板藍根的應用的製作方法

2023-09-19 22:53:40 3

專利名稱：板藍根的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及板藍根的用途。
背景技術：
板藍根(radixisatidis)為十字花科植物菘藍(Isatis indigotica Fort.)的乾燥根，是中國傳統中藥，歷代本草均有記載。其藥性寒味苦，具有清熱解毒、涼血消斑的功效，臨床廣泛用於抗菌、抗病毒、抗血小板聚集、抗內毒素，能夠增強機體的免疫功能。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應中起著重要作用。內毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導系統性炎症反應綜合症的主要啟動因子。LPS本身並不造成機體的嚴重損害，它主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯繫、相互影響，使病變得以發展。若能利用內毒素誘導體外培養的人單核/巨噬細胞分泌白介素等炎症因子，通過考察板藍根對人單核/巨噬細胞(THP-I)炎症因子表達的影響，同時藉助炎症因子抗體晶片檢測板藍根對人單核/巨噬細胞分泌的炎症因子表達的影響，可探討板藍根抗炎作用的機制。

發明內容
本發明旨在提供板藍根在製備內毒素誘導的炎症因子調節劑方面的應用。具體為，將板藍根應用於製備內毒素誘導的炎症因子調節劑，尤其是製備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1 β ；還有製備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。單核/巨噬細胞是一種多功能免疫細胞，在機體的特異性免疫反應中起著重要作用。內毒素(LPS)是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成部分，是介導系統性炎症反應綜合症的主要啟動因子。LPS本身並不造成機體的嚴重損害，它主要通過促使巨噬細胞等釋放大量的細胞因子，這些因子通過自分泌、旁分泌相互聯繫、相互影響，使病變得以發展。本發明選用LPS作為造模藥物，通過構建人單核/巨噬細胞炎症模型，考察板藍根抗炎作用的機制。結果顯示，板藍根可顯著抑制內毒素誘導單核細胞分泌白介素_6(IL-6) 的活性，對內毒素誘導單核細胞分泌白介素-1 β (IL-Ιβ)的活性也有一定的抑制作用，同時，對金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白(ΤΙΜΡ-2)表達也有一定的促進作用。這一結果是對板藍根增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明板藍根的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。


圖1為實施例2中，空白對照組、LBS組和LBS+板藍根組的人炎症抗體因子晶片實驗的檢測結果圖2為IL-6 and IL-I β表達量的炎症抗體檢測結果
圖3為TIMP-2表達量的炎症抗體檢測結果
具體實施例方式藥品與試劑1、板藍根(自製)，將板藍根藥材分別經水回流提取，濃縮，80%乙醇沉澱，製得棕褐色粉末；2、RPMI 1640培養液、高滅活胎牛血清、青、鏈黴素均購自美國Gibco公司；3、苯甲基磺醯氟(PMSF)、蛋白酶抑制劑均購自美國Sigma公司；細菌內毒素(LPS) 由SIGMA公司生產，大腸桿菌055 :B5，批號:56H4096 ；4、磷酸鹽緩衝溶液(PBS)自配；細胞培養用水為新鮮三蒸水；其它所用試劑均為分析純；5、人炎症因子抗體晶片I購自RayBio公司。細胞培養人單核/巨噬細胞(Human acute monocytic leukemia cells，THP-1)購自中科院上海生化細胞所細胞庫。採用RPMI 1640培養液(加入10%牛血清，100U雙抗，)，在37°C， 5% CO2條件下培養。實施例1 LPS介導實驗分組為空白對照組(無LPS)、LPS組、和LPS+板藍根組。Control組加入空白培養液，LPS組終末質量濃度為lOOng/ml，LPS+板藍根組LPS和板藍根的終末濃度分別為 100ng/ml和lmg/ml。調單核細胞密度為1 X IO6個/孔，LPS+板藍根組先加入板藍根，15min 後再加入LPS。各組在37°C，5% CO2條件下培養18h，收集上清液保存待測。實施例2人炎症抗體因子晶片實驗根據抗體晶片試劑盒說明，在25°C條件下將晶片膜用2ml封閉緩衝液孵化lh，移去封閉緩衝液，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑 II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min，棄去多餘液體。分別加Iml實施例1所製備的各組上清液於膜的蛋白面，室溫孵化1 2h。傾去樣品液，用洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用細1洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。取出膜，裝入新孔中，將血管生成抗體液用封閉緩衝液稀釋至適當濃度加入孔中。 室溫下孵育池後，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。同上方法準備辣根過氧化物酶稀釋液並與膜接觸，室溫下孵育Ih後，用2ml洗片試劑I在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。用2ml洗片試劑II在室溫下脫色搖床上洗三次，每次5min。經化學發光，顯影，定影。將膠片用凝膠圖象處理系統分析目地斑點的淨光密度值，計算蛋白表達量。所有數據均以均數士標準差 士s)表示，採用SPSS 13. 0統計軟體進行統計分析，組間均數比較用t檢驗，多個樣本均數比較用單因素方差分析。實驗結果表明同空白對照組相比，LPS可以誘導人單核/巨噬細胞分泌IL-I β、 IL-6和IL-8上調。實驗結果見圖1。炎症因子抗體晶片實驗發現，lmg/ml板藍根+LPS組與LPS組相比，IL-6的表達被顯著抑制(P < 0. 01)，對IL-I β的表達也有一定的抑制作用(P < 0. 05)，如表1、圖1和圖 2 ；但對IL-8的表達無明顯影響。結果表明板藍根可顯著抑制內毒素誘導單核細胞分泌白介素-6的活性，對內毒素誘導單核細胞分泌白介素-1 β的活性也有一定的抑制作用。表 權利要求
1.板藍根在製備內毒素誘導的炎症因子調節劑方面的應用。
2.板藍根在製備白介素抑制劑方面的應用。
3.權利要求2所述板藍根在製備白介素抑制劑方面的應用，其特徵在於，所述的白介素為白介素-6。
4.權利要求2所述板藍根在製備白介素抑制劑方面的應用，其特徵在於，所述的白介素為白介素_1β。
5.板藍根在製備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑方面的應用。
全文摘要
本發明涉及了板藍根的應用。選用內毒素作為造模藥物，構建人單核/巨噬細胞炎症模型，考察板藍根抗炎作用的機制，結果顯示，可將板藍根應用於製備內毒素誘導的炎症因子調節劑，尤其是製備白介素抑制劑，白介素包括白介素-6和白介素-1β；還有製備金屬蛋白酶組織抑制劑-2蛋白表達的促進劑。這一結果是對板藍根增強人體免疫力研究的重要補充，為闡明板藍根的抗炎作用機制提供了可能的研究靶點。
文檔編號A61P29/00GK102210727SQ20101013870
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月2日 優先權日2010年4月2日
發明者尚鵬, 裴明 申請人:上海市七寶中學