誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基的製作方法

2023-10-06 20:02:39

專利名稱：誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基的製作方法
技術領域：
本發明涉及大蒜組織培養技術，具體是一種誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培 養基。特別適用於利用從大蒜胚性懸浮培養系轉固體培養後體細胞胚(簡稱體胚)的誘導。
背景技術：
大蒜(Allium sativumL.)是無性繁殖植物，具有較高的食用及藥用價值，利用生 物工程技術改良其品質.抗病蟲性等性狀現已引起廣泛的重視，這些生物技術應用的關鍵 環節是建立一個大蒜細胞組織培養、增殖的有效植株再生體系。懸浮培養技術可以在短時 間內培養出大量同質的試驗材料，大幅度提高試驗效率，為大蒜生物工程提供理想的試驗 材料。張毅等利用大蒜懸浮培養提取大蒜次生代謝物質有過報導(1993)；但利用大蒜懸浮 培養技術，建立懸浮培養系及有效植株高頻率再生體系尚未報導。

發明內容
本發明的目的是解決大蒜懸浮培養系轉管固體培養上增殖培養時體胚難誘導的 技術難題，提供一種大蒜胚性懸浮培養系體胚誘導用的培養基。本發明的技術方案如下一種誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基，是將 6-苄基嘌呤6-BA、激動素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解於基本培養基B5中，調整PH值 至5. 8-6. 0製成；其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計B51L6-BA 5mgKTlmgNAA 0. Olmg蔗糖30g瓊脂6g。上述原料中，B5為基本培養基，提供培養組織生長發育所需的無機營養元素和部分 有機營養元素；6-BA、KT、NM是植物生長調節劑，具有促進培養物愈傷組織形成和發育的作 用；蔗糖提供培養組織生長發育所的碳素營養；瓊脂的主要作用是固化培養基，起支撐作用。上述各組份的用量是發明人在理論分析的基礎上進行大量試驗摸索總結得出的， 按上述比例配製培養基，具有促使大蒜胚性懸浮培養系形成體細胞胚的效果。上述培養基的製作方法是將6-BA、KT、NAA、蔗糖溶解於B5，攪拌均勻，PH值調整為 5. 8-6. 0之間即可。本發明的積極效果是克服了大蒜懸浮培養難以成系、體細胞胚(簡稱體胚)難誘 導的難題，利用本培養基可以使大蒜胚性懸浮培養系高頻率誘導出體胚。
具體實施例方式以下通過實施例和對照例進一步闡述本發明的有益效果
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對照例1B52,4-D6-BANAA蔗糖瓊脂對照例2B52,4-DKTNAA蔗糖瓊脂實施例1B5 1L6-BA 5mgKT lmgNAA 0. Olmg蔗糖30g瓊脂6g試驗方法及結果將上述實施例的培養基用於大蒜胚性懸浮培養系轉固體培養後體胚的誘導試 驗材料大蒜徐州白蒜莖尖分生組織懸浮培養誘導出的胚性愈傷組織。方法將大蒜徐州白蒜莖尖分生組織誘導出胚性愈傷組織經懸浮培養後，將誘導 出的胚性懸浮系轉移到裝有上述固體培養20ml (PH5. 5)的三角瓶中，培養條件為27士 1°C， 每日12h. lOOOlx光照。結果將大蒜懸浮培養系中3mm以上細胞團轉管接種在上述三種培養基上，進行 愈傷組織的增殖和體胚的進一步發育誘導。經過4周的繼代培養，接種在對照例1培養基 上的胚性愈傷組織顏色逐漸由淡黃色變為灰白色，組織增殖速度變快，結構變利疏鬆，喪失 胚性發育能力。接種在對照例2培養基上的胚性細胞團只有10%的細胞團保持亮黃色，維 持其胚性；90%的細胞團喪失了胚性。接種在本實施例1培養基上的細胞團89%仍表現為 亮黃色.結構緻密.有光澤.生長緩慢，並且逐漸有瘤狀突起，經細胞學觀察，這時期體胚 的發育逐漸成熟。由此可見高比例的細胞分裂素/生長素有利於體胚的成熟，2，4-D的存在 不利於體胚的成熟分化，大蒜胚胎發生對生長素濃度的要求極低。綜合以上分析，得出大蒜胚性懸浮系體胚誘導的最佳培養基為B5 1L6-BA 5mg
1L 0. 5mg 0. 5mg 0. 2mg 30g 6g
1L 0. 5mg 0. lmg 0. 2mg 30g 6g
KT lmgNAA 0. Olmg蔗糖30g瓊脂6g。
權利要求
一種誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基，其特徵是將6-苄基嘌呤6-BA、激動素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解於基本培養基B5中，調整PH值至5.8-6.0製成；其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計B5 1L6-BA5mgKT 1mgNAA 0.01mg蔗糖30g瓊脂6g。
全文摘要
本發明公開了一種誘導大蒜胚性懸浮培養系體胚用的培養基屬大蒜組織培養技術。將6-苄基嘌呤6-BA、激動素KT、萘乙酸NAA、蔗糖和瓊脂溶解於基本培養基B5中，調整PH值至5.8-6.0製成；其各組份的用量為以1L基本培養基B5加入量計B5 1L，6-BA 5mg，KT 1mg，IAA 0.01mg，蔗糖30g和瓊脂6g。本發明的積極效果是克服了大蒜懸浮培養難以成系、體細胞胚(簡稱體胚)難誘導的難題，利用本培養基可以使大蒜胚性懸浮培養系高頻率誘導出體胚。
文檔編號C12N5/04GK101851601SQ20101016960
公開日2010年10月6日 申請日期2010年5月6日 優先權日2010年5月6日
發明者張允剛 申請人:江蘇徐淮地區徐州農業科學研究所