一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊苷-2的方法

2023-09-23 12:50:55

一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊苷-2的方法
【專利摘要】本發明公開了一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊苷-2的方法，涉及中藥化合物單體的製備方法。本發明步驟為，藥材的提取；大孔樹脂富集；聚醯胺純化；樣品的精製；以D101大孔樹脂、聚醯胺、Sephadex LH-20、ODS為填料，設計技術流程，建立一種從溪黃草中製備紐西蘭牡荊苷-2的方法。本發明的有益效果：本發明能有效地從溪黃草水提液中分離製備紐西蘭牡荊苷-2，為進一步明確溪黃草藥效物質基礎提供依據；紐西蘭牡荊苷-2具有較強的生物活性，製備的紐西蘭牡荊苷-2可用作標對照品，用於控制溪黃草藥材的質量。具有方法簡便、穩定、重現性好等優點，經過中式放大，可大量製備紐西蘭牡荊苷-2單體化合物，開展更多的藥理藥效實驗，為溪黃草這一嶺南中藥資源的進一步開發利用提供科學依據。
【專利說明】-種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊音-2的方法

【技術領域】
[0001] 本發明涉及中藥材單體化合物的分離方法，具體涉及從溪黃草中分離紐西蘭牡荊 巧-2的方法。

【背景技術】
[0002] 中藥溪黃草[/soob/? sarra(Maxim. )Kudo]為民間常用草藥。溪黃草性味苦、甘、 寒，歸肝、膽經，具有清熱利溼、退黃、涼血散癒的功效，民間歷代名醫把溪黃草用作清熱巧 溼、利膽退黃藥，治療急性黃痘型肝炎、急性膽囊炎，為預防和治療肝膽疾病的常用藥。現代 藥理實驗表明，溪黃草水提液具有較強的抗炎、保肝利膽、抗氧化、抗腫瘤等作用。
[0003] 然而溪黃草藥效物質基礎不夠明確，過去一直停留在對其低極性成分的研究，對 其水溶性成分涉足較少，嚴重阻礙了溪黃草資源的進一步開發利用。紐西蘭牡荊巧-2是從 溪黃草中分離製得的水溶性極強的碳巧黃麗，具有較強的抗氧化、抗炎、抗腫瘤作用。


