補骨脂素在製備抗輻射藥物中的應用的製作方法

2023-08-13 10:14:56

本發明涉及抗輻射醫藥技術領域，特別是涉及補骨脂素在製備抗輻射藥物中的應用。

背景技術：

當今社會，隨著國民經濟的飛速發展和科學技術的不斷提高，輻射在各個領域得到廣泛的應用，如核能與核技術在農業、醫療衛生和科學研究等領域都得到了廣泛的應用。因而輻射與人們的日常工作和生活關係也越來越密切。但輻射在廣泛應用的同時也帶來了一系列不容忽視的危害，如：核電輻射、醫療領域的x光射線以及核事故等。

癌症是當今醫療領域的一大難題，2014年世界衛生組織在《世界癌症報告》中指出，未來20年，每年的新發癌症病例將達到2200萬例。放射治療在腫瘤治療中佔據著非常重要的地位，在我國，每年約有70％的腫瘤患者接受放射治療。但放射治療選擇性弱，放射線在照射腫瘤細胞的同時也會對正常組織造成損傷，甚至是嚴重的毒副作用。臨床上，常因正常組織耐受劑量的限制導致治療的失敗，從而嚴重影響腫瘤病人的治療效果。因此，研究和開發毒性低、藥效高的抗輻射藥物是醫藥工作者亟需解決的問題。

補骨脂素是從中藥補骨脂(psoraleacorylifolial.)中發現的一種香豆素類天然產物，無色針狀結晶(乙醇)，熔點189～190℃，溶於乙醇、氯仿，微溶於水、乙醚和石油醚。具有光敏和抗癌等作用。本發明涉及的是補骨脂素及其含有它的藥物組合物在抗輻射中應用。

技術實現要素：

發明人通過對補骨脂素的研究，意外的發現補骨脂素能夠修復因受輻射而損傷的細胞，具有抗輻射作用；並基於此完成了本發明。

本發明首先提供了補骨脂素在製備抗輻射藥物中的應用，其中補骨脂素的結構式如下：

可選的，補骨脂素通過修復輻射損傷的細胞實現抗輻射。

可選的，所述藥物給予有需要的對象的每日劑量以補骨脂素計為0.01-1000mg/kg體重，優選為0.1-100mg/kg體重，更優選為1-100mg/kg體重，再優選為20mg/kg體重。

可選的，所述補骨脂素是以補骨脂素單體的形式提供的，或者是以包含補骨脂素的植物提取物的形式提供的。

可選的，所述補骨脂素是以包含補骨脂素的補骨脂提取物的形式提供的。需要說明的是，補骨脂提取物的提取方式現有技術中多有報導，本文在此不進行贅述，本領域技術人員可以通過現有的任意方式獲取補骨脂提取物。

本發明還提供了一種抗輻射藥物組合物，其包含補骨脂素和藥學上可接受的載體或賦形劑。

可選的，基於所述藥物組合物的總重量，所述補骨脂素的含量為1-99％，優選為20-80％，更優選為40-60％。

可選的，所述藥學上可接受的載體或賦形劑選自溶劑、稀釋劑、分散劑、助懸劑、表面活性劑、等滲劑、增稠劑、乳化劑、防腐劑、粘合劑、潤滑劑、穩定劑、水合劑、乳化加速劑、緩衝劑、吸收劑、著色劑、香味劑、甜味劑、離子交換劑、脫模劑、塗布劑、矯味劑、和抗氧化劑。

可選的，所述藥物組合物配製為散劑、片劑、膠囊劑、丸劑、滴丸劑、注射劑、乳劑、混懸劑或酊劑中的任意一種劑型。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學領域的常規方法製備。

本發明還提供了一種抗輻射藥物組合物，其含有包含補骨脂素的植物提取物和藥學上可接受的載體或賦形劑。可選的，植物提取物為補骨脂提取物。

本文中，「藥學上可接受的」表示當以通常用藥劑量使用時沒有實質的毒性作用，從而可被政府或與其相當的國際組織批准或者已被批准用於動物，更特別地用於人，或者被登錄在藥典上。

