擬人參皂苷元在製備抗血小板聚集藥物中的應用的製作方法

2023-08-13 09:21:56

專利名稱：：擬人參皂苷元在製備抗血小板聚集藥物中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及擬人參皂苷元的新用途，更具體地說涉及該化合物在製備抗血小板聚集藥物中的應用。
背景技術：
：血小板的基本生理功能是黏附、聚集、釋放和分泌顆粒內容物(如ADP、5-羥色胺)，靜息狀態的血小板轉變為生理功能狀態即為血小板的活化。血小板活化後能提供磷脂表面，促進血液凝固的進行，形成由纖維蛋白包繞血小板組成的血栓。因此血小板作為血液的一種有形成分，在生理的A血和病理的血栓形成過程中，扮演了非常重要的角色。臨床研究表明，臨床上常見的心腦血管疾病如高血壓、心絞痛、心肌梗塞、腦梗塞及腦出血等疾病，均與血小板功能變化和血液流變學異常有關。抗血小板藥物能夠抗血小板粘附性和聚集性，防止血栓形成，有助於防止動脈粥樣硬化和心肌梗塞。常用的抗血小板藥物有①阿司匹林抑制TXA2的生成，較少影響PGl2的產生而起作用。但長期應用，阿司匹林有可能引起胃炎或胃出血，所以應用時應定期檢査大便潛血。②潘生丁環核苷磷酸二酯酶抑制藥，抑制腺苷進入血小板，使血小板內環磷酸腺苷增高，抑制血小板的聚集。潘生丁小劑量無效，大劑量時10%病人可能引起頭痛、頭暈、低血壓，甚至虛脫等副作用，故應與阿司匹林合用減少劑量，防止副作用發生。③噻氯匹定和氯吡格雷選擇性地抑制二磷酸腺苷(ADP)與它的血小板受體的結合及繼發的ADP介導的糖蛋白GPIIb/IIIa複合物的活化，因此可抑制血小板聚集。但應用此類藥物同時可出現消化系統症狀如噁心、嘔吐、腹瀉等以及血液系統症狀如出血、血小板減少等。PGE^BPGI2:兩藥具有強烈抑制血小板凝集和擴張血管作用，但由於二者生物活性較多，故其不良反應亦較多.主要有發燒、頭暈、噁心、頭痛、嘔吐和注射時肢體有疼痛、腫脹、發紅、瘙癢等。擬人參皂苷元(Ocotillol)是由擬人參皂苷F(從西洋參中分離提取的四環三萜類人參二醇型皂苷)轉化得到的苷元。已經有文獻報導了擬人參皂苷元具有解毒、促智、治療老年性痴呆的作用，在中國專利CN200410023510.7中公開了擬人參皂苷元的製備方法。綜上所述，目前常用的抗血小板藥都有較重的不良反應，因此開發研製新型有效、不良反應小的治療或預防血小板聚集的藥物已經刻不容緩。本發明人通過實驗研究，發現擬人參皂苷元具有抗血小板聚集的作用。formulaseeoriginaldocumentpage4擬人參皂苷元結構式
發明內容本發明提供了擬人參皂苷元(Ocotillol)或其鹽在製備抗血小板聚集藥物中的應用。其中所說的鹽是指其藥學上可以接受的鹽。本發明所述的擬人參皂苷元在製備抗血小板聚集藥物中的應用，其使用劑量範圍為7mg400mg/天，優選7mg110mg/天。本發明所述的擬人參皂苷元可以按如下所述的方法製備，具體方法如下式(I)11=糖基首先從西洋參、西洋參莖葉、越南人參、越南人參莖葉等人參屬植物中獲得的富含擬人參皂苷元為母核的結構通式如式(I)所示的人參皂苷，如含有擬人參皂苷Fu、擬人參皂苷-RT4、珠子參苷(majonoside)-R,、珠子參苷(majonoside)-R2或它們的混和物。加入由鹼金屬氫氧化物與低級醇類組成的溶液中，鹼濃度一般為0.2%60%，優選濃度為520%，在高壓或常壓下加熱進行鹼降解，徹底水解掉人參皂苷式(1)6位上的糖鏈，從而獲得富含擬人參皂苷元的降解產物，反應液傾入冷水，攪拌，析出固體，用水洗至中性，過濾。得到擬人參皂苷元粗品，經矽膠柱色譜分離。洗脫劑由底劑和極性調節劑組成。底劑可以是石油醚、氯仿、正己垸、環己烷、正戊烷中的一種或幾中，極性調節劑可以是乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、丙酮、乙醚、含有l-4個碳原子的一元醇中的一種或幾種。由擬人參皂苷元粗品經重結晶得精製擬人參皂苷元。重結晶溶劑可以是乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙酮以及它們組成的混合劑。經矽膠柱層析或重結晶，從而獲得擬人參皂苷元單體。本發明中使用的擬人參皂苷元可以單獨使用或以藥物組合物形式使用。