鈣受體活性化合物的製作方法

2023-10-19 21:47:42 2

專利名稱：鈣受體活性化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及能夠調控一種或多種無機離子受體活性的化合物的設計、開發、組成及應用。
背景技術：
體內某些細胞不僅對化學信號，而且對離子(如細胞外鈣離子(Ca2+))產生應答。細胞外Ca2+的濃度(本文記作[Ca2+])的變化改變這些細胞的功能性應答。一種這樣的特化細胞是分泌甲狀旁腺激素(PTH)的甲狀旁腺細胞。PTH是調節血液和細胞外液中Ca2+體內平衡的主要內分泌因子。
PTH通過作用於骨和腎細胞，提高血液中Ca2+水平。這種[Ca2+]的提高作用作為負反饋信號，抑制PTH分泌。[Ca2+]和PTH分泌之間的相互關係形成維持體內Ca2+平衡的主要機制。
細胞外Ca2+直接作用於甲狀旁腺細胞，調節PTH分泌。已證實存在一種甲狀旁腺細胞表面蛋白，該蛋白可以檢測[Ca2+]變化。Brown等，自然，366，574，1993。在甲狀旁腺細胞中，該蛋白作為細胞外Ca2+的受體(「鈣受體」)檢測[Ca2+]變化並引發功能性細胞應答，即PTH分泌。
細胞外Ca2+能作用於不同細胞功能，綜述見Nemeth等，細胞鈣，11，319，1990。關於副濾泡細胞(C細胞)和甲狀旁腺細胞中的胞外Ca2+作用的討論見Nemeth，細胞鈣，11，323，1990。這些細胞表達相似的Ca2+受體。Brown等自然，366，574，1993；Mithal等，骨骼和礦物質研究雜誌，9增刊1，282頁，1994；Rogers等，骨骼和礦物質研究雜誌，9增刊1，409頁，1994；Garrett等，骨骼和礦物質研究雜誌，9增刊1，409頁，1994。關於細胞外Ca2+對骨骼破骨細胞的作用的討論見Zaidi，生物科學報導，10，493，1990。另外，角化細胞、近腎小球細胞、滋養層、胰β細胞和脂肪細胞均對細胞外鈣的變化有響應，這可能反映這些細胞的鈣受體的活化。
關於不同化合物體外模擬細胞外Ca2+的能力的討論見Nemeth等(精胺和亞精胺)《健康與疾病中的鈣結合蛋白》1987，學術出版公司，33-35頁；Brown等(例如新黴素)內分泌學128，3047，1991；Chen等(diltiazem及其類似物TA-3090)骨骼和礦物質研究雜誌，5，581，1990；和Zaidi等(Verapamil)，生化和生物物理研究公報167，807，1990。Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959，和Nemeth等，PCT/US92/07152，國際出版號WO 93/04373描述了能夠調控無機離子對含有無機離子受體的細胞的作用的各種化合物。
背景技術：
中提供的參考文獻不認為是優先技術。
發明概述本發明描述能調控一種無機離子受體的一種或多種活性的化合物以及通過調控無機離子受體活性來治療疾病或失調的方法。優選的化合物能模擬或阻遏細胞外鈣對細胞表面鈣受體的作用。
可通過調控無機離子受體活性來治療的疾病或失調包括下列一種或多種類型(1)其特徵在於無機離子體內平衡異常，優選的是鈣體內平衡異常的疾病或失調；(2)其特徵在於細胞外或細胞內信使數量異常的疾病或失調，所述信使的產生受無機離子受體活性，優選的是鈣離子受體活性的影響；(3)其特徵在於細胞內或細胞外信使的異常作用(例如一種在種類或數量上不同的作用)，但可被無機離子受體活性，優選的是鈣受體活性改善的疾患；(4)調控無機離子受體活性，優選的是鈣受體活性，可以起到有益作用的其它疾病或失調，例如這樣一種疾病或失調，其中受體活性激發一種細胞內或細胞外信使的產生從而補償另一信使數量異常。其分泌和/或作用受調控無機離子受體活性影響的細胞外信使包括無機離子、激素、神經遞質、生長因子和趨化因子等。細胞內信使的例子包括cAMP，cGMP，IP3和甘油二酯。
因此，本發明的化合物優選地調節鈣受體活性並用於治療可受調控鈣受體一種或多種活性影響的疾病或失調。鈣受體蛋白使某些特化細胞對細胞外Ca2+濃度產生應答。例如，細胞外Ca2+抑制甲狀旁腺細胞分泌甲狀旁腺激素，抑制破骨細胞對骨的吸收，以及激發C細胞分泌降鈣素。
在優選實施方案中，該化合物被用於治療其特徵在於骨骼和礦物質體內平衡異常，更優選的是鈣的體內平衡異常的疾病或失調。細胞外Ca2+受到嚴格的體內平衡控制並控制多種過程，如血凝、神經和肌肉的可興奮性和正常的骨骼形成。鈣體內平衡異常的特徵在於一種或多種下列活性(1)血清鈣的異常增減；(2)鈣隨尿排出量的異常增減；(3)骨骼鈣水平的異常增減，用例如骨骼礦物質密度測量得知；(4)食物中鈣的異常吸收；(5)影響血清鈣水平的信使如甲狀旁腺激素和降鈣素的產生和/或釋放的異常增減；以及(6)由影響血清鈣水平的信使引發的應答的異常變化。鈣的體內平衡的這些不同方面的異常增減與一般人群中存在的鈣的體內平衡的異常增減相關並且通常與疾病或失調相聯繫。
其特徵為鈣的體內平衡異常的疾病或失調可能是由不同的細胞缺陷造成的，如鈣受體活性缺陷，鈣受體的數量缺陷或是鈣受體所影響的細胞內蛋白有缺陷。例如在甲狀旁腺細胞中，鈣受體與Gi蛋白偶聯，後者反過來抑制環腺苷酸的產生。Gi蛋白缺陷可以影響某抑制環腺苷酸產生的能力。
因此，本發明的第一個方面涉及一種調控無機離子受體的化合物及其藥用鹽和複合物，其具有下式結構I 其中Ar1是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙醯基、亞乙二氧基；Ar2是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基；q是0、1、2或3；R是H或低級烷基。
本發明的化合物具有優選的立體化學性質。結構I中的CH3位於手性中心，並提供α-(R)-甲基結構。若R是CH3，結構I中的R也位於手性中心，並提供(R)-甲基結構。因此若R是CH3，結構I的化合物有(R，R)立體化學性質。
無機離子受體活性是無機離子受體活化引發的過程。這些過程包括可以作為細胞內或細胞外信使的分子的生產。
調控無機離子受體的化合物包括離子模擬物(ionomimetics)、離子裂解物(ionolyics)、鈣模擬物和鈣裂解物。離子模擬物是結合無機離子受體並模擬(即激發或加強)無機離子在無機離子受體上的作用。優選地，該化合物影響一種或多種鈣受體活性。鈣模擬物是影響一種或多種鈣受體活性並結合鈣受體的離子模擬物。
離子裂解物是結合無機離子受體並阻遏(即抑制或減弱)無機離子在無機離子受體上一種或多種活性的化合物。優選地，該化合物影響一種或多種鈣受體活性。鈣裂解物是阻遏一種或多種細胞外鈣引發的鈣受體活性並結合鈣受體的離子裂解物。
離子模擬物和離子裂解物可以結合與天然無機離子配體結合的相同受體位點或結合另一位點(例如變構位點)。例如NPS R-467結合鈣受體，導致鈣受體活性，因此NPS R-467屬於鈣模擬物。但NPS R-467結合鈣受體上的位點與細胞外鈣結合位點不同(即變構位點)。
計算該化合物的EC50或IC50可量測該化合物的有效性。EC50是產生最大模擬效應的一半的化合物濃度。IC50是產生最大阻遏效應的一半的化合物濃度。鈣受體上化合物的EC50和IC50可通過檢測鈣受體上細胞外鈣的一種或多種活性來確定。用於測量EC50和IC50的檢測的例子描述見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959，和Nemeth等，PCT/US92/07175，國際出版號WO 93/04373，(兩種出版物均在此引入作為參考)以及下文。這種檢測包括卵細胞表達試驗和測量鈣受體活性引起的細胞內鈣離子濃度([Ca2+]i)增加。優選地，這種試驗測量與鈣受體活性相關的一種特定激素的釋放或抑制。
調控無機離子受體的化合物優選地選擇性靶向於特定細胞的無機離子受體活性。例如，某一給定濃度的一種化合物對一種細胞類型的鈣受體活性的影響遠大於對另一細胞類型的鈣受體活性的影響，則實現對鈣受體活性的選擇性靶向。優選地，體內或體外測得差別效應為10倍或更大。更優選地，差別效應在體內測量，化合物濃度以血漿濃度或細胞外液濃度測量，測量的效應是細胞外信使如血漿降鈣素、甲狀旁腺激素或血漿鈣的產生。例如在優選實施方案中，該化合物選擇性地靶向於PTH分泌而非降鈣素分泌。
優選地，該化合物是鈣模擬物或鈣裂解物，用下述試驗測得，在鈣受體上的EC50或IC50小於等於5μM，更優選地小於等於1μM、100nM、10nM或1nM。更優選地，該試驗測量用表達人類甲狀旁腺鈣受體的核酸轉化且加載(load)fura-2的HEK293細胞中胞內Ca2+。EC50或IC50更有利，因為這可以在體內或體外用更低濃度的該化合物。EC50和IC50低的化合物的發現使得設計和合成具有類似或改善的效能、有效性和/或選擇性的其它化合物成為可能。
本發明另一方面涉及一種調控無機離子受體的化合物及其藥用鹽和複合物，它具有下式結構II 其中Ar3是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、N(CH3)2、乙基、亞乙二氧基；Ar4是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基；R8是氫或苯基；R9是氫或甲基；以及R10是氫、甲基或苯基。
本發明另一方面涉及一種調控無機離子受體的化合物，其具有下式
結構III 其中Ar5是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、苄基、苄氧基，α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙醯基、亞乙二氧基、-CH＝CH-苯基；Ar6是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自乙醯基、低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、甲酯基、OCH2C(O)C2H5和乙醯氧基；R11是氫或甲基；以及R12是氫或甲基。
本發明另一方面涉及一種藥物組合物，它由本文描述的調控無機離子受體的化合物和生理可接受載體組成。「藥物組合物」指一種以適於對哺乳動物(優選的是人)給藥的形式存在的組合物。優選地，藥物組合物含有足夠量的適當藥物形式的調控鈣受體的化合物，能夠對人起治療作用。
對適當給藥形式的考慮因素在本領域是已知的，包括毒性、可溶性、給藥途徑和維持活性。例如，注射入血液中的藥物組合物應當可溶。
藥物組合物也可配製成藥用鹽類(例如酸加成鹽)及其複合物。這類鹽的製備物通過改變化合物的物理特性而不妨礙它發揮生理作用而促進其醫藥應用。
本發明另一方面涉及用本文描述的調控無機離子受體的化合物調控無機離子受體活性來治療患者的方法。該方法涉及用含有治療有效量的調控無機離子受體的化合物的藥物組合物對患者給藥。在優選實施方案中，用治療有效量的調控鈣受體的化合物對患者給藥來調控鈣受體活性，從而治療疾病或失調。
調控無機離子受體的化合物及含有該化合物的組合物可用於治療患者。「患者」指這樣一種哺乳動物，其中調控無機離子受體有有益的效應。需要通過調控無機離子受體來治療的患者可用醫學界已知的標準技術來確定。
優選地，患者是患有以下一種或多種特徵的疾病或失調的人(1)無機離子的體內平衡異常，更優選的是鈣的體內平衡異常；(2)其生產或分泌受無機離子受體活性，更優選的是鈣受體活性影響的信使水平異常；(3)其功能受無機離子受體活性，更優選的是鈣受體活性影響的信使的水平或活性異常。
特徵為鈣的體內平衡異常的疾病包括甲狀旁腺機能亢進、骨質疏鬆和其它骨骼和礦物質相關功能失調等(描述見例如標準醫學課本如《Harrison氏內服藥原理》)。用模擬或阻遏細胞外Ca2+在鈣受體上一種或多種效應的調控鈣受體的化合物，直接或間接影響患者體內蛋白質或其它化合物的水平可治療這些疾病。
「治療有效量」指在一定程度上緩解患者疾病或失調的一種或多種症狀；或將與疾病或失調相關或有因果關係的一種或多種生理或生化參數部分或全部恢復至正常的化合物量。
在優選實施方案中，患者患有特徵為一種或多種鈣受體調節的組分水平異常的疾病或失調，並且該化合物在選自下列細胞的細胞鈣受體上有活性；甲狀旁腺細胞、破骨細胞、近腎小球腎細胞、近端腎小管腎細胞、遠端腎小管腎細胞、中樞神經系統細胞、外周神經系統細胞、Henle氏環和/或收集管粗上升支的細胞、表皮的角化細胞、甲狀腺中副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、血小板、血管平滑肌細胞、心房細胞、胃泌素分泌細胞、胰高血糖素分泌細胞、腎小球膜細胞、乳腺細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞、胃腸道細胞、皮膚細胞、腎上腺細胞、垂體細胞、下丘腦細胞和後穹窿(subfornical)器官的細胞。
更優選地，細胞選自甲狀旁腺細胞、中樞神經系統細胞、外周神經系統細胞、腎Henle氏環和/或收集管的粗上升支的細胞、甲狀腺的副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、胃腸道細胞、垂體細胞、下丘腦細胞和後穹窿器官的細胞。
在優選實施方案中，化合物是作用於甲狀旁腺細胞鈣受體並且降低患者血清中甲狀旁腺激素水平的鈣模擬物。更優選地，該水平降至足以使血漿Ca2+減少的程度。最優選地，甲狀旁腺激素水平降至正常個體水平。
在另一優選實施方案中，化合物是作用於甲狀旁腺細胞鈣受體並且提高患者血清中甲狀旁腺激素水平的鈣裂解物。更優選地，該水平升至足以導致患者骨礦物質密度升高的程度。
用標準醫學技術，如血檢或尿檢可鑑定需要接受這種治療的患者。例如通過檢測其產生或分泌受無機離子濃度變化影響的蛋白質的缺陷。或通過檢測影響無機離子體內平衡的無機離子或激素的水平異常。
本申請通篇用到多個實施例。這些實施例決非用於限制本發明。
從下面的附圖、發明詳述、實施例和權利要求可明顯看出本發明的其它特徵與優點。
附圖簡述

圖1a-1r給出不同化合物的化學結構。
圖2-131給出本文描述的優表性化合物的物理數據。
優選實施方案描述本發明涉及能夠調控一種或多種無機離子受體活性的化合物，優選地，該化合物能模擬或阻遏細胞外離子對具有無機離子受體的細胞的作用，更優選地，該細胞外離子是Ca2+，該效應作用於含鈣受體的細胞上。涉及鈣活性、鈣受體和/或調控鈣受體的化合物的出版物包括Brown等，自然366574，1993；Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO94/18959；Nemeth等，PCT/US92/07175，國際出版號WO 93/04373；Shoback和Chen，骨骼和礦物質研究雜誌，9293(1994)；以及Racke等，FEBS快報(FEBS Lett.)333132，(1993)。這些出版物不被認為是本發明的先有技術。
I.鈣受體鈣受體存在於不同細胞類型中，可以在不同細胞類型中有不同功能。下列細胞響應鈣後的醫藥效應與鈣受體的存在相一致甲狀旁腺細胞、破骨細胞、近腎小球腎細胞、近端腎小管腎細胞、遠端腎小管腎細胞、中樞神經系統細胞、外周神經系統細胞、Henle氏環和/或收集管粗上升支的細胞、表皮的角化細胞、甲狀腺的副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、血小板、血管平滑肌細胞、心房細胞、胃泌素分泌細胞、胰高血糖素分泌細胞、腎小球膜細胞、乳腺細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞、胃腸道細胞、皮膚細胞、腎上腺細胞、垂體細胞、下丘腦細胞和後穹窿器官的細胞。另外，物理數據證實鈣受體也存在於甲狀旁腺細胞、中樞神經系統細胞、外周神經系統細胞、腎Henle環和/或收集管粗上升支的細胞、甲狀腺的副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、胃腸道細胞、垂體細胞、下丘腦細胞和後穹窿器官的細胞。
這些不同細胞類型的鈣受體可能不同。也可能一種細胞含有不只一種鈣受體。比較不同細胞來源的鈣受體活性與胺基酸序列顯示存在不同的鈣受體類型。例如鈣受體可應答許多二價和三價陽離子。甲狀旁腺鈣受體應答鈣和Gd3+，而破骨細胞應答二價陽離子如鈣，但不應答Gd3+。因此甲狀旁腺鈣受體與破骨細胞的鈣受體在藥理上是不同的。
另一方面，編碼甲狀旁腺細胞和C細胞的鈣受體的核酸序列顯示這些受體的胺基酸結構相似。然而鈣模擬物在甲狀旁腺細胞和C細胞上表現不同的藥理性質，調節不同活性。因此，儘管鈣受體可能有相似或甚至相同的結構。但其藥理特性可能依表達它的細胞或器官類型不同而差別顯著。
通常鈣受體對細胞外Ca2+的親和性低(表觀Kd通常大於0.5mM)。鈣受體可能包括一種自由的或結合的效應子機理，其定義見Cooper、Bloom和Roth，《神經藥理學的生化基礎》，第四章，因此與細胞內鈣受體如鈣調蛋白和肌鈣蛋白不同。
