用於篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板病診斷試劑和治療藥物的製備方法
2023-09-21 07:37:20 2
專利名稱：用於篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板病診斷試劑和治療藥物的製備方法
技術領域：
本發明為一種篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板診斷試劑和治療藥物的製備方法。
血栓、冠心病和心肌梗塞等疾病成為發達國家死亡率最高病種，該類疾病與血小板聚集密切相關。血小板活化素是研究、診斷和治療該類疾病重要工具，成為國際熱點。現有的一些誘導劑僅能特異通過該試劑途徑誘導聚集，如ADP(環氧化酶途徑)、花生四稀酸AA(TXB2途徑)、血小板活化因子PAF(磷酯酶相關途徑)。其途徑較為單一。
本發明的目的就是要提供一種多途徑誘導血小板聚集的篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板診斷試劑和治療藥物的製備方法。
本發明的內容是這樣的，一種用於篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板病診斷試劑和治療藥物的製備方法，其特徵在於應用分子量為68000，由兩種亞基組成，亞基分子量分別為12000和13000，等電點5.2,N末端為門冬氨酸(ASP)，無酶活性，由562個胺基酸殘基組成的糖蛋白，部份結構為α鏈DFDCIPGWSAYDRYCYQAFSEPKNWEDAβ鏈GFCCPLGWSSYDEHCYQVFQQKMNWEDA的烙鐵頭蛇毒血小板活化素TMVA。
其中烙鐵頭蛇毒血小板活化素TMVA的製備方法可用1，基因克隆方法，採用合成探針→在烙鐵頭cDNA庫中調基因→測序→轉入大腸桿菌、酵母菌或其它真核細胞中表達→復活→測序→測活性→純化凍幹封安瓿。
或用2，柱沉析分離純化法，採用粗毒→去雜質(800轉/分鐘離心)→DEAE-A50柱層析→收集相關峰合併→低溫濃縮→Sepeadex-G100凝膠過濾→冰凍乾燥→Resouce離子交換層析→凍幹封安瓿。
本發明的效果是這樣的，由於該方法為應用烙鐵頭蛇毒血小板活化素-TMVA，即可通過環氧化酶途徑、TXB2途徑誘導血小板聚集，在上述途徑阻斷後又可通過PAF相似途徑誘導血小板聚集，是多途徑聚集誘導劑，能測定各條不同途徑功能。綜合評價篩選各條途徑抑制藥物。體內注射30分鐘後可將血小板數降至原有20％以下，呈量效關係，24小時內各條活化途徑功能喪失，但不破壞血小板，僅將其扣留在血小板池、大網膜和血管壁上，8小時開始恢復，24小時接近正常，這樣能使體內不再形成栓塞，優於國內外現有的一切抑制血小板功能藥物。數據如下1、TMVA用於冠心病診斷血小板功能活性82例，結果表明急性心肌梗塞型21例，在發病時，TMVA誘導的血小板聚集％顯著高於其它非心肌梗塞型患者(包括心絞痛型、心律紊亂、肺心病、高脂血病等)，兩者相比p＜0.01，進一步研究TMVA可能在冠心病動態監護及急性心肌梗塞的診斷方面發揮重要作用，而優於ADP。心絞痛患者12例研究結果表明，在發病時TMVA誘導聚集明顯增高，發病後降低。10例肺心病和其它高血脂、高血壓、心律紊亂等患者43例，血小板功能正常或大部偏低。在與ADP、AA、腎上腺素等比較中TMVA很少受藥物幹擾，能較好反應血小板真正功能，提供診斷和治療數據。
2、13例風溼心臟病研究結果發現，血小板計數正常，但TMVA誘導的聚集功能顯著增高，13例風溼患者血小板計數高於風心病，但聚集率均低於正常，進一步研究有可能在風心病病因研究方面具有一定份值。
3、連續觀察到幾例患者在病情緩解和惡化時期血小板功能不同，TMVA突然增高或降低，與病情惡化密切相關，如病情逐步緩解，血小板功能亦穩定恢復正常，進一步證明這一結果將可能使TMVA在評價白血病病程和療效中起到重要作用。白血病血小板功能測定
4、腫瘤患者血小板我們測定36例各種腫瘤病人血小板功能，結果表明腫瘤轉移與血小板密切相關，這點與國外在動物和臨床中報導是相同的，進一步研究可能對該類患者合理治療有較大意義。
5、TMVA在血小板功能缺陷性疾病和出血性病人應用我們測定60例各種血小板功能缺陷性疾病患者和出血病人，結果證明TMVA與其它進口ADP、瑞士抗黴素等同樣可以用於該類病人診斷，同時應用不同誘導途徑血小板聚集劑有可能對該類患者鑑別診斷和治療具有一定意義。
實施例一種用於篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板病診斷試劑和治療藥物的製備方法，其特徵在於應用分子量為68000，由兩種亞基組成，亞基分子量分別為12000和13000，等電點5.2，N末端為門冬氨酸(ASP)，無酶活性，由562個胺基酸殘基組成的糖蛋白，部份結構為α鏈DFDCIPGWSAYDRYCYQAFSEPKNWEDAβ鏈GFCCPLGWSSYDEHCYQVFQQKMNWEDA的烙鐵頭蛇毒血小板活化素TMVA。
權利要求
1.一種用於篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板病診斷試劑和治療藥物的製備方法，其特徵在於應用分子量為68000，由兩種亞基組成，亞基分子量分別為12000和13000，等電點5.2,N末端為門冬氨酸(ASP)，無酶活性，由562個胺基酸殘基組成的糖蛋白，部份結構為α鏈DFDCIPGWSAYDRYCYQAFSEPKNWEDAβ鏈GFCCPLGWSSYDEHCYQVFQQKMNWEDA的烙鐵頭蛇毒血小板活化素TMVA。
全文摘要
本發明為一種用於篩選評價血小板活化藥物篩選模型和血小板病診斷試劑和治療藥物的製備方法,其特徵在於應用烙鐵頭蛇毒血小板活化素TMVA。綜合評價篩選各條途徑抑制藥物。體內注射30分鐘後可將血小板數降至原有20%以下,24小時內各條活化途徑功能喪失,但不破壞血小板,僅將其扣留在血小板池、大網膜和血管壁上,8小時開始恢復,24小時接近正常,這樣能使體內不再形成栓塞,優於國內外現有的一切抑制血小板功能藥物。
文檔編號A61K38/17GK1305108SQ0013206
公開日2001年7月25日 申請日期2000年12月8日 優先權日2000年12月8日
發明者熊鬱良, 王婉瑜, 魏琴 申請人:中國科學院昆明動物研究所