本發明還提供了含有擬人參皂苷元或其鹽、用於治療和預防血小板聚集作用的藥物組合物。藥物組合物包括作為活性成分的擬人參皂苷元及藥用載體。該藥物組合物可以通過口服、舌下、經皮、經肌肉或靜脈途徑給藥，以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、糖漿、口嚼劑、貼劑或口服液的形式存在。本發明所提供的各種藥物劑型均可以以藥學常規方法製備而成。本發明以阿司匹林和氯吡格雷作為陽性藥，通過實驗證明，擬人參皂苷元能明顯的抑制血小板聚集，可以顯著的改善血液流變學指標，低、中、高切變率的全血粘度、血漿粘度及紅細胞聚集指數均顯著降低，與陽性藥持平。具體實施方式-以下實施例更詳細地說明本發明，但不以任何形式限制本發明。實施例1:擬人參皂苷元的製備將10升甘油加入小型具油浴加熱和攪拌的反應罐中，再分別加入lkg的氫氧化鈉和lkg西洋參莖葉皂苷，攪拌，常壓下持續加熱升溫，升溫至21(TC下保溫反應40分鐘，反應完畢，將反應液傾入60倍冷水中並攪拌，析出沉澱。靜置，過濾，水洗至中性，即得擬人參皂苷元粗品。再將此粗品經矽膠柱層析，以正己烷/乙酸乙酯(2:1)洗脫，回收溶劑，以甲醇一乙酸乙酯混合溶劑重結晶得到40g擬人參皂苷元，收率4%，經HPLC檢測含量97%。實施例2:擬人參皂苷元片劑的製備稱取由實施例1得到的擬人參皂苷元10.OOg，將其與60g澱粉混勻，加入15%澱粉漿適量，混合製成軟材，14目篩制粒，7(TC乾燥，14目篩整粒後，加入0.5g硬脂酸鎂和lg羧甲基澱粉鈉，混勻，壓制200片，100mg/片。實施例3:擬人參皂苷元膠囊的製備稱取由實施例1得到的擬人參皂苷元50g，葡甲胺45g，與95g微晶纖維素用5鬼PVP-乙醇溶液制粒，乾燥後，裝入膠囊，規格為50mg/粒(以擬人參皂苷元計)。實施例4:注射用擬人參皂苷元凍乾粉針的製備稱取由實施例.l得到的擬人參皂苷元1.00g，加入20ml乙醇使苷元完全融解，再加入40ml甘油混合均勻。將0.20g鹽酸丁卡因、0.02g的EDTA-2Na加入到40ml注射用水中，使輔料完全溶解。並將上述水溶液加入到藥物溶液中，混合均勻。以0.01mol/L的氫氧化鈉和稀鹽酸調節pH值為5.5±1.0。加入O.1%的針用活性炭85度保溫15分鐘，G3垂熔玻璃漏鬥過濾，0.22ym的微孔濾膜過濾。濾液分裝於7ml西林瓶中，每支裝量2ml。分裝好的注射劑半壓塞，於凍幹機凍幹。凍幹後壓塞，壓鋁蓋製成凍乾粉針劑，20mg/支。試驗例l:擬人參皂苷元對大鼠血小板聚集功能的影響1材料擬人參皂苷元(Ocotillol):按照實施例l方法得到的產品。阿司匹林批號0607233，青島黃海製藥有限責任公司生產。硫酸氯吡格雷片藥品註冊證號H20030579;分裝批號0703078;產品批號1991;SanofiWinthropIndustrie生產。羧甲基纖維素鈉批號20010829，上海化學試劑公司。二磷酸腺苷(ADP):批號061101，上海藍季科技發展有限公司。枸櫞酸鈉批號061211，北京益利精細化學品有限公司。TDL-40B型離心機上海安亭儀器廠生產。LBY-NJ血液凝聚儀北京普利生精密儀器研究中心。DL-4000B離心機上海安亭科學儀器廠。DS-671電子天平上海壽岡電子有限公司製造。動物清潔級Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重200g-250g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。2方法與結果動物隨機分為空白對照組(等容量溶劑)、阿司匹林組(ASA，50mg/kg)、氯吡格雷組(7mg/kg)、擬人參皂苷元0.625mg/kg組、擬人參皂苷元1.25mg/kg組、擬人參皂苷元2.5mg/kg組、擬人參皂苷元5mg/kg組和擬人參皂苷元10mg/kg組，每組8隻，灌胃給藥，1次/d，連續5d。於末次給藥後lh，以3%戊巴比妥鈉分別麻醉大鼠(30mg/kg)，經腹主動脈採血，以3.8%枸櫞酸鈉溶液抗凝(血抗凝劑=9:1)，1000r/min離心6min，分離富血小板血漿(PRP)，剩餘部分再以3000r/min離心15min，分離貧血小板血漿(PPP)，按比濁法以ADP(252pmol/L)為誘導劑，用LBY-NJ血液凝聚儀測定5min內血小板聚集率，並按以下公式計算血小板聚集抑制率，數據用；is表示，以組間？