鈣受體響應細胞外鈣水平的變化。確切的變化依賴特定受體和含有受體的細胞系。例如鈣對甲狀旁腺細胞上鈣受體的體外效應包括1.胞內鈣增加。這種增加是由於胞外鈣的內流和/或胞內鈣的募集。胞內鈣增加的特徵包括(a)快速(到達峰值的時間＜5秒)而暫時性的[Ca2+]i增加，對1μM La3+或1μM Gd3+抑制有抗性，用離子黴素預處理(細胞外Ca2+不存在時)後消除；(b)增加不受二氫吡啶抑制；(c)暫時性增加被10mM氟化鈉預處理10分鐘消除；(d)暫時性增加被蛋白激酶C(PKC)的激活物如佛波醇十四烷酸乙酯(PMA)，歐亞瑞香脂或(-)-吲哚內醯胺V預處理所減小。蛋白激酶C的整體效應是使鈣的濃度響應曲線向右移，而不影響最大響應；以及(e)用百日咳毒素預處理(100ng/ml大於4小時)不影響該增加。
2.肌醇-1，4，5-三磷酸或甘油二酯形成的快速(＜30秒)增加。用百日咳毒素預處理(100ng/ml＞4小時)不影響該增加；3.抑制多巴胺和異丙基腎上腺素激發的環AMP形成。該效應被百日咳毒素預處理(100ng/ml＞4小時)阻遏；以及4.抑制PTH分泌。用百日咳毒素預處理(100ng/ml＞4小時)不影響對PTH分泌的抑制。
用本領域已知技術可方便地確定鈣對不同細胞中其它鈣受體的效應。這些效應在觀察到甲狀旁腺細胞中胞內鈣增加這一點上相似。但這種效應預計在其它方面，例如引起或抑制不是甲狀旁腺激素的一種激素的釋放上會有不同。
II.調控無機離子受體的化合物調控無機離子受體的化合物調控一種或多種無機離子受體活性。優選的調控鈣受體的化合物是鈣模擬物和鈣裂解物。通過篩選依據具有特定活性的化合物(即引導化合物)為模型而構建的一些化合物來鑑定調控無機離子受體的化合物。
測量鈣受體活性的優選方法是測量[Ca2+]i的變化。可用不同的技術如利用被表達人甲狀旁腺鈣受體的核酸轉導且載有fura-2的HEK293細胞；以及通過測量用編碼鈣受體的核酸注射的爪蟾卵細胞中Cl-流來測量[Ca2+]i的變化。(見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO94/18959。)例如，poly(A)+mRNA可得自表達鈣受體的細胞，如甲狀旁腺細胞、破骨細胞、近腎小球腎細胞、近端腎小管腎細胞、遠端腎小管腎細胞、Henle環和/或收集管的粗上升支的細胞、表皮的角化細胞、甲狀腺的副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、中樞神經細胞、外周神經系統細胞、血小板、血管平滑肌細胞、心房細胞、胃泌素分泌細胞、胰高血糖素分泌細胞、腎小球膜細胞、乳腺細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞和胃腸道細胞。優選地，核酸來自甲狀旁腺細胞，C細胞或破骨細胞。更優選地，核酸編碼鈣受體並且位於質粒或載體上。
在優選實施方案中，調控鈣受體的化合物是鈣模擬物，抑制體內破骨細胞對骨的重吸收作用；抑制體外破骨細胞對骨的重吸收作用；激活C細胞體外或體內的降鈣素分泌；抑制甲狀旁腺細胞體外分泌甲狀旁腺激素和降低體內PTH分泌；提高體內降鈣素水平；或阻遏破骨細胞體外對骨的重吸收作用以及抑制體內對骨的重吸收作用。
在另一優選實施方案中調控鈣受體的化合物是鈣裂解物，激發甲狀旁腺細胞體外分泌甲狀旁腺激素以及提高體內甲狀旁腺激素水平。
優選地，該化合物選擇性地靶向於特定細胞中無機離子受體活性，更優選的是鈣受體活性。「選擇性地」指給定濃度的該化合物對一種細胞類型上無機離子受體活性的作用比對另一種細胞類型上無機離子受體活性的作用大。優選地，差別效應為10倍或更大。優選地，濃度指血漿濃度，測量的效應是細胞外信使如血漿降鈣素，甲狀旁腺激素或血漿鈣的生產。例如在優選實施方案中，化合物選擇性地靶向於PTH分泌而非降鈣素分泌。
在另一優選實施方案中，該化合物在一種或多種，但非全部下列細胞中的EC50和IC50小於等於5μM甲狀旁腺細胞、破骨細胞、近腎小球腎細胞、近端腎小管腎細胞、遠端腎小管腎細胞、中樞神經系統細胞、外周神經系統細胞、Henle環和/或收集管粗上升支的細胞、表皮的角化細胞、甲狀腺的副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、血小板、血管平滑肌細胞、心房細胞、胃泌素分泌細胞、胰高血糖素分泌細胞、腎小球膜細胞、乳腺細胞、β細胞、脂肪細胞、免疫細胞、胃腸道細胞、皮膚細胞、腎上腺細胞、垂體細胞、下丘腦細胞和後穹窿器官的細胞。更優選地，細胞選自甲狀旁腺細胞、中樞神經系統細胞、外周神經系統細胞、腎中Henle環和/或收集管粗上升支的細胞、甲狀腺的副囊泡細胞(C細胞)、腸道細胞、胃腸道細胞、垂體細胞、下丘腦細胞和後穹窿器官的細胞。物理數據如原位雜交和抗體染色已證實該組細胞中存在鈣受體。
優選地，調控無機離子受體的化合物模擬或阻遏具有無機離子受體的細胞，細胞外離子的作用，從而具有醫療作用。調控無機離子受體的化合物對具有不同類型無機離子受體形態的細胞可以具有相同或不同的作用(例如，具有正常無機離子受體，正常數量的無機離子受體，異常無機離子受體，異常數量的無機離子受體的細胞)。
調控鈣受體的化合物優選地模擬或阻遏細胞外離子在具有鈣受體的細胞上的所有作用。但是鈣模擬物不具有細胞外Ca2+的所有生物活性。相似地，鈣裂解物不能阻遏細胞外鈣造成的所有活性。另外不同的鈣模擬物和不同的鈣裂解物不一定與細胞外Ca2+結合在鈣受體上相同的位點來起作用。
無機調控化合物不需要與天然配體以相同程度或完全相同的形式影響無機受體活性。例如同作用於鈣受體的鈣相比，鈣模擬物可以以不同程度，不同持續時間，結合不同的結合位點或具有不同的親和性來影響鈣受體活性。
A.鈣模擬物(Calcimimetic)1.結構I化合物能夠調控鈣受體活性的結構I化合物(及其藥用鹽及複合物)具有下式 其中Ar1是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙基、亞乙二氧基、優選地每個取代基獨立選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、Cl、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CF3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、NO2、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選地，Ar1是具有1-5個取代基的萘基或苯基。各取代物獨立地選自異丙基、CH3O、CH3S、CF3O、I、Cl、F、CF3、CH3、更優選的是CF3O、I、Cl、F、CF3；Ar2是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基，優選地每個取代物獨立地選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、I、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CF3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、NO2、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選地，Ar2是具有1-5個取代基的萘基或苯基，各取代基獨立地選自異丙基、CH3O、CH3S、CF3O、I、Cl、F、CF3和CH3、更優選的是CF3O、I、Cl、F、CH3O和CF3。
q是0、1、2或3；且R是H或CH3。
「低級烷基」指含有1-4個碳，優選的1-3個碳原子的飽和碳氫化合物，可以是直鏈或支鏈。
「低級烷氧基」指「O-低級烷基」。其中「O」是連接到低級烷基上的氧。
「低級硫代氧基」指「S-低級烷基」。其中「S」是連接到低級烷基上的硫。
「低級滷代烷基」指被至少一個滷素取代的低級烷基。優選地僅是低級烷基的末端碳被滷素取代並且有1-3個滷素。更優選地，低級滷代烷基含1個碳。優選地，滷素取代物為Cl或F。
「低級滷代烷氧基」指「O-低級滷代烷基」。其中「O」是連接到低級滷代烷基上的氧。
a.Ar1和Ar2均為任意取代的苯基在優選實施方案中，Ar1和Ar2均為任意取代的苯基且化合物具有下式 其中R是氫或甲基，m和n各自獨立地是0、1、2、3、4或5；每個X獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙基、亞乙二氧基。優選地每個X獨立地選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、I、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CF3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、NO2、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選地，每個X獨立地選自異丙基、CH3O、CH3S、CF3O、I、Cl、F、CF3和CH3，更優選的是CF3O、I、Cl、F和CF3；每個Z獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基。優選地每個Z獨立地選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、I、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CF3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選地，每個Z獨立地選自異丙基、CH3O、CH3S、CF3O、CF3、I、Cl、F和CH3。
在更優選的實施方案中，至少一個Z取代基在間位。更優選地，該化合物具有下式 其中R是氫或甲基；m是0、1、2、3、4或5，優選的是1或2；每個X獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙基、亞乙二氧基，優選地每個取代基獨立地選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、I、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CF3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、NO2、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選的是異丙基、CH3O、CH3S、CF3O、CF3、I、Cl、F和CH3。
更優選地，該化合物具有下式 其中R是氫或甲基；R1是滷素或氫，優選地，R1是F或氫；R2是氫、滷素、低級烷基、低級滷代烷基、或低級滷代烷氧基、優選地，R2是氫、CF3、CH3、OCF3、或F，而且R3的氫、滷素或烷氧基，優選地，R3是Cl、F、氫或甲氧基，更優選的是甲氧基。
在可選的更優選的組合中；R1、R2和R3中至少兩個是滷素，優選的是F，且R是氫或CH3；R是氫或CH3，R2是低級滷代烷基或低級滷代烷氧基，優選的是OCF3或CF3，且R1和R3是氫；R是CH3，R3是滷素，優選的是Cl，R1是滷素或氫，優選的是F或氫，R2是氫，低級烷基，低級滷代烷基或低級滷代烷氧基，優選的是氫、CF3、CH3、OCF3或F。
b.Ar2是萘基且q是0另一優選實施方案中，Ar2是萘基，q是0，化合物具有下式
其中Ar1是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，每個取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙基、亞乙二氧基，優選地每個取代基獨立地選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、I、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CH3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、NO2、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選地，Ar1是具有1-5個取代基的萘基或苯基，每個取代基獨立地選自異丙基、CH3O、CH3S、CF3、CF3O、I、Cl、F和CH3。
更優選地，Ar1是任意取代的苯基，化合物具有下式 其中Xn表示上述任意取代的苯基的任意取代基(優選的取代基和取代基數目的描述見上)。
更優選地，化合物具有下式 其中R是CH3或氫；R4是低級烷基、滷素或烷氧基、優選地是異丙基，氯或甲氧基；且R5是氫，低級烷基或滷素優選的是甲基、CH3、Br或Cl。
c.Ar2是萘基且q是2在另一優選實施方案中，Ar1是取代苯基，Ar2是萘基，q是2，化合物具有下式
其中R是氫或CH3；n是0、1、2、3、4或5，優選的是1或2；每個X獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙基、亞乙二氧基、優選地每個取代基獨立選自CH3、CH3O、CH3CH2O、亞甲二氧基、Br、Cl、F、I、CF3、CHF2、CH2F、CF3O、CF3CH2O、CH3S、OH、CH2OH、CONH2、CN、NO2、CH3CH2、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基和乙醯氧基。更優選的是異丙基、CH3O、CH3S、CF3O 、CF3、I、Cl、F和CH3。
更優選地，化合物具有下式 其中R6是氫，低級滷代烷基或低級滷代烷氧基、優選的是氫，OCF3或CF3，且R7是滷素或氫，優選的是氯或氫。
在另一實施方案中R，R6和R7如上述(帶有上述優選取代基)，條件是R和R6均為氫，R7不是Cl；以及R是CH3，R6和R7如上述(帶有上述優選取代基)。
2.結構II化合物結構II化合物具有下式 其中Ar3是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，每個取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、N(CH3)2、乙基、亞乙二氧基、優選的是N(CH3)2、低級烷氧基或低級烷基；Ar4是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，每個取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基，優選的是低級烷氧基，更優選的是甲氧基；R8是氫或苯基，優選的是氫；R9是氫或甲基；R10是氫、甲基或苯基，更優選地，當R10是甲基時，其連接的手性碳是(R)立體異構體。
優選地，結構II中的α-甲基是(R)-α-甲基。
3結構III化合物結構III化合物具有下式 其中Ar5是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，每個取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、苄基、苄氧基，α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙基、亞乙二氧基、-CH＝CH-苯基，優選的是低級烷基、苯氧基、-CH＝CH-苯基、二甲基苄基、甲氧基、亞甲基或亞乙基；Ar6是被0至5個取代基任意取代的萘基或苯基，每個取代基獨立地選自乙基、低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、甲酯基、OCH2C(O)C2H5和乙醯氧基，優選的是甲氧基、低級烷基、苯基、滷素、CF3、CN、甲酯基或OCH2C(O)C2H5；R11是氫或甲基；優選地，當R11是甲基時，其連接的碳是(R)立體異構體；且R12是氫或甲基，優選地當R12是甲基時，其連接的碳是(R)立體異構體。
4.鈣模擬物活性用本領域已知的方法可確定化合物模擬Ca2+在鈣受體上的活性的能力，描述見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959。例如在體外甲狀旁腺上檢測時，鈣模擬物具有一種或多種，優選的是全部下述活性1.該化合物導致細胞內鈣濃度快速(到達峰值的時間＜5秒)瞬時增加，對1μM La3+或1μM Gd3+的抑制有抗性。[Ca2+]i的增加在細胞外Ca2+不存在時仍存在，但被離子黴素預處理(細胞外Ca2+不存在)消除；2.該化合物加強了受低於最大濃度的細胞外Ca2+誘發的[Ca2+]i增加；3.細胞外Ca2+誘發的[Ca2+]i增加不受二氫吡啶抑制；4.該化合物造成的[Ca2+]i暫時性增加不能被10mM氟化鈉預處理10分鐘所消除；5.該化合物造成的[Ca2+]i暫時性增加不能被蛋白激酶C(PKC)的激活劑如佛波醇十四乙酯(PMA)，歐亞瑞香脂或(-)-吲哚內醯胺V的預處理所減少。蛋白激酶C激活物的整體效應是使鈣的濃度響應曲線向右移，但不影響最大響應；6.該化合物導致肌醇-1，4，5-三磷酸和/或甘油二酯形成的快速(＜30秒)增加；
