一種扁桃斑鳩菊的簡化組培快繁方法與流程

2023-10-07 00:12:24

本發明涉及植物組織培養技術領域，特別是涉及一種扁桃斑鳩菊的簡化組培快繁方法。

背景技術：
扁桃斑鳩菊(VernoniaamygdalinaDel.)又名桃葉斑鳩菊、杏葉斑鳩菊、神奇樹、苦樹、南非樹，為菊科斑鳩菊屬植物，原產於非洲。其葉片可以安全食用，在奈及利亞等地被當作一種蔬菜，可入藥，在治療腫瘤尤其是防治乳腺癌、降血壓方面極具潛力。扁桃斑鳩菊在東南亞及臺灣等地民間應用較多，而中國大陸則相對比較陌生，近年來兩廣地區陸續有引進，但相關研究較少。採用組織培養技術生產種苗，可以實現周年生產、保障種苗的品質，加快推進種苗的標準化生產，但生產工藝繁瑣、需要經過誘導無菌芽、叢生芽誘導繼代和生根培養等環節。因此建立並優化組培快繁技術體系，不斷改進培養基配方、簡化生產流程，對加快產業化、降低生產成本具有重要意義。目前，尚無扁桃斑鳩菊組培快繁技術的相關報導。

技術實現要素：
本發明的目的是提供一種扁桃斑鳩菊的簡化組培快繁方法，該方法在同一種培養基上進行扁桃斑鳩菊的繼代培養和生根培養，實現了繼代培養和生根培養同時進行的一步成苗，大大簡化了生產流程，節約了物料成本和人工成本，為扁桃斑鳩菊的規模化組培快繁提供了工藝方法。本發明所述的一種扁桃斑鳩菊的簡化組培快繁方法，包括以下步驟：1)外植體採集：選取生長健壯、無病蟲害的優良植株，剪取木質化程度較輕的當年生嫩枝為外植體；2)外植體消毒：對步驟1)得到的外植體進行浸泡消毒，並用無菌水衝洗；3)無菌芽誘導：將步驟2)完成消毒的外植體莖段接種於誘導培養基上進行培養；4)繼代-生根培養：將步驟3)培養得到無菌芽分段切割，轉入附加有特定植物生長調節劑的MS-z培養基進行培養；5)移栽：待根系發育完成，洗淨基部培養基，移栽到備用的基質中。本發明步驟2)所述的外植體消毒，優選將步驟1)得到的外植體截成長1.2-1.5cm的帶節小段，剪去葉片，只保留葉柄基部(長約0.5cm)，流水衝洗20min備用；在超淨工作檯上，用75％(v/v)酒精浸泡10s，0.1％升汞溶液振蕩消毒8min，再用無菌水衝洗5次洗去殘留藥液，用無菌濾紙吸乾水分後，切去莖段兩端和葉柄上部少許(保留長度約0.2cm)，備用。步驟3)所述的誘導培養基為MS基本培養基附加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg/L和萘乙酸(NAA)0.05mg/L，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L，蔗糖和瓊脂粉添加量分別為每L培養基30g、6g，滅菌前培養基pH調整為6.0，培養室溫度為(23±2)℃，光照強度1500-2500lx，光照時間為12h/d。在誘導培養基中，側芽易於誘導且生長迅速，誘導率可達70％，以春夏季消毒效果更佳，以莖段消毒誘導的無菌芽多為腋芽，即「以芽繁芽」的方式獲得無菌芽，雖有愈傷組織產生，但愈傷組織很少成苗，降低了變異率，保證了種苗的品質。步驟4)所述的繼代-生根培養，優選待無菌芽生長至2cm時，將其分段切割，轉入附加有特定植物生長調節劑的繼代-生根培養基進行培養，培養周期為35天，培養室光照時間為16h/d，光照強度2000-3500lx，培養室溫度控制在(21±2)℃以減少玻璃化、促使組培苗健壯；所用繼代-生根培養基即MS-z+6-BA0.3mg/L+IBA0.15mg/L+PP333(多效唑)0.1mg/L，所述的MS-z培養基每升中所含的組分及濃度(mg/L)如下：大量元素：硝酸鉀1900、硝酸銨412.5、二水氯化鈣880、七水硫酸鎂370、磷酸二氫鉀170、七水硫酸亞鐵27.8、乙二胺四乙酸二鈉37.3；微量元素：四水硫酸錳22.3、七水硫酸鋅8.6、硼酸3.1、二水鉬酸鈉0.25、碘化鉀0.83、五水硫酸銅0.025、六水氯化鈷0.025；有機物：肌醇100.0、甘氨酸2.0、鹽酸吡哆醇(VB6)0.5、煙酸0.5、鹽酸硫胺素(VB1)0.1；其它：瓊脂8000、蔗糖40000、pH6.0；若要繼續擴增，應在培養20-25天時繼代，此時苗高3cm左右，根系較短，通過分段切割重新轉入MS-z+6-BA0.3mg/L+IBA0.15mg/L+PP3330.1mg/L培養基即可；若要生根移栽，則應繼續培養至35天，此時苗高3-5cm，植株健壯、根系良好，移入煉苗棚煉苗10天後即可移栽。步驟5)所述...