檢驗進行統計學處理，結果見表l。血小板聚集抑制率=空白對照血=反=^;°==，、板聚鮮％><腦空白對照管血小板聚集率％根據實驗結果可知，擬人參皂苷元各劑量組可明顯抑制體內血小板聚集，藥效與陽性藥阿司匹林和氯吡格雷持平。表l擬人參皂苷元對血小板聚集率的影響(S力，《=8)tableseeoriginaldocumentpage7與空白對照組比較**P<0.01，***P<D.001試驗例2:擬人參皂苷元對大鼠血液流變學的影響1材料擬人參皂苷元(OCOtillol):按照實施例1方法得到的產品。阿司匹林批號0607233，青島黃海製藥有限責任公司生產。羧甲基纖維素鈉批號20010829，上海化學試劑公司。肝素鈉注射液批號20030311，天津市生物化學製藥廠。TDL-40B型離心機上海安亭儀器廠生產。DS-671電子天平上海壽岡電子有限公司製造。動物清潔級Sprague-Dawley大鼠，雄性，體重200g-250g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供，合格證號SYXK(魯)20030020。2方法與結果動物隨機分為空白對照組(等容量溶劑)、阿司匹林組(ASA，50mg/kg)、擬人參皂苷元0.625mg/kg組、人參皂苷元1.25mg/kg組、擬人參皂苷元2.5mg/kg組，擬人參皂苷元5mg/kg組和擬人參皂苷元10mg/kg組，每組8隻，灌胃給藥，l次/d，連續5d。於末次給藥後2h，收集血液，取約5ml血，肝素抗凝，進行血液流變學檢查，分別測定低、中、高切變率下的全血粘度、血漿粘度、紅細胞聚集指數，實驗結果見表2。從實驗結果可知，與空白對照組相比，擬人參皂苷元各組均可明顯改善血液流變學指標，低、中、高切變率的全血粘度、血漿粘度及紅細胞聚集指數均顯著降低，結果與陽性藥阿司匹林持平。表2擬人參皂苷元對血液流變學指標的影響(is，《=8)組別劑量(mg/kg)全血低切粘度(3/S)全血中切粘度(30/S)全血高切粘度(200/S)血漿粘度(mPa.s)紅細胞聚集指數空白對照組15.92±1.398.29±0.856.58±0.652.18±0,0511.01±1.05阿司匹林組5013.81±1.23*6.97±0.69*5.56士0.52"1.38±0.07***9.56±0.33*擬人參皂苷元組0.62513.73±1.477.30±0.745.18±0.501.72±0.02***7.62±0.33**1.2513.54±0.976.88±0.52*4.83±0.2**1.72±0.06***6.18±0.21**2.512.37±0.41**6.70±0.27**4.82±0.22**1.44±0.17***6.50±0.22**12.57±1.2*6.66±0.61*4.74±0.41*1.3±0.02***6.76±0.40**1014.09士1.26*7.19±0.74*5.74±0.56*1.35±0.06***10.43±0,99與空白對照組比較*P<0.05，"P〈0.01,***屍<0.00權利要求1.擬人參皂苷元或其鹽在製備抗血小板聚集藥物中的應用。2、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於擬人參皂苷元的使用劑量為7mg400mg/天。3、根據權利要求2所述的應用，其特徵在於擬人參皂苷元的使用劑量為7mg110mg/天。4、含有擬人參皂苷元或其鹽、用於治療和預防血小板聚集作用的藥物組合物。5、根據權利要求4所述的藥物組合物，其特徵在於可以通過口服、舌下、經皮、經肌肉或靜脈途徑給藥。6、根據權利要求5所述的藥物組合物，其特徵在於以粉針劑、注射液、片劑、膠囊、軟膠囊、滴丸、糖漿、口嚼劑、貼劑或口服液形式存在。全文摘要本發明涉及擬人參皂苷元在製備抗血小板聚集藥物中的應用。本發明還提供了用於治療和預防血小板聚集，含有擬人參皂苷元或其鹽的藥物組合物。文檔編號A61K9/70GK101371847SQ200810136198公開日2009年2月25日申請日期2008年7月10日優先權日2007年7月13日發明者昕於,傅風華申請人:山東綠葉製藥有限公司