7.該化合物抑制多巴胺或異丙基腎上腺素激發的環AMP形成；8.該化合物抑制PTH分泌；9.用百日咳毒素預處理(100ng/ml，＞4小時)阻遏該化合物對環AMP形成的抑制效應，但不影響[Ca2+]i，肌醇-1，4，5-三磷酸，或甘油二酯的增加和PTH分泌的減少；10.該化合物在注射了牛或人甲狀旁腺細胞的poly(A)+富集mRNA的爪蟾卵細胞中引發Cl-流增加，但對注射了水或肝mRNA的爪蟾卵細胞無作用；且11.相似地，使用來自甲狀旁腺細胞的克隆的鈣受體，該化合物將在注射了編碼受體的特定cDNA或mRNA的爪蟾卵細胞中引發應答。
用已知技術可以測量不同的鈣活性。(見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959)。模擬Ca2+在鈣響應性細胞(優選的是鈣受體)上活性的化合物的平行定義由這裡提供的實施例以及Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959中顯而易見。
優選地，用這裡描述的生物試驗或根據Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959測量，該化合物具有一種或多種，更優選的是所有下述活性引發內源鈣的暫時性增加，持續時間小於30秒(優選地通過募集內源鈣)；引發[Ca2+]i快速增加，在30秒內發生；引發[Ca2+]i的持續增加(大於30秒)(優選地通過外源鈣內流)；引發肌醇-1，4，5-三磷酸或甘油二酯水平增加，優選地小於60秒中發生；以及抑制多巴胺或異丙基腎上腺素激發的環AMP形成。i的暫時性增加優選地被10mM氟化鈉預處理細胞10分鐘消除，或者用蛋白激酶C的激活物，優選的是佛波醇十四烷酸乙酯(PMA)，歐亞瑞香脂或(-)-吲哚內醯胺V短暫預處理細胞(不超過10分鐘)所減小。
C.鈣裂解物用根據本發明公開的標準技術可確定該化合物阻遏細胞外鈣在鈣受體上的活性的能力。(也見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959。)例如對甲狀旁腺細胞應用時，阻遏細胞外鈣效應的化合物在體外甲狀旁腺細胞上受檢驗時，具有一種或多種，更優選的是全部下述特徵1.該化合物部分地或完全地阻遏濃度增大的細胞外Ca2+的如下能力(a)增大[Ca2+]i，(b)募集細胞內Ca2+，(c)增加肌醇-1，4，5-三磷酸形成，(d)減少多巴胺或異丙基腎上腺素激發的環AMP形成，和(e)抑制PTH分泌；2.該化合物阻遏注射了牛或人甲狀旁腺細胞的poly(A)+-mRNA的爪蟾卵細胞中受細胞外Ca2+或鈣模擬物化合物引發的Cl-流增加，但注射了水或肝mRNA的爪蟾卵細胞中無這種Cl-流增加；3.相似地，使用來自甲狀旁腺細胞的克隆的鈣受體，該化合物將阻遏注射了編碼受體的cDNA，mRNA或cRNA的爪蟾卵細胞中受細胞外Ca2+或鈣模擬物化合物引發的應答。
阻遏鈣在鈣響應性細胞(優選的是鈣受體)上的作用的化合物的平行定義在本文提供的實施例以及Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959中顯而易見。
III.疾病或失調的治療可通過調控鈣受體活性來治療的疾病或失調在本領域已知。例如根據受鈣受體活性調節的細胞的功能性應答可以鑑定能通過調控鈣受體活性來治療的疾病或失調。受鈣受體調節的細胞的功能性應答在本領域已知，包括甲狀旁腺細胞分泌PTH，C細胞分泌降鈣素，破骨細胞的重吸收作用。
這樣的功能性應答與不同疾病或失調相聯繫。例如甲狀旁腺功能亢進造成的血漿PTH水平升高。降低血漿PTH水平能有效地治療甲狀旁腺功能亢進。類似地，血漿降鈣素水平升高與重吸收作用的抑制相聯繫。抑制骨重吸收作用能有效治療骨質疏鬆。因此，鈣受體活性的調控可用來治療如下疾病如甲狀旁腺功能亢進和骨質疏鬆。
調控無機離子受體活性，優選的是鈣受體活性的化合物可用來為患一系列疾病或失調的患者帶來良好療效。例如，骨質疏鬆是與年齡相關的疾病，其特徵在於骨質量減少，骨折危險增大。化合物可被用來直接(例如一種破骨細胞離子模擬化合物)或通過增加內源降鈣素水平(例如C細胞鈣模擬物)間接地阻遏破骨細胞重吸收作用。可選地，對甲狀旁腺細胞鈣受體有活性的鈣裂解物可以升高甲狀旁腺激素的循環水平，刺激骨形成。所有這三種方法均會給骨質疏鬆患者帶來良好療效。
另外已知間斷的低劑量PTH可以造成骨質的同化效應及相應的骨重建。因此引發甲狀旁腺激素暫時性增加的化合物及劑量方案(例如用甲狀旁腺細胞離子裂解物間斷給藥)能增加骨質疏鬆患者的骨質。
其它疾病或失調的鑑定可通過鑑定與某種疾病或失調相聯繫並受鈣受體活性調節的其它細胞功能性應答來進行。用類似方法可鑑定能通過調控其它無機離子受體來治療的疾病或失調。
本發明的調控無機離子受體的化合物可對一種無機離子受體起作用，產生一種或多種細胞效應，最終產生治療效果。本發明的調控鈣受體的化合物能對鈣受體起作用，產生一種或多種細胞效應，最終產生治療效果。本發明通過靶向於含鈣受體的細胞可治療不同的疾病。
例如原發性甲狀旁腺機能亢進(HPT的特徵是高血鈣和循環PTH水平異常升高。與HPT主要類型相聯繫的缺陷是甲狀旁腺細胞對細胞外Ca2+的負反饋調節敏感性降低。因此在原發性HPT患者的組織中，細胞外Ca2+的「調定點」向右移，需要用高於正常濃度的細胞外Ca2+來抑制PTH分泌。而且在原發性HPT中即使高濃度的細胞外Ca2+經常只能部分地抑制PTH分泌。在繼發性(尿毒)HPT中儘管Ca2+抑制PTH分泌的程度正常但觀察到細胞外Ca2+的調定點類似地變大。PTH分泌的變化與[Ca2+]i的變化相平行受細胞外Ca2+誘導的[Ca2+]i增加的調定點向右移且這種增加的數量級減小。
繼發性HPT患者也可能患腎病性骨營養不良。鈣模擬物看來可用於治療這些患者的異常PTH分泌與骨營養不良。
模擬細胞外Ca2+活性的化合物可用於長時程控制原發性和繼發性HPT。這些化合物提供了抑制PTH分泌需要的但高血鈣不能獨立實現的附加刺激因而有助於緩解高血鈣。效率比細胞外Ca2+高的化合物可能克服甲狀旁腺瘤造成的在原發性HPT主要形式中特別麻煩的PTH分泌中看中看來不可抑制的成分。可選地或附加的，這些化合物能抑制PTH的合成，而長期高血鈣已顯示能抑制牛和人腺瘤的甲狀旁腺組織中早前期PTH mRNA的水平。長期高血鈣還抑制甲狀旁腺細胞的體外增殖，故而鈣模擬物也能有效限制繼發性HPT中甲狀旁腺細胞增生性狀。
除甲狀旁腺細胞的其它細胞能直接對細胞外Ca2+濃度的生理變化應答。例如甲狀腺副囊泡細胞(C細胞)的降鈣素分泌受細胞外Ca2+濃度變化調節。
分離的破骨細胞響應細胞外Ca2+濃度的增加，相應的[Ca2+]i增加部分地來自細胞內Ca2+的募集。破骨細胞中[Ca2+]i增加與骨吸收作用的抑制相聯繫。成骨細胞釋放鹼性磷酸鹽直接受鈣激發。
腎中近腎小球細胞分泌腎素同PTH分泌一樣被細胞外Ca2+濃度增加所抑制。細胞外Ca2+導致這些細胞中細胞內Ca2+的募集。其它腎細胞對鈣的應答如下Ca2+增多抑制近端腎小管細胞的1，25(OH)2-維生素D的形成，激發遠端腎小管細胞中鈣結合蛋白的生產，抑制Ca2+和Mg2+的腎小管重吸收和血管緊張素對Henle環粗上升支(MTAL)的作用，減弱血管緊張素對皮質收集管細胞的作用並且影響腎小球血管中血管平滑肌細胞。
鈣還促進腸道杯狀細胞、乳腺細胞和皮膚細胞的分化；抑制心房分泌心房鈉尿肽；減少血小板中cAMP聚集；改變胃泌素和胰高血糖素的分泌；作用於血管平滑肌細胞來修飾血管活性因子的細胞分泌；並且影響中樞神經系統和外周神經系統的細胞。
因此有足夠證據顯示Ca2+除了有廣泛的細胞內信號作用，還可作為細胞外信號調節某些特化細胞的應答。本發明的化合物可用於治療與這些細胞中受破壞的Ca2+應答相聯繫的疾病或失調。
可以治療或預防的特定的疾病或失調，根據受影響的細胞，還包括中樞神經系統疾病或失調如癲癇發作，中風，頭部外傷，脊髓損傷，低氧誘導的神經細胞損傷如心搏停止或初生苦痛(neonatal distress)，癲癇，退行性神經疾病如老年痴呆症，杭廷頓氏症和帕金森氏症，痴呆，神經緊張，抑鬱，焦慮，恐慌，強迫觀念與行為失調，外傷後緊張症，精神分裂症，惡性精神抑制綜合症，和圖雷特氏綜合症；涉及腎過度重吸收水的疾病如異常ADH分泌綜合症(SIADH)，肝硬變，充血式心力衰竭和腎炎；高血壓，預防和/或降低陽離子抗生素(例如氨糖苷抗生素)的腎毒性；消化道運動疾病如腹瀉和大腸痙攣；胃腸道潰瘍；過度鈣吸收引起的胃腸道疾病如肉樣瘤病；和自體免疫疾病及器官移植排斥。
雖然本發明的調控鈣受體的化合物典型地用於治療人，但也可用來治療其它溫血動物的相似或相同疾病，如其它靈長類動物，家畜如豬，牛，禽類；及競技動物和寵物如馬，狗和貓。
IV.給藥本發明描述的不同化合物可用於通過調控無機離子受體活性，尤其是鈣受體活性來治療不同病症。本發明的化合物可被配製為用於多種方式給藥，如全身和局部或定位給藥。技術與製劑一般可參閱《雷明頓氏醫藥科學》Mack出版公司，Easton，賓州。離子模擬物和離子裂解物的給藥的討論見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959。
適當的劑量形式部分依賴其應用和給藥途徑，例如口服、透皮或注射。無論靶細胞在多細胞宿主還是在培養物中，這種劑量形式均應使化合物到達靶細胞。例如注射入血流的藥物化合物或組合物應當可溶。其它因素在本領域是已知的，包括毒性及阻止化合物或組合物發揮效力的劑量形式等考慮因素。
化合物也可配製成藥用鹽類(例如酸加成鹽)及其複合物。藥用鹽是在其給藥濃度下無毒的鹽。這種鹽的製備物可改變化合物的物理特性而不妨礙它行使其生理功能，從而方便其藥物應用。物理性質的有用變化包括降低熔點以協助跨黏膜給藥，增大可溶性來促進藥物的高濃度給藥。
藥用鹽包括酸加成鹽如含有硫酸鹽、鹽酸鹽、馬來酸鹽、磷酸鹽、磺胺鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、環己基磺胺鹽和奎尼酸鹽的酸加成鹽。(見例如PCT/US92/03736，在此引入作為參考)。藥用鹽可得自如下酸如鹽酸、馬來酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、乙酸、檸檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、環己基氨基磺酸和奎尼酸。
藥用鹽可用標準技術製備。例如，化合物的游離鹼形式溶於含適當酸的合適溶劑，如水或水-酒精溶液，再通過蒸發溶液分離。在另一實施例中通過將游離鹼與有機溶劑中的酸反應來製備鹽。
載體或賦形劑也可用於協助化合物給藥。載體和賦形劑的例子包括碳酸鈣，磷酸鈣，各種糖如乳糖、葡萄糖、或蔗糖或各種類型的澱粉、纖維素衍生物、明膠、植物油、聚乙二醇和生理相容性溶劑。組合物或藥物組合物可用不同途徑給藥，包括靜脈內、腹膜內、皮下和肌肉內，口服，局部或跨黏膜給藥。
全身給藥的方式優選為口服。可選地可以注射，例如肌肉內、靜脈、腹膜內和皮下注射。為進行注射，將本發明化合物配成溶液，優選地用生理相容性緩衝液如Hank’s液或任氏液。另外，化合物可配成固體形式，使用前重新溶解或懸浮。也可製成冰凍乾燥形式。
全身給藥也可用跨黏膜或透皮方式，或者將化合物口服。對於跨黏膜或透皮給藥，在製劑中用與待滲透的屏障相適應的滲透劑。這種滲透劑一般在本領域已知，包括例如用於跨黏膜給藥的膽酸鹽和梭鏈孢酸衍生物。另外去汙劑可用來協助滲透。跨黏膜給藥可用例如鼻腔噴劑或栓劑。對口服給藥，化合物可配成常規的口服劑量形式如膠囊，片劑和液體製劑。
對於局部給藥，本發明的化合物可配製成油膏、藥膏、凝膠或霜劑，這在本領域是已知的。
本發明的各種化合物的給藥量用標準操作方法確定。一般來說，治療有效量是約1納摩爾至1微摩爾化合物，優選的是0.1納摩爾和1微摩爾，這依賴其EC50和IC50及患者的年齡與體形及與患者有關的疾病或失調。通常對接受治療的動物，該劑量在0.1至50mg/kg之間，優選的是0.01至20mg/kg受治療的動物。
V.實施例下面提供實施例以闡明本發明的不同方面與實施方案。這些實施例不是用來限制本發明的。
實施例1從人甲狀旁腺瘤複製人甲狀旁腺鈣受體本實施例描述用pBoPCaR1作雜交探針從人甲狀旁腺瘤複製人甲狀旁腺鈣受體(見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO94/18959)。在弱嚴謹條件下用探針交叉雜交鑑定編碼人甲狀旁腺鈣受體的核酸。
從診斷患有原發性甲狀旁腺功能亢進的39歲白種男子取出的人甲狀旁腺腺瘤製備信使RNA。用pBoPCaR1作雜交探針Northern印跡分析該mRNA鑑定到約5Kb和約4Kb的鈣受體轉錄物。從該mRNA構建cDNA文庫。在瓊脂糖凝膠上根據大小選擇大於3Kbp的雙鏈cDNA，連到克隆載體λZapII中。用pBoPCaR1的5.2Kbp cDNA插入序列作雜交探針篩選50萬個初級重組噬菌體。用[32P]-dCTP隨機啟動合成來標記pBoPCaR1插入序列至比活為1×109cpm/μg。
篩選文庫時的雜交嚴謹性為38℃400mM Na+，50％甲醛。將噬菌斑提升濾膜(plaque lift filter)用濃度為500,000cmp/ml的探針雜交20小時。然後用1×SSC 40℃洗1小時。
通過與pBoPCaR1雜交初次篩選得大約250個陽性克隆。其中7個經過二次篩選和三次篩選分離到與pBoPCaR1探針雜交的單克隆。這7個克隆作限制酶圖譜和Southern印跡分析。3個克隆含約5Kbp的cDNA插入序列，看來對應於5Kb mDNA的全長克隆。2個克隆含約4Kbp的cDNA插入序列，看來對應4Kb mRNA的全長克隆。
兩個不同大小插入序列的限制酶圖譜顯示它們在5′端有相似序列區，但其3′端序列不同。DNA序列分析顯示小的插入序列可能是由於在大插入序列所用的多聚腺苷化位點上遊的可選多聚腺苷化。
兩種大小的代表性cDNA插入序列被亞克隆至質粒載體pBluescript8K。線性化後用T7RNA聚合酶生產的cRNA轉錄物作體外轉錄。將cRNA轉錄物注射入爪蟾卵細胞(150ng/μl RNA；50nl/卵細胞)作功能分析。溫育2-4天後檢測卵細胞中是否存在有功能的鈣受體。加入適當鈣受體激動劑激發鈣激活的Cl-流，檢測到兩種克隆類型均有有功能的鈣受體。已知的鈣受體激動劑，包括NPS R-467和NPS R-568(見Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959)，激活卵細胞表達的受體的濃度與激活天然甲狀旁腺受體的有效濃度幾乎相同。因此兩種克隆均編碼有功能的人甲狀旁腺鈣受體。
將每種大小的插入序列亞克隆至pBluescript中製備得質粒pHuPCaR5.2和pHuPCaR4.0。插入序列的核酸序列和胺基酸序列由SEQID NO1和2給出。
在兩種cDNA插入序列的核酸序列中觀察到幾處不同。兩種cDNA插入序列的序列分析顯示在3′非翻譯區存在至少兩段序列差異，這可能由於可選的多聚腺苷化。另外插入序列5′端有序列差異。這些不同序列對應非翻譯區，可能是由於有不同的轉錄起始和/或拼接。
在cDNA克隆pHuPCaR5.2和pHuPCaR4.0(見SEQ.ID.NO.1和2)的編碼區中觀察到三處附加的序列差異位點，顯示這些cDNA克隆編碼不同蛋白。人CaR基因序列分析顯示cDNA克隆pHuPCaR5.2比pHuPCaR4.0cDNA克隆多出的30個鹼基對來自不同的mRNA拼接。不同mRNA拼接預示在pHuPCaR5.2cDNA編碼的CaR多肽對應於pHuPCaR4.0cDNA編碼的多肽胺基酸#536和#537位點插入10個附加的胺基酸。另外pHuPCaR4.0在胺基酸#925處編碼谷醯胺(Gln)，在990位編碼甘氨酸(Gly)，而pHuPCaR5.2在兩個等價的位點均編碼精氨酸(Arg)。人CaR基因在這些位置分別編碼Gln和Arg。pHuPCaR4.0cDNA與人DNA的差異看來代表人類群體中真實的序列多態性，而pHuPCaR5.2中單鹼基變化可能反映其克隆時的突變。兩種cDNA均編碼有功能的鈣受體，這通過在測量Cl-電導時注射了由這些cDNA克隆製備的cRNA的爪蟾卵細胞均響應細胞外鈣可知。不過也可能這兩種受體的功能和/或藥理上不同。
實施例2.選擇表達鈣受體的穩定的重組細胞分離到穩定表達兩種人鈣受體和牛鈣受體的克隆細胞系。鈣受體cDNA被亞克隆到兩種不同的可購得的表達載體；pMSG(得自Pharmacia)和Cep 4B(得自Invitrogen)中。第一個載體含有黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶(gpt)的可選擇標記基因，穩定轉化的細胞可越過添加2μg/ml氨基喋呤和25μg/ml黴酚酸造成的嘌呤生物合成途徑屏障。第二個載體編碼潮黴素(200μg/ml)抗性基因。用Not I和Hind III限制酶從母體pBluescript質粒中移出HuPCaR5.2和HuPCaR4.0cDNA(分別為SEQ ID NO1和2)，然後直接連接到用Not I+Hind III消化的Cep4B中或用DNA聚合酶的Klenow片段處理後平末端連接至Sma I消化的pMSG中。
