黃芪的應用的製作方法

2023-09-19 22:58:00

專利名稱：黃芪的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及黃芪的用途。
背景技術：
黃芪為豆科植物黃芪Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge的乾燥根，該植物主要分布於我國東北、華北和西北等地區，黃芪屬植物的化學成分主要為單糖、多糖、皂甙、黃酮、胺基酸和微量元素等；具有增強免疫力、抗疲勞、抗突變、保肝、抑制破骨細胞的作用，能對抗氫化可的松的免疫抑制作用，並能增強巨噬細胞的吞噬功能，促進抗體合成；具有解毒作用，能加強正常心臟收縮，對衰竭的心臟有強心作用，能使冠狀血管和腎臟血管擴張，並使全身末梢血管擴張。內毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導系統性炎症反應綜合症的主要啟動因子；它本身並不造成機體的嚴重損害，主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯繫、相互影響，造成病變的發展。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應中起著重要作用；利用內毒素誘導體外培養的人單核/巨噬細胞分泌白介素等炎症因子，通過考察黃芪對人單核/巨噬細胞(THP-I)炎症因子表達的影響，同時藉助炎症因子抗體晶片檢測黃芪對人單核/巨噬細胞分泌的炎症因子表達的影響，可探討黃芪抗炎作用的機制。

發明內容
本發明旨在將黃芪應用於製備內毒素誘導的炎症因子調節劑。具體為，將黃芪應用於製備內毒素誘導的炎症因子調節劑，尤其是製備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1 β ；以及製備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應中起著重要作用。內毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導系統性炎症反應綜合症的主要啟動因子。LPS本身並不造成機體的嚴重損害，它主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯繫、相互影響，使病變得以發展。以LPS作為造模藥物，通過構建人單核/巨噬細胞炎症模型，考察黃芪抗炎作用的機制。結果顯示，黃芪可顯著抑制內毒素誘導單核細胞分泌白介素_6(IL-6)的活性，對內毒素誘導單核細胞分泌白介素-1 β (IL-Ιβ)的活性也有一定的抑制作用，同時，對金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白(TIMP-幻表達也有一定的促進作用。這一結果是對黃芪增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明黃芪的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。


圖1為實施例2中，空白對照組、LBS組和LBS+黃芪組的人炎症抗體因子晶片實驗的檢測結果
圖2為IL-6and IL-I β表達量的炎症抗體檢測結果圖3為ΤΙΜΡ-2表達量的炎症抗體檢測結果
具體實施例方式藥品與試劑1、黃芪(自製)，將黃芪藥材分別經水回流提取，濃縮，80%乙醇沉澱，製得棕褐色粉末；2、RPMI 1640培養液、高滅活胎牛血清、青、鏈黴素均購自美國Gibco公司；3、苯甲基磺醯氟(PMSF)、蛋白酶抑制劑均購自美國Sigma公司；細菌內毒素(LPS) 由SIGMA公司生產，大腸桿菌055 :B5，批號:56H4096 ；4、磷酸鹽緩衝溶液(PBS)自配；細胞培養用水為新鮮三蒸水；其它所用試劑均為分析純；5、人炎症因子抗體晶片I購自RayBio公司。細胞培養人單核/巨噬細胞(Human acute monocytic leukemia cells，THP-1)購自中科院上海生化細胞所細胞庫。採用RPMI 1640培養液(加入10%牛血清，100U雙抗，)，在37°C， 5% CO2條件下培養。實施例1 LPS介導實驗分組為空白對照組(無LPS)、LPS組和LPS+黃芪組。Control組加入空白培養液，LPS組終末質量濃度為lOOng/ml，LPS+黃芪組LPS和黃芪的終末濃度分別為lOOng/ml 和lmg/ml。調單核細胞密度為1 X IO6個/孔，LPS+黃芪組分別先加入黃芪，15min後再加入LPS。各組在37°C，5% CO2條件下培養18h，收集上清液保存待測。實施例2人炎症抗體因子晶片實驗根據抗體晶片試劑盒說明，在25°C條件下將晶片膜用2ml封閉緩衝液孵化lh，移去封閉緩衝液，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑 II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min，棄去多餘液體。分別加Iml實施例1所製備的各組上清液於膜的蛋白面，室溫孵化1 2h。傾去樣品液，用洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用細1洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。取出膜，裝入新孔中，將血管生成抗體液用封閉緩衝液稀釋至適當濃度加入孔中。 室溫下孵育池後，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。同上方法準備辣根過氧化物酶稀釋液並與膜接觸，室溫下孵育Ih後，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。經化學發光，顯影，定影。將膠片用凝膠圖象處理系統分析目地斑點的淨光密度值，計算蛋白表達量。所有數據均以均數士標準差 士s)表示，採用SPSS 13. 0統計軟體進行統計分析，組間均數比較用t檢驗，多個樣本均數比較用單因素方差分析。炎症因子抗體晶片實驗發現，與LPS組相比，lmg/ml黃芪+LPS組中IL-I β、IL_6 的表達被顯著抑制(P < 0. 01)，如表1、圖2所示；但對IL-8的表達無明顯影響，結果表明
4黃芪能顯著抑制LPS誘導的人單核/巨噬細胞IL-I β、IL-6表達。
表 權利要求
1.黃芪在製備內毒素誘導的炎症因子調節劑方面的應用。
2.黃芪在製備白介素抑制劑方面的應用。
3.權利要求2所述黃芪在製備白介素抑制劑方面的應用，其特徵在於，所述的白介素為白介素-6。
4.權利要求2所述黃芪在製備白介素抑制劑方面的應用，其特徵在於，所述的白介素為白介素。
5.黃芪在製備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑方面的應用。
全文摘要
本發明涉及了黃芪的應用。選用內毒素作為造模藥物，構建人單核/巨噬細胞炎症模型，考察黃芪抗炎作用的機制，結果顯示，可將黃芪應用於製備內毒素誘導的炎症因子調節劑，尤其是製備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1β；還有製備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。這一結果是對黃芪增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明黃芪的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。
文檔編號A61K36/481GK102210740SQ20101013870
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月2日 優先權日2010年4月2日
發明者尚鵬, 裴明 申請人:上海市七寶中學