉-乙醇溶液，當其質量濃度為1%-4%時不能觀察到溶液顏色變化；而表3-4中，將指示劑替換為氫氧化鉀-乙醇溶液後，由於氫氧化鉀的鹼性較氫氧化鈉強，同時受到溶劑效應(乙醇)的影響，當滴加的氫氧化鉀-乙醇溶液質量濃度>2%時，即可觀察到溶液的顏色變化，適用於檢測中草藥降壓產品中是否摻雜硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。實驗三:靈敏度研究1、實驗試劑和儀器實施例l中的檢測試劑盒2、樣品樣品l:稱取lmg(起效劑量的10分之一)硝苯地平，加入lml體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解；樣品2:稱取lmg(起效劑量的IO分之一)尼群地平，加入lml體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解；樣品3:稱取lmg(起效劑量的10分之一)尼莫地平，加入lml體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解；樣品4:稱取0.5mg尼群地平和0.5mg硝苯地平(總量不超出各藥物起效劑量的10分之一)，加入lml體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解；樣品5:稱取0.3mg尼莫地平、0.4mg尼群地平和0.3mg硝苯地平(總量不超出各藥物起效劑量的10分之一)，加入lml體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解；3、實驗方法往各樣品中滴加3-5滴質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液，觀察顏色變化。表4靈敏度研究tableseeoriginaldocumentpage10由表4可知，在各藥物含量為其起效劑量的IO分之一時，本發明的方法亦可將其檢測出來，因此，本發明適用於檢測中草藥降壓產品中是否摻雜硝苯地平、尼群地平和尼莫地平。具體實施方式下面結合實施例對本發明作進一步說明。實施例1檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液；該試劑盒還包括10個5ml的帶塞樣品瓶、10個濾頭和10支帶刻度的注射器。取清腦降壓片l片，破碎，加入相當於清腦降壓片質量5倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾，濾液呈淺棕黃色，取lml濾液，滴加5滴試劑B，搖勻，溶液沒有顏色變化，該結果與實際相符。實施例2檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為3%的氫氧化鉀_乙醇溶液；該試劑盒還包括20個5ml的帶塞樣品瓶、20個濾頭和20支帶刻度的注射器。取複方丹參片l片，破碎，加入相當於複方丹參片質量6倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾，濾液呈淺棕黃色，取lml濾液，滴加3滴試劑B，搖勻，溶液沒有顏色變化，該結果與實際相符。.實施例3檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液；該試劑盒還包括1個5ml的帶塞樣品瓶、1個濾頭和1支帶刻度的注射器。取腦立清膠囊1粒內容物，摻入lmg的硝苯地平，加入相當於腦立清膠囊和硝苯地平總質量7倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾；取lml濾液，滴加4滴試劑B，搖勻，溶液由淺黃色變成紅棕色，該結果與實際相符。實施例4檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為3%的氫氧化鉀-乙醇溶液；該試劑盒還包括5個5ml的帶塞樣品瓶、5個濾頭和5支帶刻度的注射器。取正天丸3粒，破碎，摻入5mg的尼群地平，加入相當於正天丸和尼群地平總質量8倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾；取lml濾液，滴加3滴試劑B，搖勻，溶液由淺棕黃色變成紅棕色，該結果與實際相符。實施例5檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液；該試劑盒還包括10個5ml的帶塞樣品瓶、10個濾頭和10支帶刻度的注射器。取益腦膠囊l粒，其內容物慘入5mg的尼莫地平，加入相當於益腦膠囊和尼莫地平總質量9倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾；取lml濾液，滴加5滴試劑B，搖勻，溶液由淺黃色變成紅棕色，該結果與實際相符。實施例6檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；11頭和3支帶刻度的注射器。取複方丹參片l片，破碎，摻入3mg的硝苯地平和6mg的尼群地平，加入相當於複方丹參片、硝苯地平和尼群地平總質量10倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾；取lml濾液，滴加3滴試劑B，搖勻，溶液由淺黃色變成紅棕色，該結果與實際相符。實施例7檢測試劑盒的組成為試劑A:體積比為5:l的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為2%的氫氧化鉀-乙醇溶液；該試劑盒還包括8個5ml的帶塞樣品瓶、8個濾頭和8支帶刻度的注射器。取清熱消炎寧膠囊1粒，其內容物摻入3mg的硝苯地平、7mg的尼莫地平和6mg的尼群地平，加入相當於清熱消炎寧膠囊、硝苯地平、尼莫地平和尼群地平總質量8倍的試劑A，振搖使其溶解，過濾；取lml濾液，滴加4滴試劑B，搖勻，溶液由淺黃色變成紅棕色，該結果與實際相符。權利要求1、一種中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法，該快篩方法由以下步驟組成(1)取樣品，破碎，加入相當於樣品質量5-10倍的體積比為5∶1的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解，過濾，保留濾液；(2)取1ml步驟(1)所得的濾液，滴加3-5滴質量濃度為2％-3％的氫氧化鉀-乙醇溶液，搖勻，觀察顏色變化；若溶液變成紅棕色，則表明樣品中摻雜有二氫吡啶類降壓化合物；所述的二氫吡啶類降壓化合物為硝苯地平、尼群地平和尼莫地平中的一種或兩種以上。2、一種實施權利要求1所述快篩方法的專用試劑盒，該試劑盒包括試劑A:體積比為5:1的丙酮-乙醇溶液；試劑B:質量濃度為2%-3%的氫氧化鉀-乙醇溶液。3、根據權利要求2所述的專用試劑盒，其特徵在於所述的試劑盒還包括至少一個濾頭、至少一支帶刻度的注射器和至少一個帶塞樣品瓶。全文摘要本發明涉及中草藥降壓產品中摻雜二氫吡啶類降壓化合物的快篩方法，該快篩方法由以下步驟組成(1)取樣品，破碎，加入相當於樣品質量5-10倍的體積比為5∶1的丙酮-乙醇溶液，振搖使其溶解，過濾，保留濾液；(2)取1ml步驟(1)所得的濾液，滴加3-5滴質量濃度為2％-3％的氫氧化鉀-乙醇溶液，搖勻，觀察顏色變化；若溶液變成紅棕色，則表明樣品中摻雜有二氫吡啶類降壓化合物；所述的二氫吡啶類降壓化合物為硝苯地平、尼群地平和尼莫地平中的一種或兩種以上。本發明還公開了實施上述方法的專用試劑盒，該試劑盒包括體積比為5∶1的丙酮-乙醇溶液和質量濃度為2％-3％的氫氧化鉀-乙醇溶液。本發明的快篩方法具有快速、成本低廉、操作簡單等特點。文檔編號G01N21/77GK101666757SQ20091019268公開日2010年3月10日申請日期2009年9月25日優先權日2009年9月25日發明者李泳雪,肖樹雄,莫結麗,賈宜軍申請人:廣東省藥品檢驗所