如上述含HuPCaR5.2插入序列的pMSG亞克隆被轉染至CHO細胞中。篩選出20個抗性克隆，然後表徵。如上述，含HuPCaR5.2插入序列的Cep4B亞克隆被轉染至HEK293細胞中。用潮黴素篩選得到穩定的克隆庫。類似地製備表達HuPCaR4.2受體同功型的克隆。
從潮黴素篩選的HEK 293細胞庫中得到的細胞用含HuPCaR5.2插入序列的Cep4B轉染，再鋪到放在12孔組織培養平板各小孔中的膠原包被的AKlar小塊上。2-6天後除去培養基，用平衡的鹽溶液和1ml含1μMfura2-AM，1mM CaCL2和0.1％BSA，1mM CaCl2的緩衝液洗細胞。37℃下用螢光光度計測量對鈣受體激動物應答的螢光，激發和發射波長分別為340nm和510nm。信號標定時加入離子黴素(40μM)確定Fmax，加入0.3M EGTA，2.5M Tris HCl，pH10確定表觀Fmin。作為加入下述鈣受體激動物Ca2+(10mM)，Mg2+(20mM)和NPS R-467後的響應，觀察到[Ca2+]i活躍增加。表達有功能的物質K受體的對照細胞不對這些鈣模擬物化合物進行應答。
得到用pHuPCaR4.0序列轉染的HEK 293細胞的另外的克隆分離物。如上述分離淨化其對鈣模擬物的應答，只是這些細胞在懸液中受試。
實施例3用加載fura-2的甲狀旁腺細胞測量鈣受體活性本小節描述從牛和人得到甲狀旁腺細胞以及用甲狀旁腺細胞測量鈣受體活性的方法。
從附近屠宰場新宰殺的牛(12-15周大)中得到甲狀旁腺，裝在含(mM)NaCl，126；KCl，4；MgCl2，1；Na-HEPES，20；pH7.4；葡萄糖，5.6；和可變量的CaCl2(例如1.25mM)的冰冷甲狀旁腺細胞緩衝液(PCB)中運至實驗室。從由於原發性或尿素性甲狀旁腺功能亢進(尿素HPT)接受甲狀旁腺組織手術摘除的患者得到人甲狀旁腺，與牛組織一樣處理。
將腺體除去多餘脂肪和結締組織，再用小剪刀剪成邊長約2-3mm的小方塊。用膠原酶消化製備解離的甲狀旁腺細胞，然後在Percoll緩衝液中離心純化。得到的甲狀旁腺細胞製備物基本不含血紅細胞，脂肪細胞，和毛細組織；檢驗方法是相差顯微法和蘇丹黑B染色。解離並純化的甲狀旁腺細胞是含5到20個細胞的小簇(cluster)。用錐蟲蘭或溴乙錠的排除作標示的細胞存活率通常為95％。
雖然此時細胞可用於實驗，但還是應當將細胞培養過夜後確定其生理應答(例如PTH分泌的抑制能力和[Ca2+]i的靜息水平)。原代培養物還有一個優點，即細胞用放射性同位素可標記至同位素平衡，這對涉及測量肌醇磷酸鹽代謝的研究十分必要。
在Percoll梯度純化後，用1∶1的補充了50μg/ml鏈黴素，100U/ml青黴素，5μg/ml慶大黴素的Ham’s F12 Dulbecco’s改性Eagle’s培養基(GIBCO)和ITS+混合物洗幾次細胞。ITS+是含有胰島素，轉鐵蛋白，硒，和牛血清清蛋白(BSA)-亞麻酸的預混的溶液(CollaborativeResearch，Bedford，麻省)。然後將細胞轉移至塑料燒瓶(75或150cm2；Falcon)中，37℃在含5％CO2的潮溼空氣中溫育過夜。在過夜培養物中不添加血清，因為血清會使細胞附在塑料上增殖並脫分化。上述條件下培養的細胞脫水後可以方便地從燒瓶中取出並且與新鮮製備的細胞有相同的存活力。
將純化的甲狀旁腺細胞重懸於含1μM fura-2-乙醯氧基甲酯的1.25mM CaCl2-2％BSA-PSB中，37℃溫育20分鐘。然後使細胞沉澱，重懸於缺少酯的相同緩衝液中，37℃再溫育15分鐘。用含0.5BSA和0.5mM CaCl2的PCB洗兩次，保存於室溫(約20℃)中。使用前將細胞用預熱的0.5mM CaCl2-PCB稀釋5倍，得到的BSA的終濃度為0.1％。用於螢光記錄的小杯中的細胞濃度為1-2×106/ml。
在37℃下用裝備了耐熱杯架和磁力攪拌器的螢光光度計(Biomedical Instrumentation Group，賓州大學，費城，賓州)測量加載了指示劑的細胞的螢光激發和發射波長分別為340nm和510nm。該螢光顯示細胞液中Ca2+水平。用毛地黃皂苷(50μg/ml，終濃度)標定螢光信號以得到最大螢光(Fmax)，用EGTA(10mM，pH8.3，終濃度)得到最小螢光(Fmin)，以及224nm的離解常數。染料洩漏依賴於溫度，大多發生在加熱小杯中的細胞後前兩分鐘。此後染料洩漏增加很慢。為了較正對染料洩漏的標定，將細胞置於小杯後攪拌2-3分鐘。然後除去細胞懸液，沉澱細胞，將上清放回清潔的小杯中。用毛地黃皂苷和EGTA處理上清，估計染料洩漏的為全部Ca2+依賴性螢光信號的10-15％。從表觀Fimn中減去該估計值。
實施例4用加載Fura-2的HEK 293/pHuPCaR 4.0細胞測量鈣受體活性本小節描述用加載Fura-2的HEK 293/pHuPCaR 4.0細胞測量鈣受體活性的方法。將pHuPCaR 4.0轉染的HEK 293細胞在用含5μM fluo-3/AM的20mM HEPES緩衝的Dulbecco’s改性Eagle’s培養基中室溫溫育1小時，加載上fura-2。然後用含1mM CaCl2和1mM MgCl2的20mM HEPES緩衝的Hank’s平衡的鹽溶液洗滌。再將待檢驗化合物加到細胞中，測量螢光(激發和發射波長分別為340和510nm)。
實施例5測量化合物調控鈣受體活性的能力用加載fura-2的被編碼pHuPCaR4.0的核酸轉染的HEK293細胞或用加載了fura-2的甲狀旁腺細胞檢測其中[Ca2+]i增加來檢測不同化合物調控鈣受體活性的能力。不同實驗的結果由表1.a，1.b.1，1.b.2，1.c和2總結。表1.a，1.b.1，1.b.2，1.c總結了根據實施例4的描述(即用加載了fura-2的被編碼pHuPCaR 4.0的核酸轉染的HEK 293細胞)檢測的不同濃度的各化合物對鈣受體活性的作用。
表2總結了不同實驗的結果，其中EC50對加載了fura-2的甲狀旁腺細胞或HEK 293/pHuPCaR 4.0計算。細胞如實施例2(對甲狀旁腺細胞)或實施例3(對HEK 293/pHuPCaR 4.0細胞)的描述加載fura-2並試驗。
表1.a.在表達人鈣受體的HEK 293細胞中在3.3ng/ml時產生超過40％的應答的鈣模擬物化合物
表1b.1在表達人鈣受體的HEK 293細胞中在33ng/ml時產生超過40％應答的鈣模擬物化合物
表1.b.2在表達人鈣受體的HEK 293細胞中在330ng/ml時產生超過40％的應答的鈣模擬物化合物
表1.c.在表達人鈣受體的HEK293細胞中在3.3ng/ml時產生超過40％應答的鈣模擬物化合物
表2圖1的芳基烷基胺鈣模擬物在體外對甲狀旁腺細胞鈣受體的活性(EC50≤5μM)
實施例6-17化合物的合成本文描述的化合物可用標準技術合成，描述見如Nemeth等，PCT/US93/01642，國際出版號WO 94/18959。下面提供的實施例描述了文中涉及的化合物的代表性合成。
化合物9R，14U和17P的合成是通過將購置的醛或酮用伯胺在氰硼氫化鈉或三乙醯氧基硼氫化鈉存在下進行還原性胺化製備的。化合物11Y、12H、12K、12M、14S、14T、16L-0、17E、17G、17J、24X、24Y、25A、25E-25K和25O用類似方法製備。
發現在合成這三種化合物(9R，14U和16P)時用三乙醯氧基硼氫化鈉得到需要的非對映異構體，其非對映異構選擇性大於氰硼氫化鈉。富集的混合物進一步用正相HPLC或從有機溶劑中重結晶而被純化成單個非對映異構體。
化合物8J、8U、11X、17M和25Y是通過將伯胺與醛或酮在異丁氫基鈦(IV)存在下縮合製備的。得到的中間體亞胺被氰硼氫化鈉，硼氫化鈉或三乙醯氧基硼氫化鈉作用而被原位(insitu)還原。化合物8U合成用的中間體enamine用二氫氧化鈀在碳上催化還原。
化合物12U，12V和12Z用胺與腈的二異丁基鋁氫化物(DIBAL-H)介導的縮合反應製備。得到的中間體亞胺被氰硼氫化鈉或硼氫化鈉原位還原。中間體鏈烯(化合物12U和12V)在EtOH中用碳上的鈀催化氫化。用游離鹼與揮發HCl作用得到白色固體，將化合物轉化成其鹽酸鹽。
這些合成中的胺購自Aldrich化學品公司，Milwaukee，WI或Celgene公司，Warren，N.J.或用標準技術合成。所有其它試劑均購自Aldrich化學品公司。
實施例6化合物25Y的合成N-(3-(2-苯基)丙基)-1-(1-萘基)乙胺室溫攪拌3-苯基-1-丙胺(135mg，1mmol)，1′-乙醯萘酮(170mg，1mmol)和異丙氧基鈦(IV)(355mg，1.3mmol)的混合物1小時。用1M乙醇化氰硼酸鈉(1mL)處理產生反應，室溫攪拌16小時。用醚稀釋反應物再用水處理(0.1mL)。將反應物離心，除去醚層，濃縮成乳狀油。一小部分該物質用含0.1％。異丙胺的二氯甲烷至二氯甲烷中含10％甲醇的梯度HPLC(Phenomenex，1.0×25cm，5μM矽石)純化。用GC/El-MS測得產物(游離鹼)是單一組分(Rt＝10.48分)m/Z(相對強度)289(M+，11)，274(63)，184(5)，162(5)，155(100)，141(8)，115(8)，91(45)，77(5)。
實施例7化合物8J的合成N-(3-苯基丙基)-1-(3-硫甲基苯基)乙胺鹽酸鹽將3′-氨基乙醯苯(2.7g，20mmol)溶於4mL濃縮HCl，4g冰和8mL水中。溶液冷卻至0℃，亞硝酸鈉(1.45g，21mmol)溶於3-5ml水，加入溶液中超過5分鐘，維持溫度低於6℃。將硫代甲醇鈉(1.75g，25mmol)溶於5mL水，冷卻至0℃。將重氮鹽加入該溶液超過10分鐘，維持溫度低於10℃。將反應物攪拌1小時，溫度升至與環境相同。反應混合物合成醚和水層。將醚層分離出來，用碳酸鈉和氯化鈉洗滌，用硫酸鈉乾燥。醚揮發後得到74％產率的3′-硫甲基乙醯苯。減壓蒸餾純化粗提物質。
3-苯基丙胺(0.13g，1mmol)，3′-硫甲基乙醯苯(0.17g，1mmol)和異丙醇鈦(IV)(0.36g，1.25mol)混合放置4小時。加入乙醇(1mL)和氰硼氫化鈉，將反應物攪拌過夜。加入4ml和200μL水引發反應。將混合物旋渦振蕩，然後離心分離出固體。醚層從沉澱物中分開，真空除去溶劑。油重新溶於二氯甲烷，用製備型TLC在矽膠上純化化合物，用3％甲醇/二氯甲烷洗脫得到純油質的標題化合物GC/EI-MS(Rt＝7.64分鐘)m/Z(相對強度)285(M+，18)，270(90)，180(17)，151(100)，136(32)，104(17)，91(54)，77(13)。
實施例8化合物8U的合成N-3-(2-甲氧苯基)-1-丙基-(R)-3-甲氧基-α-甲基苄胺鹽酸鹽室溫下攪拌(R)-(+)-3-甲氧基-α-甲基苄胺(3.02g，20mmol)，2-甲氧基肉桂醛(3.24g，20mmol)和異丙醇鈦(IV)(8.53g，30mmol，1.5Eq.)的混合物2小時，用1M(20mL)乙醇化氰硼氫化鈉處理。將反應物攪拌過夜(16小時)，用二乙醚稀釋，再用水(1.44mL，80mmol，4Eq.)處理。混合1小時後，將反應混合物離心，去除醚層，濃縮成油。將該物質重溶於冰醋酸，加氫氧化鈀搖動，再在室溫下60磅氫中氫化。過濾除去催化劑，將得到的溶液濃縮成稠油。該物質重溶於二氯甲烷，用1NNaOH中和。從水相中分離出二氯甲烷溶液，通過無水碳酸鉀乾燥，濃縮成油。將該物質重溶於醚，用二乙醚中的1M HCl處理。收集得到的沉澱物，用二乙醚清洗，在空氣中乾燥。該物質(游離鹼的GC/EI-MS(Rt＝9.69分鐘)顯示出單一組分m/Z(相對強度)299(M+，21)，284(100)，164(17)，150(8)，135(81)，121(40)，102(17)，91(43)，77(18)。
實施例9化合物9R的合成(R)-N-(1-(2-萘基)乙基)-(R)-1-(1-萘基)乙胺鹽酸鹽(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺(10.0g，58mmol)，2′-乙醯萘(9.4g，56mmol)，異丙醇鈦(IV)(20.7g，730mmol)和EtOH(無水)(100mL)加熱至60℃3小時。然後加入氰硼氫化鈉(NaCNBH3)(3.67g，58.4mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時。將醚(1L)和H2O(10mL)加入反應混合物，離心除去得到的沉澱。上清在真空下蒸發，用熱己烷將粗產品重結晶4次，得到1.5g純(98+％)非對映異構體。將游離鹼溶於己烷，過濾，加入發煙HCl，沉澱產物為白色固體(1.1g，6％產率)，熔點200-240℃軟化(dec.)。
實施例10化合物11X的合成N-(4-異丙基苯基)-(R)-1-(1-萘基)乙胺鹽酸鹽(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺(1.06g，6.2mmol)，4-異丙基苯甲醛(0.92g，6.2mmol)和異丙醇鈦(IV)(2.2g，7.7mmol)的混合物加熱至100℃5分鐘，然後在室溫下攪拌4小時。加入氰硼氫化鈉(NaCNBH3)(0.39g，6.2mmol)，再加EtOH(1mL)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時。將醚(100mL)和H2O(1mL)加入反應混合物中，離心除去得到的沉澱。上清在真空下蒸發，粗提產品在矽膠上層析(50mm×30cm柱)(用1％MeOH(CHCl3)洗脫)，層析後的物質重溶於己烷，加入發煙HCl，沉澱產物為白色固體(0.67g，35％產率)，熔點257-259℃。
實施例11化合物12U的合成N-3-(2-甲基苯基)-1-丙基-(R)-3-甲氧基-α-甲基苄胺鹽酸鹽將2-甲基肉桂腈(1.43g，10mmol)在二氯甲烷中(10mL)的溶液冷卻至0℃，滴加(15分鐘)1M二異丁基鋁氫化物(10mL，二氯甲烷)處理。將反應物在0℃下攪拌15分鐘，滴加(15分鐘)二氯甲烷(10mL)中1M(R)-(+)-3-甲氧基-α-甲基苄胺(1.51g，10mmol)處理。將反應物在0℃下攪拌1小時，倒入含氰硼氫化鈉(1g，16mmol)的乙醇(100mL)溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌48小時。反應物用醚稀釋，用1N NaOH中和。移去醚層，用無水碳酸鉀乾燥，濃縮成油。該物質在矽石上用二氯甲烷至二氯甲烷中含5％甲醇的梯度層析。得到不飽和中間體，GC/El-MS(Rt＝10.06分鐘)為單一組分。m/Z(相對強度)281(M+，17)，266(59)，176(19)，146(65)，135(73)，131(100)，91(21)，77(13)。
將乙醇化的不飽和中間體在碳披鈀存在時在室溫下氫化16小時。將該反應的產物用二乙醚中的1M HCl處理，轉化成鹽酸鹽。該物質的GC/El-MS(Rt＝9.31分鐘)顯示出單一組分m/Z(相對強度)283(M+，21)，268(100)，164(12)，148(8)，135(85)，121(12)，105(49)，91(23)，77(21)。
實施例12化合物12V的合成N-3-(3-甲基苯基)-1-丙基-(R)-3-甲氧基-α-甲基苄胺鹽酸鹽該化合物的製備按照實施例11的方法進行，但用的是2-甲基肉桂腈。不飽和中間體用GC/EI-MS(Rt＝10.21分鐘)為單一組分m/Z(相對強度)281(M+，57)，266(86)，146(98)，135(88)，131(100)，115(43)，102(26)，91(43)，77(18)。用實施例11的方法還原該物質並形成鹽酸鹽，得到產物。該物質(游離鹼)的GC/EI-MS(Rt＝9.18分鐘)顯示為單一組分m/Z(相對強度)283(M+，19)，268(100)，164(11)，148(8)，135(76)，121(16)，105(45)，91(23)，77(21)。
實施例13化合物12Z的合成N-3-(2-氯苯基)-1-丙基-(R)-1-(1-萘基)乙胺鹽酸鹽該化合物的製備按照實施例11的方法進行，但用的是10mmol重級的2-氯氫化肉桂腈和(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺。用二氯甲烷至二氯甲烷中含5％甲醇的梯度通過矽石進行層析，得到產物，TLC分析(二氯甲烷中含5％甲醇)為單一組分。用二乙醚中1M HCl處理製備得鹽酸鹽。
