用Luminol作為底物催化HRP發光的免疫層析方法及其檢測試紙條的製作方法
2023-09-21 00:05:40 1
專利名稱：用Luminol作為底物催化HRP發光的免疫層析方法及其檢測試紙條的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種免疫檢測方法，特點是一種經免疫層析後在層析膜特定的區域形成抗原—抗體複合物區帶，以含有Luminol(5』-氨基-2，3-二氫-1，4-酞嗪二酮)的溶液催化免疫複合物區帶上的HRP發光，並用X線膠片自顯影或光吸收儀器檢測。
免疫層析法作為免疫分析技術是用於抗原、半抗原和抗體檢測的常用方法，膠體金檢測試紙條就是最常見的一種，有許多專利對其進行了描述，現已有各種檢測試劑盒面市，該類試劑是以膠體金作為指示劑，具有操作簡單、快速和無需儀器檢測的優點，目前已廣泛用於樣品的初篩，但該實驗結果是用肉眼判讀，解析度不高，實驗系統無信號放大的缺點，因此檢測的靈敏度較低，難以進行定量檢測，而且目測判讀的結果使檢測結果不易客觀記錄和保存。
本發明的目的是在免疫層析技術的基礎上，使用Luminol催化免疫複合物上的HRP長時間發光，用X線膠片自顯影對光信號進行累積或採用光吸收儀器對光信號進行再次放大，以提高檢測的靈敏度。
實施例HbsAg檢測(1)以一定量HbsAg單克隆抗體帶狀物理吸附在層析膜，用2％BSA封閉2小時。
(2)層析膜裝配樣品墊和吸水墊。
(3)Ing的HbsAg標準品1∶100倍稀釋加入樣品墊。
(4)HBsAg單克隆抗體HRP結合物加入樣品墊。
(5)含Luminol的溶液加入樣品墊。
(6)取層析膜對X線膠片暴光6小時。
(7)X線膠片顯影定影后有明顯光帶。
權利要求
1用Luminol作為底物催化HRP發光的免疫層析方法及其檢測試紙條具有以下特徵(1)用於捕捉的抗原或抗體，通過物理方式吸附在層析膜上。(2)用於檢測的抗原或抗體以HRP標記。(3)在樣品墊處加入樣品液和被標記的抗原或抗體，經毛細擴散作用，在層析膜上形成免疫複合物檢測帶。(4)加入含有Luminol的溶液，促使免疫複合物檢測帶上的HRP發光。(5)用X線膠片自顯影或配合光吸收儀器檢測層析膜。
2如權利要求1所述，用Luminol作為底物催化HRP發光用於免疫層析方法及其檢測試紙條。
3如權利要求1所述，Luminol作為底物催化HRP發光的免疫層析方法及其檢測試紙條用於抗體IgM、IgA和IgE的檢測。
4如權利要求1所述，Luminol作為底物催化HRP發光的免疫層析方法及其檢測試紙條用於抗原和半抗原的檢測。
5如權利要求1所述，Luminol作為底物催化層析膜上免疫複合物HRP發光用X線膠片自顯影或配合光吸收儀器檢測。
全文摘要
本發明涉及一種免疫檢測方法，特點是一種經免疫層析後在層析膜特定的區域形成抗原－抗體複合物區帶，以含有Luminol的溶液催化免疫複合物區帶上的辣根過氧化物酶(HRP)發光，用X線膠片自顯影或光吸收儀器判讀實驗結果，以提高免疫層析法檢測的靈敏度，可進行定性或定量分析。用於抗原、半抗原和抗體的檢測。
文檔編號G01N23/223GK101042398SQ20061003447
公開日2007年9月26日 申請日期2006年3月22日 優先權日2006年3月22日
發明者李川江, 周榮, 黃茜華 申請人:廣州華銀醫藥科技有限公司