本發明藥物組合物中可用的「藥學上可接受的載體或賦形劑」可以是藥物製劑領域中任何常規的載體，特定載體的選擇將取決於用於治療特定患者的給藥方式或疾病類型和狀態。用於特定給藥模式的合適藥物組合物的製備方法完全在藥物領域技術人員的知識範圍內。

如本文使用的，術語「藥物組合物」具有其一般含義。此外，本發明的「藥物組合物」還可以以保健品、功能性食品、食品、食品添加劑等形式存在或提供。可採用製藥領域特別是製劑領域中的常規技術，通過藥品生產中常用的提取分離純化手段得到本發明的藥物組合物的原料的有效成分，任選地與一種或更多種藥學可接受的載體或賦形劑混合，然後形成所需的劑型，來製備本發明的藥物組合物。根據本發明的藥物組合物，其為可以適用於口服給藥、胃腸外給藥或局部給藥、外用給藥的藥物製劑，尤其適用於口服給藥。用於口服施用的劑型可包括例如片劑、丸劑、硬或軟膠囊劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、散劑、粉劑、細粒劑、顆粒劑、小丸劑、酏劑等，並不限於此。除了活性成分外，這些製劑還可包含稀釋劑(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素和甘氨酸)、潤滑劑(例如二氧化矽、滑石、硬脂酸或其鎂鹽、鈣鹽和聚乙二醇)。片劑還可包含粘合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和聚乙烯吡咯烷。必要時，其還可包含藥用添加劑，例如崩解劑(如澱粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽)、吸收劑、著色劑、香味劑、甜味劑等。片劑可根據常用的混合、造粒或包衣的方法製備。

綜上，補骨脂素能夠修復因受輻射而損傷的細胞，具有抗輻射作用，可以用於製備抗輻射藥物。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為補骨脂素對hbl-100細胞的毒性作用(與對照組比，**p<0.01，***p<0.001)。

圖2為補骨脂素對mcf-7細胞的毒性作用(與對照組比，***p<0.001)。

圖3為補骨脂素對hbl-100細胞的輻射防護作用(與對照組比，***p<0.001)。

圖4為補骨脂素對mcf-7細胞的輻射防護作用。

圖5為補骨脂素對受輻射小鼠生存期的影響。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

實施例1提取補骨脂素及其表徵

補骨脂素的分離：中藥補骨脂藥材(15kg)，乾燥，粉碎，加入10倍量的70％乙醇滲漉提取，每次提取24-36h，共提取3次，合併提取液，減壓濃縮至流浸膏，取約150g樣品與適量100-200目矽膠拌樣，經矽膠柱層析石油醚-乙酸乙酯洗脫，得到9:1及8:2洗脫部分，將8:2洗脫部分經石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，在100:20部分洗脫部分得到餾分餾分3，該餾分通過矽膠柱色譜繼續分離純化，得到化合物補骨脂素21.3g。

補骨脂素的表徵：白色針晶(甲醇)，矽膠gf254檢視，在紫外光(365nm)照射下顯較強的藍色螢光，提示該化合物可能為香豆素類化合物。esi-msm/z:187.31[m+h]+。其1h-nmr,13c-nmr見表1.

表1.1h-nmr,13c-nmr補骨脂素的核磁共振譜數據(δinppm,jinhz)

實施例2補骨脂素的體外細胞毒性實驗

2.1細胞培養

hbl-100細胞(atcc)在rpmi-1640培養基(含10％胎牛血清，100u/ml青黴素和0.1mg/ml鏈黴素)中，mcf-7細胞(atcc)在dmem/highgluose培養基(含10％胎牛血清，100u/ml青黴素和0.1mg/ml鏈黴素)中，於37℃,5％co2，飽和溼度的培養箱中培養，當細胞貼壁生長至密度達到70～80％時，按1/2的比例傳代，傳代時用0.25％的胰蛋白酶於培養箱中消化1～2min，取對數生長期狀態良好的細胞進行實驗。