實施例14化合物14U的合成(R)-N-(1-(4-甲氧基苯基)乙基)-(R)-1-(1-萘基)乙胺鹽酸鹽(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺(1.1g，6.2mmol)，4′-甲氧基乙醯苯(0.93g，6.2mmol)，異丙醇鈦(IV)(2.2g，7.7mmol)和EtOH(無水的)(1mL)的混合物加熱至60℃3小時。然後加入氰硼氫化鈉(NaCNBH3)(0.39g，6.2mmol)，將反應混合物在室溫下攪拌18小時。將醚(200mL)和H2O(2mL)加入反應混合物中，離心除去得到的沉澱。將上清在真空下蒸發，粗提產品在矽膠上層析(25mm×25cm柱)(用1％MeOH/CHCl3洗脫)。將該物質的一部分用HPLC層析[Selectosil，5μM矽膠；25cm×10.0mm(Torrence，加州)，4mL每分鐘；UV檢測275nM；12％乙酸乙酯-88％己烷(洗脫時間12.0分鐘)]。HPLC純化的非對映異構體再溶入己烷中，加入發煙HCl，沉澱產物為白色固體(20mg)，熔點209-210℃(dec.)。
實施例15化合物17M的製備N-(3-氯-4-甲氧基苄基)-(R)-1-(1-萘基)乙胺鹽酸鹽(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺(6.6g，39mmol)，3′-氯-4′-甲氧基苯甲醛(16.6g，39mmol)，和異丙醇鈦(IV)(13.8g，48.8mmol)和EtOH(無水)(30mL)的混合物加熱至80℃30分鐘，然後在室溫下攪拌3小時。再加入氰硼氫化鈉(NaCNBH3)(2.45g，39mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌18小時。將醚(100mL)和H2O(2mL)加入反應混合物，離心除去得到的沉澱。上清在真空下蒸發，粗提產品在矽膠上層析(50mm×30cm柱)(用CH2Cl2洗脫)。層析的物質再溶於己烷(500mL)，用Norit@過濾(0.2μM)脫色，然後加發煙HCl，沉澱產物為白色固體(10.2g，56％產率)，熔點241-242℃(dec.)。
實施例16化合物17P的合成4-甲氧基-3-甲基乙醯苯[17P前體]
4′-羥基-3′-甲基乙醯苯(5.0g，33.3mmol)，碘甲烷(5.7g，40.0mmol)，K2CO3(顆粒狀，無水)(23.0g，167mmol)和丙酮(250mL)的混合物回流3小時。將反應混合物冷卻至室溫，過濾除去無機鹽，真空下蒸發，粗提產品溶於醚(100mL)，用H2O(2×20mL)洗。將有機相干燥(Na2SO4)後蒸發得4.5g，82.4％產率。該酮用於下述反應，不需進一步純化。
(R)-N-(1-(4-甲氧基-3-甲基苯基)乙基)-(R)-1-(1-萘基)乙胺鹽酸鹽[化合物17P](R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺(4.24g，24.8mmol)，4′-甲氧基-3′-甲基乙醯苯(4.06g，24.8mmol)，異丙醇鈦(IV)(8.8g，30.9mmol)和EtOH(無水)(1mL)的混合物加熱至100℃2小時。加入異丙醇(45mL)，將反應物冰浴冷卻至10℃。然後分若干部分加入三乙醯氧硼氫化鈉(NaHB(O2CCH3)3)(10.5g，49.5mmol)共15分鐘。再將反應混合物加熱至70℃18小時。將混合物冷卻至室溫，加入醚(400mL)。離心懸浮液，收集上清，用醚(400mL)洗滌沉澱物。混合的有機洗滌液在真空下蒸發。殘餘物重溶入醚(400mL)中，用1N NaOH(4×50mL)和H2O(2×50mL)洗滌。將有機層乾燥(Na2SO4)，過濾，真空蒸發。將EtOH(無水)加入溼的殘餘物中，然後旋轉蒸發器徹底乾燥得到油狀物。將混合物在矽膠上層析(50mm×30cm)[用(1％MeOH∶1％IPA∶CHCl3洗脫)。得48g油]。
所需的非對映異構體進一步用HPLC層析純化[SUPELCOSILTMPLC-S，18μM矽膠；25cm×21.2mm(Supelco，Inc.Bellefonte，賓州)，7mL每分鐘；UV檢測275nM；20％EtOAc-80％己烷(洗脫時間9.5-11.0分鐘；UV檢測275nM；20％EtOAc-80％己烷(洗脫時間9.5-11.0分鐘)]。該混合物(洗脫劑中100mg/mL溶液)的注射(800μL等分試樣)給出65mg所需異構體。多次HPLC注射得到1.0g純化物質。HPLC層析的物質溶於己烷(50mL)，用發煙HCl沉澱得到鹽酸鹽。用燒結玻璃收集該鹽，用己烷洗滌，得到1.0g白色固體，熔點204-205℃。
實施例17化合物17X的合成3-氯-4-甲氧基苯甲醛3-氯-4-羥基苯甲醛(25g，160mmol)，碘甲烷(27.25g，192mmol)，K2CO3(顆粒狀，無水)(110.6g，800mmol)和丙酮(300mL)的混合物回流3小時。反應混合物然後被冷卻至室溫。加入二乙醚(500mL)，用紙將混合物過濾除去無機鹽。濾過物減壓蒸發，溶於二乙醚(800mL)，用0.1N NaOH(3×100mL)洗。將有機層乾燥(Na2SO4)後真空蒸發得到24g，92％產率的粗提產物。將該物質進一步用矽膠(50mm×30cm)層析純化(用己烷-EtOAc，5∶1洗脫)得到15.02g，56％產率的白色固體TLC(己烷-EtOAc，5∶1)Rf＝0.24；GC Rt＝4.75分鐘；MS(EI)m/Z 170(M+)，172(M+2)。
1-甲基-(3′-氯-4′-甲氧基苄基)乙醇將3-氯-4-甲氧基苯甲醛(13g，76.5mmol)，甲基氯化鎂(52g，153mmol)和THF(300mL)的混合物回流3小時。將反應混合物冷卻至室溫。滴加NH4Cl(飽和溶液，6mL)再加入二乙醚(500mL)，用紙將混合物過濾除去無機鹽。將濾過物減壓蒸發，得到的固體溶於二乙醚(300mL)，水洗(4×25mL)。將有機層乾燥(Na2SO4)，真空下蒸發，得到11.3g，80％產率的粗提產物。該物質進一步用矽膠(50mm×30cm)層析(用CH2CH2洗脫)純化得11.3g，63％產率的油；TLC(CH2Cl2)Rf＝0.25；GC Rt＝5.30分鐘；MS(EI)m/Z 186(M+)，188(M+2)。
3′-氯-4′-甲氧基乙醯苯1-甲基-(3′-氯-4′-甲氧基苄基)乙醇(7.6g，41mmol)，氯鉻酸吡啶-(PCC)(13.16g，61.5mmol)和CH2Cl2(300mL)的混合物在室溫下攪拌2小時。加入二乙醚(1000mL)，得到的混合物置於矽膠層析柱(50mm×30cm)(用二乙醚洗脫)得到7.3g，97％產率的粗固體產物。該物質的GC分析顯示其純度為99％，用於下列反應時無需進一步純化。TLC(二乙醚)Rf＝1.0；GC Rt＝5.3分鐘；MS(EI)m/Z 184(M+)，184(M+2)。
(R，R)-N-(1-乙基-4′-甲氧基-3′-氯苯基)-1-(1-萘基乙基)胺將3′-氯-4′-甲氧基乙醯苯(5.3g，29mmol)，(R)-(+)-1-(1-萘基)乙胺(4,98g，29mmol)，異丙醇鈦(IV)(10.2g，36mmol)和異戊醇的混合物加熱至100℃3小時。三乙醯氧基硼氫化鈉(NaB(O2CCH3)3；12.29g，58mmol)分若干部分加入10分鐘。反應混合物加熱回流30分鐘然後在室溫下攪拌18小時。將混合物倒入二乙醚(500mL)；加入H2O(2mL)，離心懸浮液除去鈦鹽的微小沉澱物。收集上清，用醚洗沉澱(500mL)。混合有機層乾燥(Na2SO4)後真空蒸發得到6.81g，70％產率的粗提產品。
將該物質用矽膠(50mm×30cm)層析(用3％MeOH-97％CH2Cl2洗脫)進一步純化得到2.01g油。通過重結晶進一步純化該非對映異構體。用發煙HCl將游離鹼(1.98g)轉化成其HCl鹽。該鹽溶於熱的異丙醇(65mL)，用紙將溶液過濾。將濾過物真空乾燥，得到的固體溶於異丙醇(30mL)。室溫放置18小時後，收集結晶固體，用冷異丙醇(20mL)洗，乾燥得到0.87g，40％(來自游離鹼)的非對映異構體的純鹽酸鹽熔點236-2371/2℃(dec)；TLC(MeOH-CH2Cl2[99∶1])Rf＝0.25；GC Rt＝11.06分鐘；FTIR(KBr沉澱，cm-1)3433，2950，2931，2853，2803，2659，2608，2497，1604，1595，1504，1461，1444，1268，1260，1067，1021，802，781，733；MS(EI)m/Z 339(M+)，341(M+2)。
實施例18另外的合成方案22Z和23A的製備向二甲基甲醯胺(100mL)中氫化鈉(2.173g，在油中60％，54.325mmol)的攪拌溶液中滴加磷酸三乙酯(12.47g，55.65mmol)，室溫下攪拌30分鐘。然後滴加二甲基甲醯胺(50ml)中m-三氟甲氧基苯甲醛(10.0g，52.6mmol)溶液，然後將溶液在室溫下攪拌30分鐘，100℃攪拌30分鐘。加入水淬滅反應，用二乙醚(500mL)轉移到另一漏鬥中。醚溶液用飽和氯化銨(4×500ml)洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濃縮得油狀乙基m-三氟甲氧基肉桂酸酯；m/Z(相對強度)260(M+，19)，232(16)，215(100)，187(21)，101(28)。
將乙醇(100ml)中的乙酯用催化量(10％重量)的氫氧化鈀在60磅氫中還原。還原(2小時室溫下)後，將反應物過濾，濃縮得到油狀乙基m-三氟甲氧基氫化肉桂酸m/Z(相對強度)262(M+，16)，217(7)，188(100)，175(28)，103(31)，91(18)，77(23)。
將飽和乙酯在室溫下在乙醇-10M氫氧化鈉(1∶1)溶液中水解16小時。然後酸化溶液，將產物抽提進二乙醚。醚溶液在無水磷酸鎂上乾燥，濃縮得到固體m-三氟甲氧基氫化肉桂酸m/Z(相對強度)234(M+，46)，188(100)，174(65)，103(27)，91(12)，77(17)。
在過量巰基氯(thionyl chloride)中在室溫下攪拌酸4小時。減壓(100℃)蒸發過量的巰基氯，得到油狀m-三氟甲氧基氫化肉桂基氯。產物無需進一步純化即可使用。
將四氫呋喃中m-三氟甲氧基氫化肉桂基氯(9.8g，39mmol)的溶液冷卻至-78℃，滴加溴化甲基鎂(39mmol)溶液(3M 13mL，在四氫呋喃中)。將反應物在-78℃下攪拌4小時，在室溫下攪拌8小時，然後用稀HCl淬滅。反應混合物用二乙醚抽提。將醚用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濃縮成油。用己烷至丙酮的梯度對該物質用矽石層析得到油狀4-(3-三氟甲氧基苯基)-2-丁酮；m/Z(相對強度)232(M+，68)，217(7)，189(59)，175(31)，103(28)，43(100)。
將4-(3-三氟甲氧基苯基)-2-丁酮(2.32g，10mmol)，(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺(1.51g，10mmol)和異丙醇鈦(IV)(3.55g，12.5mmol)的溶液在室溫下攪拌4小時。反應混合物用乙醇化的氰硼氫化鈉(10mmol)溶液(10ml，1M)處理後在室溫下攪拌16小時。將該反應物用二乙醚稀釋(50ml)並用水(0.72ml，40mmol)處理。徹底混合後，將溶液離心，醚層脫水濃縮得到油狀固體。固體懸浮於二乙醚，用0.45μM CR PTFE Acrodisc過濾，濃縮得到澄清的油。用氯仿中的5％甲醇重複性製備型薄層層析得到兩個非對映異構體(S，R)-N-[4-(3-三氟甲氧基苯基)-2-丁基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，22Z[m-/Z(相對強度)367(M+，3)，352(20)，232(4)，178(47)，135(100)，105(14)，91(10)；77(11)]和(R，R)-N-[4-(3-三氟甲氧基苯基)-2-丁基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，23A；m/Z(相對強度)367(M+，3)，352(19)，232(7)，178(43)，135(100)，105(19)，91(10)，77(11)。
22X和22Y的製備以相似的方式將等摩爾量的4-(3-三氟甲氧基苯基)-2-丁酮，(R)-1-(1-萘基)乙胺和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原中間體亞胺。用氯仿中5％甲醇分離淨化(work-up)和重複性製備型薄層層析得到(S，R)-N-[4-(3-三氟甲氧基苯基)-2-丁基]-1-(1-萘基)乙胺，22X；m/Z(相對強度)387(M+，3)，372(15)，198(15)，176(12)，155(100)，128(8)，115(6)，109(4)，103(5)，77(8)和(R，R)-N-[4-(3-1三氟甲氧基苯基)-2-丁基]-1-(1-萘基)乙胺，22Y；m/Z(相對強度)387(M+，2)，372(12)，198(16)，176(11)，155(100)，128(8)，115(6)，109(4)，103(5)，77(8)。
4T的製備以相似的方式將等摩爾量的4-(2-氯苯基)-2-丁酮，製備自O-氯苯甲醛，(R)-1(3-甲氧基苯基)乙胺和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原中間體亞胺。用氯仿中的5％甲醇分離淨化和重複性製備型薄層層析得到(R，R)-N-[4-(2-氯苯基)-2-丁基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，4T；m/Z(相對強度)317(M+，3)，302(16)，178(62)，135(100)，125(15)，105(10)，91(6)，77(8)。
21Y的製備以相似的方式將等摩爾量的4-(3-三氟甲基苯基)-2-丁酮，製備自m-三氟甲基苯甲醛，(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原中間體亞胺。用氯仿中的5％甲醇的分離淨化和用重複性製備型薄層層析得到(R，R)-N-[4-(3-三氯甲基苯基)-2-丁基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，21Y[M/Z(相對強度)351(M+，2)，336(18)，216(4)，202(3)，178(45)，135(100)，105(13)，91(9)，77(8)]和(S，R)-N-[4-(3-三氟甲基苯基)-2-丁基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，21X。
25C和25D的製備以相似的方式將等摩爾量的4-(3-三氟甲基苯基)-2-丁酮，(R)-1-(1-萘基)乙胺和1.25當量的異丙醇鈦(IV-)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原中間體亞胺。用氯仿中的5％甲醇的分離淨化和重複性製備型薄層層析得到(S，R)-N-[4-(3-三氯甲基苯基)-2-丁基]-1-(1-萘基)乙胺，25C[m/Z(相對強度)37(M+，3)，356(16)，198(15)，155(100)，129(8)，115(5)，109(3)，77(2)]和(R，R)-N-[4-(3-三氟甲基苯基)-2-丁基]-1-(1-萘基)乙胺，25D；m/Z(相對強度)371(M+，3)，356(16)，198(15)，155(100)，129(8)，115(5)，109(3)，77(2)。
21D的製備以相似的方式將等摩爾量的4-苯基-2-丁酮(Aldrich化學品公司)，(R)-1-(3-甲氯基苯基)乙胺和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原中間體亞胺。用氯仿中的5％甲醇的分離淨化和重複性製備型薄層層析得到(R，R)-N-(4-苯基-2-丁基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，21D[m/Z(相對強度)283(M+，4)，268(13)，178(45)，135(100)，105(15)，91(43)，77(11)]和(S，R)-N-(4-苯基-2-丁基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，21E。
21F的製備以相似的方式將等摩爾量的4-苯基-2-丁酮(Aldrich化學品公司)，(R)-1-(1-萘基)乙胺和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原中間體亞胺。用氯仿中的5％甲醇的分離淨化和重複性製備型薄層層析得到(R，R)-N-(4-苯基-2-丁基)-1-(1-萘基)乙胺，21F；[m/Z(相對強度)303(M+，6)，288(14)，198(22)，155(100)，129(8)，115(5)，91(19)，77(4)。
