免疫球蛋白k輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽治療急性炎症藥物中應用的製作方法

2023-10-11 15:32:59

免疫球蛋白k輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽治療急性炎症藥物中應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及具有促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白，具有減輕急性炎症反應對機體破壞的多肽。其序列為EDDGYHSKSM是全新的序列，它們可以在體內試驗中增加內毒素休克小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發價值。
【專利說明】免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽治療急性炎症藥物中應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽及其應用，具體涉及具有促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白、具有減輕急性炎症反應對機體破壞的多肽。
【背景技術】
[0002]膿毒血症(i^psis) —直是一個嚴重的醫學問題。早期膿毒血症不經過及時有效治療可進展為重症膿毒血症和膿毒血症性休克，兩者死亡率分別為20%~30%和40%~70%。醫學界一直在研究有效的治療手段，如早期對症治療、激活蛋白C、皮質激素治療等。近年來隨著醫學研究的深入，對膿毒血症的認識和治療取得了很大進展。其中，免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白(IKB-α)在內毒素休克中扮演著重要角色。
[0003]IKB 蛋白家族成員有 IKB a (MAD-3，pp40)、IKB β、IKB Y /pl05、IKB δ /ρΙΟΟ、IKB ε、Bcl_3以及果蠅屬的Cactus等。其家族結構特點是均有多個約33個胺基酸的重複序列，稱為崐SWI6/錨蛋白重複序列，主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用。IKB蛋白主要有以下三個部分構成:1.與蛋白降解有關的N-末端區；2.能與NF-κ B相互作用的內部區(區內含有錨蛋白重複序列ANK)(家族共有結構)主要參與與Rel蛋白的RHD相互作用；
3.稱為PEST的C 一端區，主要參與「囚禁"NF-K B在細胞漿中。IKBs家族參與兩個信號通路:NF- K B和Toll-like Receptor信號通路。NF- κ B的激活必須通過兩個步驟:①IKB從NF-K B複合體中解離並降解，暴露NF-κ B的核定位序列；②NF-κ B發生核易位，並與特異的κ B序列結合。
[0004]因此，IKB通過介導這兩條通路，從而調控前炎症性細胞因子、細胞表面受體、轉錄因子、粘附分子等的生成。最終產生抗炎的作用。因而成為治療中性粒細胞為主的炎症反應的主要靶點。儘管如此，並沒有成熟開發的免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽抑制劑問世，用於治療膿毒血症。

【發明內容】

[0005]發明目的
本發明提供全新的序列，該序列為免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽，對急性炎症具有很好的療效。
[0006]技術方案
免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽4，其特徵在於其序列為EDDGYHSKSM。
[0007]免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽4在治療急性炎症藥物中的應用。
[0008]有益效果
利用固相合成法化學合成免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽4，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外促進免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白活力。在內毒素休克模型實驗中成功的增加了小鼠的生存率。單核巨噬細胞表達腫瘤壞死因子釋放酶，這種酶可切割並釋放腫瘤壞死因子，腫瘤壞死因子是炎症反應的核心細胞因子，有加重炎症反應的作用。我們發現的多肽抑制劑可以抑制腫瘤壞死因子釋放酶的酶活力，從而減輕了炎症反應,保護機體並減輕炎症的破壞作用。
【具體實施方式】
[0009]實施例1
多肽抑制劑體外祀點酶:腫瘤壞死因子釋放酶(均購於sigma公司)的IC50值。
[0010]腫瘤壞死因子釋放酶的活力是通過切割螢光產生底物Mca-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Dpa-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-NH 檢測的(激發波長=320 nm,發射波長=405 nm)。反應在37° C下100 μL反應體系中進行。反應開始時向反應體系中加4 μL基質金屬蛋白酶-3存儲液(I ng/μL)底物的終濃度為10 μΜ。測得的IC50值為37.32 μ mol。
[0011]實施例2
用內毒素休克模型檢測多肽的體內活力 在建立內毒素休克模型之前，我們首先測定了 LPS (E.coli 0111:B4)小白鼠的LD50為50 Pg每隻小鼠，在實驗中我們採用了 100 Pg每隻小鼠，這樣，對照組的小鼠可全部死亡。用Regas印in2做了一個陽性對照實驗。對照組小鼠注射100 μg LPS，而Regasepin2實驗組的小鼠在注射LPS 5分鐘之後,每隻小鼠再注射0.7 mg的多肽。通過製作Kaplan-Meier生存曲線發現Regasepin2可有效的保護注射了 100 Kg的小鼠,提高了生存率。成功地在小白鼠上建立內毒素休克模型之後，用該模型檢測EDDGYHSKSM的體內活力。對照組小鼠(12隻)注射100 μg LPS，而多肽抑制劑組小鼠(12隻)在注射LPS 5 min後，每隻小鼠注射0.7 mg多肽抑制劑。用Kaplan-Meier生存曲線分析，多肽EDDGYHSKSM可有效地保護小白鼠，提聞內毒素休克小鼠的生存率。
【權利要求】
1.免疫球蛋白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽4，其特徵在於其序列為EDDGYHSKSM。
2.免疫球蛋 白K輕鏈基因增強子抑制蛋白多肽4在治療急性炎症藥物中的應用。
【文檔編號】A61K38/08GK103923172SQ201410020897
【公開日】2014年7月16日 申請日期:2014年1月17日 優先權日:2014年1月17日
【發明者】邢將軍, 許劉華, 彭立軍, 任世闊, 華俊國, 曹銘, 劉加根, 劉明明, 汪士金, 施新華, 劉偉峰, 嚴明 申請人:南通誠信胺基酸有限公司