2.2細胞毒性實驗

用cck-8法測試受試藥物(補骨脂素)對hbl-100、mcf-7細胞存活率的影響。

(1)細胞接種：取對數生長期狀態良好的細胞，經0.25％的胰蛋白酶消化後配製成細胞懸液，以7×103個/孔，100μl的細胞懸液均勻地接種於96孔板中(實驗孔周邊以無菌pbs填充)，於培養箱中培養。

(2)藥物處理：接種12h待細胞貼壁後，取出96孔板，分別加入100μl含相應濃度的補骨脂素(6.25、12.5、25、50、100μmol/l)溶液(均以含有10％胎牛血清的培養基配製)，於培養箱中繼續培養。

藥物處理方案：實驗分為實驗組(含有細胞的培養基、藥物，照射)；對照組(含有細胞的培養基，照射)；空白組(含有細胞的培養基，未照射)。

(3)顯色：加藥處理48h後，向每孔加入100μl含有10％cck-8的培基溶液，於培養箱中孵育3h。

(4)檢測：使用酶標儀于波長450nm處測od值。

(5)計算：細胞存活率＝(od實驗組-od空白組)/(od對照組-od空白組)×100％。

2.3實驗結果

補骨脂素的體外細胞毒性實驗結果如圖1及圖2所示；從圖1及圖2中可以看出，補骨脂素在100μmol/l濃度下，對mcf-7具有弱的細胞毒活性，對hbl-100未顯示有細胞毒活性。

實施例3補骨脂素的細胞抗輻射實驗

3.1細胞抗輻射實驗

在實施例2下2.2確定補骨脂素組與對照組細胞存活率不呈顯著性差異條件下，分別選擇100μmol/l、50μmol/l測試其對hbl-100、mcf-7細胞的輻射損傷修復作用。實驗分為空白組(不輻照、不給藥)、對照組(輻照、不給藥)、和補骨脂素組(即實驗組，輻照、給藥)。

取實施例2下2.1所培養的對數生長期狀態良好的細胞，經0.25％胰蛋白酶消化後配製成細胞懸液，以7×103個/孔，100μl的細胞懸液均勻地接種於96孔板中(實驗孔周邊以無菌pbs填充)；於培養箱中培養12h後，取出96孔板，分別加入100μl不同濃度的藥物溶液(均以含有10％胎牛血清的培養基配製)；於培養箱中繼續培養24h後，對照組和實驗組同時給予137csγ射線一次性照射，輻射劑量率為1.00gy/min，總照射劑量為8gy；照射24h後，以cck-8法顯色；3h後於酶標儀波長450nm處測od值。細胞存活率計算方法同實施例2中的2.2。

3.2數據處理

使用graphpadprism5軟體對數據進行作圖分析，實驗組同對照組間數據比較進行顯著性差異檢驗，p<0.05認為差異有統計學意義。

3.3實驗結果

補骨脂素的細胞抗輻射實驗結果如圖3及圖4所示；從圖3及圖4中可以看出，補骨脂素分別在100μmol/l、50μmol/l濃度下對hbl-100、mcf-7細胞的輻射損傷具有修復作用。

實施例4補骨脂素的體內抗輻射實驗

小鼠(品系：c57bl/6)適應性餵養7天後，隨機分為6組，空白組除了灌胃生理鹽水以外，不作任何處理；模型組小鼠被灌胃生理鹽水並接受輻射；實驗組(補骨脂素組)分為3組，分別是補骨脂素低劑量組(10mg/kg/d)、補骨脂素中劑量組(20mg/kg/d)、補骨脂素高劑量組(60mg/kg/d)；陽性藥對照組靜脈注射60mg/kg氨磷汀，給藥後立即照射，給藥一次，照射後不再給藥。動物隨機分組，每組10隻，照射前4h給藥一次，採用7.2gy單次全身照射，照射後立即補充給藥一次，之後，每24h給藥一次，連續給藥7天，記錄小鼠30天的存活情況，結果表明補骨脂素中劑量組對小鼠輻射具有較好的保護作用，見圖5。

以上對本發明所提供的補骨脂素在製備抗輻射藥物中的應用進行了詳細介紹。本文中應用了具體實施例對本發明的原理及實施方式進行了闡述，以上實施例的說明只是用於幫助理解本發明的方法及其中心思想。應當指出，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護。