12Z的製備將二氯甲烷中的2-氯氫化肉桂腈(Aldrich化學品公司，1.66g，10mmol)的攪拌溶液冷卻至-78℃，滴加二異丁基鋁氫化物(1.42g，10mmol)處理。將反應物在室溫下攪拌1小時，冷卻至-78℃，用二氯甲烷(25ml)中的1-(1-萘基)乙胺(1.71g，10mmol)的溶液處理。將反應物移至冰浴，攪拌2小時。然後將反應物直接倒入乙醇中硼氫化鈉(50ml，0.2M，10mmol)的攪拌溶液中。將混合物室溫攪拌30分鐘，加10％HCl淬滅過量的硼氫化鈉。加10N NaOH將溶液調至鹼性，移至分離漏鬥，用二乙醚(300ml)洗滌。除去水相，用1N NaOH(3×100mL)洗剩下的有機層。有機層用無水硫酸鎂乾燥，濃縮成油。用氯仿至10％甲醇-氯仿梯度將該物質矽膠層析得到2.34g(72％產率)澄清油狀(R)-N-[3-(2-氯苯基)丙基)-1-(1-萘基)乙胺，12Z；m/Z(相對強度)323(M+，2)，308(63)，288(7)，196(5)，184(5)，155(100)，125(24)，115(8)，103(4)，91(3)，77(7)。
12B的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理2-甲基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的(R)-N-[3-(2-甲基苯基)丙-2-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，12B；m/Z(相對強度)281(M+，6)，266(5)，176(27)，146(75)，135(63)，131(100)，115(25)，105(21)，91(21)，77(21)。
12C的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理2-甲基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的(R)-N-[3-(2-甲基苯基)丙-2-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，12C；m/Z(相對強度)281(M+，4)，266(15)，176(18)，146(62)，135(58)，131(100)，115(23)，105(19)，91(38)，77(17)。
12D的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理2，4，6-三甲基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和電泳得到澄清無色油狀的(R)-N-[3-(2，4，6-三甲基苯基)丙-2-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，12D；m/Z(相對強度)309(M+，8)，294(25)，174(82)，159(100)，135(52)，129(29)，105(21)，91(17)，77(14)。
12E的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理4-異丙基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的(R)-N-[3-(4-異丙基苯基)丙-2-烯基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，12E；m/Z(相對強度)309(M+，9)，294(7)，174(98)，159(22)，135(80)，177(100)，105(35)，91(37)，77(19)。
12F的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理2，4-二甲基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的(R)-N-[3-2，4-二甲基苯基)丙-2-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，12F；m/Z(相對強度)295(M+，8)，294(15)，174(29)，160(75)，145(100)，135(68)，117(21)，105(30)，91(26)，77(19)。
12G的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理3-甲基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的(R)-N-[3-(3-甲氧基苯基)丙-2-烯基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，12G；m/Z(相對強度)281(M+，5)，266(9)，176(24)，146(71)，135(62)，131(100)，115(23)，105(19)，91(41)，77(18)。
25E的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的(R)-N-(3-苯基丙-2-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，25E；m/Z(相對強度)267(M+，3)，252(14)，176(17)，135(62)，117(100)，105(28)，91(56)，77(33)。
25G的製備以相似的方式用二異丁基鋁氫化物處理α-甲基肉桂腈，用(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺處理中間體鋁-亞胺複合物。用乙醇化的硼氫化鈉處理中間體亞胺。分離淨化和層析製得澄清無色油狀的(R)-N-(2-甲基-3-苯基丙-2-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，25G；m/Z(相對強度)281(M+，5)，266(18)，190(12)，146(78)，135(82)，131(100)，115(21)，105(21)，91(62)，77(19)。
6X的製備用二甲基甲醯胺(50ml)中的磷酸二乙基氰甲酯(13.3g，75mmol)溶液處理二甲基甲醯胺(150ml)中氫化鈉(1.8g，75mmol)的攪拌的溶液。將反應物在室溫下攪拌30分鐘。然後將反應物用3-氯苯甲(10.54g，75mmol)處理，室溫攪拌1小時。60℃攪拌30分鐘。然後加入水(200ml)淬滅反應。將反應混合物用二乙醚轉移到分離漏鬥，用水(5×300ml)和鹽溶液洗滌得到的有機相。有機層用無水碳酸鉀乾燥，濃縮得到固體3-氯肉桂腈(11.06g)。將固體溶於四氫呋喃(50ml)用過量二硼烷處理，室溫下攪拌30分鐘。將反應物倒入冰/10％HCl中。用二乙醚(2×200ml)洗酸性水相。加10N NaOH調水相成鹼性，用二乙醚(200ml)抽提。醚抽提物用無水碳酸鉀乾燥，濃縮得到油狀3-(3-氯苯基)丙胺(0.6g，354mmol)。將3-(3-氯苯基)丙胺(0.6g，354mmol)，3′-甲氧基乙醯苯(0.53g，354mmol)和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)(1.26g，443mmol)室溫攪拌4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。將反應物在室溫下攪拌16小時，用二乙醚(50ml)稀釋，用水(0.32ml，17.7mmol)處理。充分混合後將溶液離心，使醚層濃縮成牛奶狀固體。該物質懸浮於二乙醚中，用0.45μM CR PTFE Acrodisc過濾。醚洗液濃縮成油。用3％甲醇-二氯甲烷(含0.1％異丙胺層析該物質(矽石，製備型薄層層析)得到N-[3-(3-氯苯基)丙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，6X；m/Z(相對強度)303(M+，3)，288(40)，196(3)，164(8)，135(100)，126(46)，103(26)，91(29)，77(29)。
6V的製備在室溫下將等摩爾量的3-(4-氯苯基)丙胺(如上以相似方式製備自4-氯苯甲醛，3′-甲氧基乙醯苯和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀N-[3-(4-氯苯基)丙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，6V；m/Z(相對強度)303(M+，8)，288(91)，196(4)，164(10)，135(100)，125(61)，103(21)，91(21)，77(18)。
20A的製備以相似的方式，將等摩爾量的1-(1-甲氧基苯基)丙胺，4-叔丁基乙醯苯和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)在室溫下混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀(R)-N-[1-(4-叔丁基苯基)乙基]-1-(1-萘基)乙胺，20A，m/Z(相對強度)331(M+，12)，316(29)，161(70)，155(100)，131(14)，127(31)，115(10)，105(6)，91(10)，77(10)。
25H和25I的製備以相似的方式在室溫下將等摩爾量的(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，反-4-苯基-3-丁烯-2-酮和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀(R，R)-N-(2-甲基-4-苯基J-3-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，25H；m/Z(相對強度)283(M+，4)，268(13)，178(40)，135(100)，105(15)，91(47)，77(13)和油狀(S，R)-N-(2-甲基-4-苯基J-3-烯基)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，25I；m/Z(相對強度)283(M+，4)，268(13)，178(40)，135(100)，105(15)，91(47)，77(13)。
16L和16M的製備以相似的方式在室溫下將等摩爾量的(R)-1-(3-甲氧基苯基)-乙胺，3-甲氧基乙醯苯和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀(R，R)-N-[1-(4-甲氧基苯基)乙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，16L；m/Z(相對強度)284(M-1，1)，270(85)，150(83)，135(100)，120(12)，105(28)，91(25)，77(23)。和油狀(S，R)-N-[1-(4-甲氧基苯基)乙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，16M；m/Z(相對強度)284(M-1，1)，270(53)，150(98)，135(100)，120(11)，105(33)，91(25)，77(23)。
5B/5C的製備以相似的方式用4-氯乙醯苯製備3-甲基-3-(4-氯苯基)肉桂腈。該腈被催化還原(氫氧化鈀，乙酸，60磅氫氣2小時)生成3-甲基-3-(4-氯苯基)丙胺。在室溫下將等摩爾量該胺，3′-甲氧基乙醯苯和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀N-(3-甲基-3-(4-氯苯基)丙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，5B/5C；m/Z(相對強度)317(M+，12)，302(74)，210(2)，182(4)，164(12)，135(100)，121(25)，103(40)，91(19)，77(28)。
4Z/5A的製備以相似的方式用3-氯乙醯苯製備3-甲基-3-(3-氯苯基)肉桂腈。該腈被催化還原(氫氧化鈀，乙酸，60磅氫氣2小時)生成3-甲基-3-(3-氯苯基)丙胺。在室溫下將等摩爾量的該胺，3′-甲氧基乙醯苯和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀N-[3-甲基-3-(3-氯苯基)丙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，4Z/5A；m/Z(相對強度)283(M+，17)，268(71)，164(13)，135(100)，121(21)，105(27)，91(26)，77(14)。
4Y的製備以相似的方式用2-氯乙醯苯製備3-甲基-3-(2-氯苯基)肉桂腈。該腈被催化還原(氫氧化鈀，乙酸，60磅氫氣2小時)生成3-甲基-3-(2-氯苯基)丙胺。在室溫下將等摩爾量的該胺，3′-甲氧基乙醯苯和1.25摩爾當量的異丙醇鈦(IV)混合4小時，用乙醇化的氰硼氫化鈉(5ml，1M，5mmol)處理中間體亞胺。分離淨化和層析得到油狀N-[3-甲基-3-(2-氯苯基)丙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，4Y；m/Z(相對強度)283(M+，17)，268(71)，164(13)，135(100)，121(21)，105(27)，91(26)，77(4)。
6T的製備將二氯甲烷中的NPS R-568(30.3g，100mmol)溶液在-78℃用三溴化硼(50g，200ml)逐滴處理。在室溫下攪拌反應物1小時，將其倒在冰上。用氯仿從水相中抽提氫溴酸。溶於氯仿的物質用50％HCl洗(4×100ml)。氯仿洗液用無水硫酸鎂乾燥，濃縮得到(R)-N-[3-(2-氯苯基)丙基]-1-(3-羥基苯基)乙胺鹽酸鹽固體。二甲基甲醯胺中的氫化鈉(0.48g，20mmol)溶液用(R)-N-[3-(2-氯苯基)丙基]-1-(3-羥基苯基)乙胺鹽酸鹽(3.25g，10mmol)處理，將反應物在室溫下攪拌1小時。將反應用碘乙烷(1.17g，11mmol)處理，室溫攪拌16小時。分離淨化和用氯仿中3％甲醇矽石層析得到油狀(R)-N-[3-(2-氯苯基)丙基]-1-(3-乙氧基苯基)乙胺，6T；m/Z(相對強度)316(M+，1)，302(100)，282(11)，196(5)，178(7)，149(74)，121(34)，103(25)，91(28)，77(29)。
6R的製備以相似的方式用NPS R-467製備油狀(R)-N-(3-苯基丙基)-1-(3-乙氧基苯基)乙胺，6R；m/Z(相對強度)283(M+，10)，268(74)，178(11)，162(8)，149(100)，121(30)，103(16)，91(86)，77(29)。
3U的製備在室溫下將等摩爾量的3，3-二苯基丙胺(2.11g，10mmol)，1′-乙醯萘酮(1.70g，10mmol)和1.25當量的異丙醇鈦(IV)(3.55g，12.5mmol)攪拌4小時，然後將反應混合物用乙醇化的氰硼氫化鈉(12.5ml，12.5mmol)的1M溶液處理，在室溫下攪拌16小時。反應用二乙醚(50ml)稀釋，用水(0.72ml，40mmol)處理。充分混合後將混合物離心，使醚層脫水，濃縮成牛奶狀油。將該油懸浮於二乙基醚，用0.45μM CR PTFE Acrodisc過濾。將二乙醚濾過物濃縮，得到澄清無色油狀N-(3，3-二苯基丙基)-1-(1-苯基)乙胺，3U；m/Z(相對強度)365(M+，17)，350(19)，181(23)，155(100)，141(25)，115(11)，91(13)，77(6)。
6F的製備以相似的方式如上處理等摩爾量的1-(3-甲氧基苯基)乙胺(1.51g，10mmol)，2′-乙醯萘酮(1.70g，10mmol)和1.25當量的異丙醇鈦(IV)(3.55g，12.5mmol)。分離淨化得到澄清無色油狀的N-[1·(2-萘基)乙基]-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，6F；m/Z(相對強度)305(M+，1)，290(35)，170(49)，155(100)，135(55)，115(28)，105(10)，91(9)，77(10)。
4G的製備以相似的方式將等摩爾量的(R)-1-苯基乙胺，1′-乙醯萘酮和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原所得到的中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的N-[1-(1-萘基)乙基]-1-苯基乙胺，4G；m/Z(相對強度)275(M+，16)，260(79)，155(100)，127(27)，105(70)，77(32)。
4H的製備以相似的方式將等摩爾量的(R)-1-苯基乙胺，2′-乙醯萘酮和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原所得到的中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的N-[1-(2-萘基)乙基]-1-苯基乙胺，4H；m/Z(相對強度)275(M+，1)，260(61)，155(100)，120(36)，105(55)，77(15)。
6E的製備以相似的方式將等摩爾量的(1-(3-甲氧基苯基)乙胺，1′-乙醯萘酮和1.25當量的異丙醇鈦(IV)混合，用乙醇化的氰硼氫化鈉還原所得到的中間體亞胺。分離淨化和層析得到澄清無色油狀的N-1-(1-萘基)乙基-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，6E；m/Z(相對強度)305(M+，10)，290(30)，170(43)，155(100)，135(69)，115(9)，105(15)，91(14)，77(18)。
實施例19藥物製劑適於對病人給藥的藥物製劑由表3給出。
表3
其它NPS(R)-568鹽酸鹽製劑和劑量形式的例子包括適於用標準技術持續或延續釋藥的那些。
用標準技術也可以確定適當的劑量。例如在一組實驗中，NPS(R)-568鹽酸鹽的10-400mg口服劑量在受試人中顯示出藥理活性。口服NPS(R)-568鹽酸鹽後在人血漿中觀察到顯著水平的17Q(NPS(R)-568的一種主要代謝物)的O-葡糖苷結合物。因此17Q的O葡糖苷結合物可能產生有益效果。
用標準技術可確定NPS(R)-568的其它適當劑量範圍。
根據本申請所提供的技術，本領域專業人員也可確定本文描述的其它化合物的適當劑量範圍、製劑和劑量形式。
其它實施方案在下述權利要求的範圍內，因此雖然只給出並描述了幾個實施方案，在不偏離本發明的實質與範圍的條件下，對本發明可有不同的改進。
序列表(1)一般資料(i)申請人NPS Pharmaceuticals，Inc.
(ii)發明名稱鈣受體活性化合物(iii)序列數2(iv)相關地址(A)收信人Lyon Lyon(B)街道First Interstate WorldCenter，Suite 4700633 West Fifth Street(C)城市Los Angeles(D)州California(E)國家USA(F)郵編90017(v)計算機可讀形式(A)介質類型3.5吋盤，1.44Mb存貯量(B)計算機IBM PC兼容型(C)作業系統PC-DOS/MS-DOS(D)軟體FastSeq(vi)當前申請資料(A)申請號(B)提交日期(C)分類(vii)在先申請資料全部在先申請包括下述申請2(A)申請號U.S.08/353,784(B)提交日期1994年12月8日(A)申請號PCT/US/94/12117(B)提交日期1994年10月21日(viii)律師/代理人資料
(A)姓名Heber，Sheldon O.
(B)註冊號38,179(C)參考/登記號215/304(ix)遠程通訊資料(A)電話(213)489-1600(B)電傳(213)955-0440(C)電報67-3510(2)SEQ ID NO1的資料(i)序列特徵(A)長度5006個鹼基對(B)類型核酸(C)鏈型單鏈(D)拓撲結構線性(ii)分子類型cDNA to mRNA(ix)特性(A)名稱/關鍵詞 CDS(B)位置436...3699(D)其它資料(xi)序列描述SEQ ID NO1GCTGCTGTGG CCGGACCCGA AGGCGGGCGC CGGGAGCGCA 40GCGAGCCAGA CGCGCCTCTC CAAGACCGTG ACCTTGGCAT 80AGGGAGCGGG GCTGCGCGCA GTCCTGAGAT CAGACCAGAG120CTCATCCTCG TGGAGACCCA CGGCCGAGGG GCCGGAGCTG160CCTCTGTGCG AGGGAGCCCT GGCCGCGGCG CAGAAGGCAT200CACAGGAGGC CTCTGCATGA TGTGGCTTCC AAAGACTCAA240GGACCACCCA CATTACAAGT CTGGATTGAG GAAGGCAGAA280ATGGAGATTC AAACACCACG TCTTCTATTA TTTTATTAAT320CAATCTGTAG ACATGTGTCC CCACTGCAGG GAGTGAACTG360CTCCAAGGGA GAAACTTCTG GGAGCCTCCA AACTCCTAGC400TGTCTCATCC CTTGCCCTGG AGAGACGGCA GAACC 435ATG GCA TTT TAT AGC TGC TGC TGG GTC CTC TTG GCA471Met Ala Phe Tyr Ser Cys Cys Trp Val Leu Leu Ala1 5 10
CTC ACC TGG CAC ACC TCT GCC TAC GGG CCA GAC CAG507Leu Thr Trp His Thr Ser Ala Tyr Gly Pro Asp Gln15 20CGA GCC CAA AAG AAG GGG GAC ATT ATC CTT GGG GGG543Arg Ala Gln Lys Lys Gly Asp Ile Ile Leu Gly Gly25 30 35CTC TTT CCT ATT CAT TTT GGA GTA GCA GCT AAA GAT579Leu Phe Pro Ile His Phe Gly Val Ala Ala Lys Asp40 45CAA GAT CTC AAA TCA AGG CCG GAG TCT GTG GAA TGT615Gln Asp Leu Lys Ser Arg Pro Glu Ser Val Glu Cys50 55 60ATC AGG TAT AAT TTC CGT GGG TTT CGC TGG TTA CAG651Ile Arg Tyr Asn Phe Arg Gly Phe Arg Trp Leu Gln65 70GCT ATG ATA TTT GCC ATA GAG GAG ATA AAC AGC AGC687Ala Met Ile Phe Ala Ile Glu Glu Ile Asn Ser Ser75 80CCA GCC CTT CTT CCC AAC TTG ACG CTG GGA TAC AGG723Pro Ala Leu Leu Pro Asn Leu Thr Leu Gly Tyr Arg85 90 95ATA TTT GAC ACT TGC AAC ACC GTT TCT AAG GCC TTG759Ile Phe Asp Thr Cys Asn Thr Val Ser Lys Ala Leu100 105GAA GCC ACC CTG AGT TTT GTT GCT CAA AAC AAA ATT795Glu Ala Thr Leu Ser Phe Val Ala Gln Asn Lys Ile110 115 120GAT TCT TTG AAC CTT GAT GAG TTC TGC AAC TGC TCA831Asp Ser Leu Asn Leu Asp Glu Phe Cys Asn Cys Ser125 130GAG CAC ATT CCC TCT ACG ATT GCT GTG GTG GGA GCA867Glu His Ile Pro Ser Thr Ile Ala Val Val Gly Ala135 140ACT GGC TCA GGC GTC TCC ACG GCA GTG GCA AAT CTG903Thr Gly Ser Gly Val Ser Thr Ala Val Ala Asn Leu145 150 155CTG GGG CTC TTC TAC ATT CCC CAG GTC AGT TAT GCC939Leu Gly Leu Phe Tyr Ile Pro Gln Val Ser Tyr Ala160 165TCC TCC AGC AGA CTC CTC AGC AAC AAG AAT CAA TTC975Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ser Asn Lys Asn Gln Phe170 175 180
AAG TCT TTC CTC CGA ACC ATC CCC AAT GAT GAG CAC1011Lys Ser Phe Leu Arg Thr Ile Pro Asn Asp Glu His185 190CAG GCC ACT GCC ATG GCA GAC ATC ATC GAG TAT TTC1047Gln Ala Thr Ala Met Ala Asp Ile Ile Glu Tyr Phe195 200CGC TGG AAC TGG GTG GGC ACA ATT GCA GCT GAT GAC1083Arg Trp Asn Trp Val Gly Thr Ile Ala Ala Asp Asp205 210 215GAC TAT GGG CGG CCG GGG ATT GAG AAA TTC CGA GAG1119Asp Tyr Gly Arg Pro Gly Ile Glu Lys Phe Arg Glu220 225GAA GCT GAG GAA AGG GAT ATC TGC ATC GAC TTC AGT1155Glu Ala Glu Glu Arg Asp Ile Cys Ile Asp Phe Ser230 235 240GAA CTC ATC TCC CAG TAC TCT GAT GAG GAA GAG ATC1191Glu Leu Ile Ser Gln Tyr Ser Asp Glu Glu Glu Ile245 250CAG CAT GTG GTA GAG GTG ATT CAA AAT TCC ACG GCC1227Gln His Val Val Glu Val Ile Gln Asn Ser Thr Ala255 260AAA GTC ATC GTG GTT TTC TCC AGT GGC CCA GAT CTT1263Lys Val Ile Val Val Phe Ser Ser Gly Pro Asp Leu265 270 275GAG CCC CTC ATC AAG GAG ATT GTC CGG CGC AAT ATC1299Glu Pro Leu Ile Lys Glu Ile Val Arg Arg Asn Ile280 285ACG GGC AAG ATC TGG CTG GCC AGC GAG GCC TGG GCC1335Thr Gly Lys Ile Trp Leu Ala Ser Glu Ala Trp Ala290 295 300AGC TCC TCC CTG ATC GCC ATG CCT CAG TAC TTC CAC1371Ser Ser Ser Leu Ile Ala Met Pro Gln Tyr Phe His305 310GTG GTT GGC GGC ACC ATT GGA TTC GCT CTG AAG GCT1407Val Val Gly Gly Thr Ile Gly Phe Ala Leu Lys Ala315 320GGG CAG ATC CCA GGC TTC CGG GAA TTC CTG AAG AAG1443Gly Gln Ile Pro Gly Phe Arg Glu Phe Leu Lys Lys325 330 335GTC CAT CCC AGG AAG TCT GTC CAC AAT GGT TTT GCC1479Val His Pro Arg Lys Ser Val His Asn Gly Phe Ala340 345
AAG GAG TTT TGG GAA GAA ACA TTT AAC TGC CAC CTC1515Lys Glu Phe Trp Glu Glu Thr Phe Asn Cys His Leu350 355 360CAA GAA GGT GCA AAA GGA CCT TTA CCT GTG GAC ACC1551Gln Glu Gly Ala Lys Gly Pro Leu Pro Val Asp Thr365 370TTT CTG AGA GGT CAC GAA GAA AGT GGC GAC AGG TTT1587Phe Leu Arg Gly His Glu Glu Ser Gly Asp Arg Phe375 380AGC AAC AGC TCG ACA GCC TTC CGA CCC CTC TGT ACA1623Ser Asn Ser Ser Thr Ala Phe Arg Pro Leu Cys Thr385 390 395GGG GAT GAG AAC ATC AGC AGT GTC GAG ACC CCT TAC1659Gly Asp Glu Asn Ile Ser Ser Val Glu Thr Pro Tyr400 405ATA GAT TAC ACG CAT TTA CGG ATA TCC TAC AAT GTG1695Ile Asp Tyr Thr His Leu Arg Ile Ser Tyr Asn Val410 415 420TAC TTA GCA GTC TAC TCC ATT GCC CAC GCC TTG CAA1731Tyr Leu Ala Val Tyr Ser Ile Ala His Ala Leu Gln425 430GAT ATA TAT ACC TGC TTA CCT GGG AGA GGG CTC TTC1767Asp Ile Tyr Thr Cys Leu Pro Gly Arg Gly Leu Phe435 440ACC AAT GGC TCC TGT GCA GAC ATC AAG AAA GTT GAG1803Thr Asn Gly Ser Cys Ala Asp Ile Lys Lys Val Glu445 450 455GCG TGG CAG GTC CTG AAG CAC CTA CGG CAT CTA AAC1839Ala Trp Gln Val Leu Lys His Leu Arg His Leu Asn460 465TTT ACA AAC AAT ATG GGG GAG CAG GTG ACC TTT GAT1875Phe Thr Asn Asn Met Gly Glu Gln Val Thr Phe Asp470 475 480GAG TGT GGT GAC CTG GTG GGG AAC TAT TCC ATC ATC1911Glu Cys Gly Asp Leu Val Gly Asn Tyr Ser Ile Ile485 490AAC TGG CAC CTC TCC CCA GAG GAT GGC TCC ATC GTG1947Asn Trp His Leu Ser Pro Glu Asp Gly Ser Ile Val495 500TTT AAG GAA GTC GGG TAT TAC AAC GTC TAT GCC AAG1983Phe Lys Glu Val Gly Tyr Tyr Asn Val Tyr Ala Lys505 510 515
AAG GGA GAA AGA CTC TTC ATC AAC GAG GAG AAA ATC2019Lys Gly Glu Arg Leu Phe Ile Asn Glu Glu Lys Ile520 525CTG TGG AGT GGG TTC TCC AGG GAG CCA CTC ACC TTT2055Leu Trp Ser Gly Phe Ser Arg Glu Pro Leu Thr Phe530 535 540GTG CTG TCT GTC CTC CAG GTG CCC TTC TCC AAC TGC2091Val Leu Ser Val Leu Gln Val Pro Phe Ser Asn Cys545 550AGC CGA GAC TGC CTG GCA GGG ACC AGG AAA GGG ATC2127Ser Arg Asp Cys Leu Ala Gly Thr Arg Lys Gly Ile555 560ATT GAG GGG GAG CCC ACC TGC TGC TTT GAG TGT GTG2163Ile Glu Gly Glu Pro Thr Cys Cys Phe Glu Cys Val565 570 575GAG TGT CGT GAT GGG GAG TAT AGT GAT GAG ACA GAT2199Glu Cys Pro Asp Gly Glu Tyr Ser Asp Glu Thr Asp580 585GCC AGT GCC TGT AAC AAG TGC CCA GAT GAC TTC TGG2235Ala Ser Ala Cys Asn Lys Cys Pro Asp Asp Phe Trp590 595 600TCC AAT GAG AAC CAC ACC TCC TGC ATT GCC AAG GAG2271Ser Asn Glu Asn His Thr Ser Cys Ile Ala Lys Glu605 610ATC GAG TTT CTG TCG TGG ACG GAG CCC TTT GGG ATC2307Ile Glu Phe Leu Ser Trp Thr Glu Pro Phe Gly Ile615 620GCA CTC ACC CTC TTT GCC GTG CTG GGC ATT TTC CTG2343Ala Leu Thr Leu Phe Ala Val Leu Gly Ile Phe Leu625 630 635ACA GCC TTT GTG CTG GGT GTG TTT ATC AAG TTC CGC2379Thr Ala Phe Val Leu Gly Val Phe Ile Lys Phe Arg640 645AAC ACA CCC ATT GTC AAG GCC ACC AAC CGA GAG CTC2415Asn Thr Pro Ile Val Lys Ala Thr Asn Arg Glu Leu650 655 660TCC TAC CTC CTC CTC TTC TCC CTG CTC TGC TGC TTC2451Ser Tyr Leu Leu Leu Phe Ser Leu Leu Cys Cys Phe665 670TCC AGC TCC CTG TTC TTC ATC GGG GAG CCC CAG GAC2487Ser Ser Ser Leu Phe Phe Ile Gly Glu Pro Gln Asp675 680
TGG ACG TGC CGC CTG CGC CAG CCG GCC TTT GGC ATC2523Trp Thr Cys Arg Leu Arg Gln Pro Ala Phe Gly Ile685 690 695AGC TTC GTG CTC TGC ATC TCA TGC ATC CTG GTG AAA2559Ser Phe Val Leu Cys Ile Ser Cys Ile Leu Val Lys700 705ACC AAC CGT GTC CTC CTG GTG TTT GAG GCC AAG ATC2595Thr Asn Arg Val Leu Leu Val Phe Glu Ala Lys Ile710 715 720CCC ACC AGC TTC CAC CGC AAG TGG TGG GGG CTC AAC2631Pro Thr Ser Phe His Arg Lys Trp Trp Gly Leu Asn725 730CTG CAG TTC CTG CTG GTT TTC CTC TGC ACC TTC ATG2667Leu Gln Phe Leu Leu Val Phe Leu Cys Thr Phe Met735 740CAG ATT GTC ATC TGT GTG ATC TGG CTC TAC ACC GCG2703Gln Ile Val Ile Cys Val Ile Trp Leu Tyr Thr Ala745 750 755CCC CCC TCA AGC TAC CGC AAC CAG GAG CTG GAG GAT2739Pro Pro Ser Ser Tyr Arg Asn Gln Glu Leu Glu Asp760 765GAG ATC ATC TTC ATC ACG TGC CAC GAG GGC TCC CTC2775Glu Ile Ile Phe Ile Thr Cys His Glu Gly Ser Leu770 775 780ATG GCC CTG GGC TTC CTG ATC GGC TAC ACC TGC CTG2811Met Ala Leu Gly Phe Leu Ile Gly Tyr Thr Cys Leu785 790CTG GCT GCC ATC TGC TTC TTC TTT GCC TTC AAG TCC2847Leu Ala Ala Ile Cys Phe Phe Phe Ala Phe Lys Ser795 800CGG AAG CTG CCG GAG AAC TTC AAT GAA GCC AAG TTC2883Arg Lys Leu Pro Glu Asn Phe Asn Glu Ala Lys Phe805 810 815ATC ACC TTC AGC ATG CTC ATC TTC TTC ATC GTC TGG2919Ile Thr Phe Ser Met Leu Ile Phe Phe Ile Val Trp820 825ATC TCC TTC ATT CCA GCC TAT GCC AGC ACC TAT GGC2955Ile Ser Phe Ile Pro Ala Tyr Ala Ser Thr Tyr Gly830 835 840AAG TTT GTC TCT GCC GTA GAG GTG ATT GCC ATC CTG2991Lys Phe Val Ser Ala Val Glu Val Ile Ala Ile Leu845 850
GCA GCC AGC TTT GGC TTG CTG GCG TGC ATC TTC TTC3027Ala Ala Ser Phe Gly Leu Leu Ala Cys Ile Phe Phe855 860AAC AAG ATC TAC ATC ATT CTC TTC AAG CCA TCC CGC3063Asn Lys Ile Tyr Ile Ile Leu Phe Lys Pro Ser Arg865 870 875AAC ACC ATC GAG GAG GTG CGT TGC AGC ACC GCA GCT3099Asn Thr Ile Glu Glu Val Arg Cys Ser Thr Ala Ala880 885CAC GCT TTC AAG GTG GCT GCC CGG GCC ACG CTG CGC3135His Ala Phe Lys Val Ala Ala Arg Ala Thr Leu Arg890 895 900CGC AGC AAC GTC TCC CGC AAG CGG TCC AGC AGC CTT3171Arg Ser Asn Val Ser Arg Lys Arg Ser Ser Ser Leu905 910GGA GGC TCC ACG GGA TCC ACC CCC TCC TCC TCC ATC3207Gly Gly Ser Thr Gly Ser Thr Pro Ser Ser Ser Ile915 920AGC AGC AAG AGC AAC AGC GAA GAC CCA TTC CCA CGG3243Ser Ser Lys Ser Asn Ser Glu Asp Pro Phe Pro Arg925 930 935CCC GAG AGG CAG AAG CAG CAG CAG CCG CTG GCC CTA3279Pro Glu Arg Gln Lys Gln Gln Gln Pro Leu Ala Leu940 945ACC CAG CAA GAG CAG CAG CAG CAG CCC CTG ACC CTC3315Thr Gln Gln Glu Gln Gln Gln Gln Pro Leu Thr Leu950 955 960CCA CAG CAG CAA CGA TCT CAG CAG CAG CCC AGA TGC3351Pro Gln Gln Gln Arg Ser Gln Gln Gln Pro Arg Cys965 970AAG CAG AAG GTC ATC TTT GGC AGC GGC ACG GTC ACC3387Lys Gln Lys Val Ile Phe Gly Ser Gly Thr Val Thr975 980TTC TCA CTG AGC TTT GAT GAG CCT CAG AAG AAC GCC3423Phe Ser Leu Ser Phe Asp Glu Pro Gln Lys Asn Ala985 990 995ATG GCC CAC AGG AAT TCT ACG CAC CAG AAC TCC CTG3459Met Ala His Arg Asn Ser Thr His Gln Asn Ser Leu10001005GAG GCC CAG AAA AGC AGC GAT ACG CTG ACC CGA CAC3495Glu Ala Gln Lys Ser Ser Asp Thr Leu Thr Arg His10101015 1020
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CAA AAC AAA ATT GAT TCT TTG AAC CTT GAT GAG TTC 756Gln Asn Lys Ile Asp Ser Leu Asn Leu Asp Glu Phe120 125TGC AAC TGC TCA GAG CAC ATT CCC TCT ACG ATT GCT 792Cys Asn Cys Ser Glu His Ile Pro Ser Thr Ile Ala130 135 140GTG GTG GGA GCA ACT GGC TCA GGC GTC TCC ACG GCA 828Val Val Gly Ala Thr Gly Ser Gly Val Ser Thr Ala145 150GTG GCA AAT CTG CTG GGG CTC TTC TAC ATT CCC CAG 864Val Ala Asn Leu Leu Gly Leu Phe Tyr Ile Pro Gln155 160GTC AGT TAT GCC TCC TCC AGC AGA CTC CTC AGC AAC 900Val Ser Tyr Ala Ser Ser Ser Arg Leu Leu Ser Asn165 170 175AAG AAT CAA TTC AAG TCT TTC CTC CGA ACC ATC CCC 936Lys Asn Gln Phe Lys Ser Phe Leu Arg Thr Ile Pro180 185AAT GAT GAG CAC CAG GCC ACT GCC ATG GCA GAC ATC 972Asn Asp Glu His Gln Ala Thr Ala Met Ala Asp Ile190 195 200ATC GAG TAT TTC CGC TGG AAC TGG GTG GGC ACA ATT1008Ile Glu Tyr Phe Arg Trp Asn Trp Val Gly Thr Ile205 210GCA GCT GAT GAC GAC TAT GGG CGG CCG GGG ATT GAG1044Ala Ala Asp Asp Asp Tyr Gly Arg Pro Gly Ile Glu215 220AAA TTC CGA GAG GAA GCT GAG GAA AGG GAT ATC TGC1080Lys Phe Arg Glu Glu Ala Glu Glu Arg Asp Ile Cys225 230 235ATC GAC TTC AGT GAA CTC ATC TCC CAG TAC TCT GAT1116Ile Asp Phe Ser Glu Leu Ile Ser Gln Tyr Ser Asp240 245GAG GAA GAG ATC CAG CAT GTG GTA GAG GTG ATT CAA1152Glu Glu Glu Ile Gln His Val Val Glu Val Ile Gln250 255 260AAT TCC ACG GCC AAA GTC ATC GTG GTT TTC TCC AGT1188Asn Ser Thr Ala Lys Val Ile Val Val Phe Ser Ser265 270GGC CCA GAT CTT GAG CCC CTC ATC AAG GAG ATT GTC1224Gly Pro Asp Leu Glu Pro Leu Ile Lys Glu Ile Val275 280
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權利要求
1.一種調控無機離子受體的化合物及其藥用鹽和複合物，所述化合物具有下式 其中Ar1是被0至5個取代基任意選擇地取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、N(CH3)2、苯基、苯氧基、苄基、苄氧基、α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙醯基、亞乙二氧基；Ar2是被0至5個取代基任意選擇地取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基；q是0、1、2或3；且R是氫或低級烷基；其中所述化合物調控一種或多種無機離子受體活性。
2.權利要求1的化合物，其中所述Ar1苯基，若存在的話，具有1至5個取代基，各取代基獨立地選自異丙基、CH3O、CF3、CH3S、CF3O、I、Cl、F和CH3；所述Ar2苯基，若存在的話，具有1至5個取代基，各取代基獨立地選自異丙基、CH3O、CH3S、CF3O、I、Cl、F、CF3和CH3；所述化合物是鈣模擬物；且所述無機離子受體活性是鈣受體活性。
3.權利要求2的化合物，其中q是2，存在所述具有1至5個取代基的Ar1苯基和所述具有1至5個取代基的Ar2苯基。
4.權利要求3的化合物，所述Ar2苯基是間甲氧基苯基。
5.權利要求2的化合物，其中q是0，存在所述Ar2萘基。
6.權利要求5的化合物，其中存在所述具有1至5個取代基的Ar1苯基。
7.權利要求2的化合物，其中q是2，存在所述具有1至5個取代基的Ar1苯基和所述Ar2萘基。
8.權利要求2的化合物，其中所述Ar1苯基，如果存在的話，具有1至5個取代基，各取代基獨立地選自CF3O、I、Cl、F和CF3；且所述Ar2苯基，如果存在的話，具有1至5個取代基，各取代基獨立地選自CF3O、I、Cl、F、CH3O和CF3。
9.權利要求3的化合物，其中所述Ar1苯基具有1至5個取代基，各取代基獨立地選自CF3O、I、Cl、F和CF3；且所說的Ar2苯基具有1至5個取代基，各取代基獨立地選自CF3O、I、Cl、F、CH3O和CF3。
10.權利要求9的化合物，其中Ar2苯基是間甲氧基苯基。
11.權利要求2的化合物，其中R是CH3。
12.權利要求3的化合物，其中R是CH3。
13.權利要求4的化合物，其中R是CH3。
14.權利要求7的化合物，其中R是CH3。
15.權利要求11的化合物或其藥用鹽和複合物，其中所述化合物具有下式
16.一種調控無機離子受體的化合物或其藥用鹽和複合物，所述化合物具有下式 其中Ar3是被0至5個取代基任意選擇地取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、苄基、苄氧基、二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、N(CH3)2、乙醯基、亞乙二氧基；Ar4是被0至5個取代基任意選擇地取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN和乙醯氧基；R8是氫或苯基；R9是氫或甲基；且R10是氫、甲基或苯基。
17.一種調控無機離子受體的化合物，該化合物具有下式 其中Ar5是被0至5個取代基任意選擇地取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、乙醯氧基、苄基、苄氧基，α，α-二甲基苄基、NO2、CHO、CH3CH(OH)、乙醯基、亞乙二氧基、-CH＝CH-苯基；Ar6是被0至5個取代基任意選擇地取代的萘基或苯基，各取代基獨立地選自乙醯基、低級烷基、滷素、低級烷氧基、低級硫代烷基、亞甲二氧基、低級滷代烷基、低級滷代烷氧基、OH、CH2OH、CONH2、CN、甲酯基、OCH2C(O)C2H5和乙醯氧基；R11是氫或甲基；且R12是氫或甲基。
18.權利要求1的化合物，該化合物是N-3-(3-三氟甲基苯基)-1-丙基-(R)-1-(3-甲氧基苯基)乙胺，或其藥用鹽。
19.一種用於治療患有下列疾病中的一種疾病的病人的藥物組合物，這些疾病選自原發性和繼發性甲狀旁腺功能亢進、Paget氏症、惡性高血鈣、骨質疏鬆症、高血壓和腎病性骨營養不良，該組合物含有有效量的權利要求1-18中任一項權利要求的化合物和可在藥物中應用的載體。
全文摘要
本發明涉及具有通式a)、b)、c)並且能調控一種無機離子受體的一種或多種活性的化合物以及通過調控無機離子受體活性來治療疾病或失調的方法。優選地，該化合物能模擬或阻遏細胞外Ca
文檔編號A61P5/00GK1907949SQ20061010145
公開日2007年2月7日 申請日期1995年10月23日 優先權日1994年10月21日
發明者B·C·范瓦格內, S·T·莫伊, M·F·巴蘭德林, E·G·德爾曼, E·F·內梅特 申請人:Nps藥物有限公司