【發明內容】

[0004] 本發明的目的為建立一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊巧-2的方法，通過建立的 方法製備紐西蘭牡荊巧-2單體化合物。
[0005] 為達到本發明的目的所採用的技術方案；用柱色譜分離法建立一種從溪黃草中分 離紐西蘭牡荊巧-2的方法；具體包括如下步驟： ①、藥材的提取：取溪黃草乾燥藥材，10倍水煎提，3次，每次1.化，趁熱過濾，合併濾 液，並將濾液減壓濃縮至2. 4mg/mU即得溪黃草水提液。
[0006] ③、樣品的精製：溪黃草水提液上D101大孔樹脂柱，依次用水、10%-95%己醇洗 脫，收集己醇洗脫液，回收己醇，先用石油離萃取5次，棄去石油離層，下部的水層用己酸己 醋萃取5次，棄去己酸己醋層，收集下部的水層，上聚醜胺柱，用水洗脫，收集水洗脫液，上 S巧hadex LH-20柱，用50%甲醇洗脫，依次出現紅黑色、紅黃色、黃蹤色、淡綠色色帶，棄去 紅黑、紅黃及黃蹤色色帶部分，收集淡綠色色帶部分，濃縮至3. Omg/mU得水溶性黃麗溶液， 再過0DS柱，用20%-50%甲醇梯度洗脫，洗脫液50mL接一瓶，HPLC檢測，將含紐西蘭牡荊 巧-2純度較高的洗脫液合併，濃縮，放冷，結晶，倒出母液，洗塗晶體，重結晶，真空冷凍幹 燥，即得紐西蘭牡荊巧-2樣品。
[0007] 進一步優選的方法可W通過下述步驟實施： 所述步驟③樣品的精製，D101大孔樹脂，用95%己醇浸泡過夜，裝柱，水洗至無醇味，備 用；聚醜胺（80-100目），用95%己醇混息，裝柱，水洗至無醇味，備用；S巧hadex LH-20用甲 醇-水（1 ;1)溶脹化，裝柱，備用；0DS填料用甲醇混息，裝柱，梯度降至20%甲醇，備用；水 提液用溼法上樣法上D101大孔樹脂柱，水洗至顏色很淡，再用95%己醇洗脫，至顏色很淡， 收集95%己醇洗脫液，回收己醇，先用石油離萃取5次，棄去石油離層，下部的水層再用己酸 己醋萃取5次，棄去己酸己醋層，收集下部的水層，濃縮旋去少量有機溶劑，得水層濃縮液， 用溼法上樣法上聚醜胺（80-100目）柱，先用2倍柱體積水洗脫，棄去，繼續用水洗脫，至顏 色很淡，收集水洗脫液，濃縮至5. Omg/mU加入等體積的甲醇，超聲混勻，靜置，濾過，得濾 液，用溼法上樣法上Se地adex LH-20柱，50%甲醇洗脫，依次出現紅黑色、紅黃色、黃蹤色、 淡綠色色帶，棄去紅黑、紅黃及黃蹤色色帶部分，收集淡綠色色帶部分，濃縮至3. 〇111肖/111以得 水溶性黃麗溶液，用溼法上樣法上ODS柱，20% - 25% - 30% - 35% - 50%甲醇梯度洗脫，每 個梯度洗3倍柱體積，洗脫液50mL接一瓶，HPLC檢測，將含紐西蘭牡荊巧-2純度較高的洗 脫液合併，濃縮，放冷，結晶，倒出母液，洗塗晶體，重結晶，真空冷凍乾燥，即得紐西蘭牡荊 巧-2樣品。
[0008] 本發明的原理是根據溪黃草水提液中主要化學成分是碳巧黃麗物質，其極性較大 且有較多酷輕基，再結合D101大孔樹脂、聚醜胺、S巧hadex LH-20、0DS填料的性質，制定出 一套從溪黃草中分離製備紐西蘭牡荊巧-2的方法。
[0009] 本發明的有益效果如下： m本發明能有效地從溪黃草水提液中分離製備紐西蘭牡荊巧-2,為進一步明確溪黃草 藥效物質基礎提供依據。
[0010] [引紐西蘭牡荊巧-2具有較強的生物活性，本發明製備的紐西蘭牡荊巧-2可作標 準對照品，用於控制溪黃草藥材的質量。
[0011] 巧]本發明具有方法簡便、穩定、重現性好等優點，經過中式放大，可大量製備新西 蘭牡荊巧-2單體化合物，開展更多的藥理藥效學研究。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 圖1、溪黃草中製備紐西蘭牡荊巧-2的技術流程。
[0013] 圖2、紐西蘭牡荊巧-2的結構。

【具體實施方式】
[0014] 為能進一步了解本發明的特徵、技術手段W及所達到的目的、功能，解析本發明的 優點與精神，藉由W下結合附圖與【具體實施方式】對本發明的詳述得到進一步的了解。
[0015] 實施例一：從溪黃草中分離紐西蘭牡荊巧-2 1.儀器與試藥 1. 1儀器Shimadzu高效液相色譜儀（LC-20AT粟；S比-20A自動進樣器；SPD-20A二 極管陣列檢測器）Jhermo Hypersil Gold C18 色譜柱（250 mmX4. 6mm，5Mm) ;CP22抓十萬 分之一電了天平（德國Sartorius公司）；BP110S萬分之一天平（德國Sartorius公司）； KQ3200DE醫用數控超聲清洗器（崑山市超聲儀器有限公司）；LCQ Deca XP液一質聯用儀； Bruker AVANCE III皿500超導脈衝傅立葉變換核磁共振譜儀。
[0016] 1. 2試劑甲醇、95%己醇(分析純)、超純水；D101大孔樹脂、聚醜胺（80-100目）、 Sephadex LH-20、孤S。
[0017] 2.藥材的提取；取溪黃草乾燥藥材（3. 0kg)，10倍水煎提，3次，每次1.化，趁熱過 濾，合併濾液，將濾液減壓濃縮至2. 4mg/mU即得溪黃草水提液。
[001引 3.大孔樹脂富集，取3. 0kg的D101大孔樹脂，用95%己醇浸泡過夜，裝柱，水洗至 無醇味，水提液溼法上樣，水洗至顏色較淡，再用95%己醇洗脫，洗至顏色很淡，收集95%己 醇洗脫液。
[0019] 4.聚醜胺純化，95%己醇洗脫液回收己醇，先用石油離萃取5次，棄去石油離層， 下部的水層再用己酸己醋萃取5次，棄去己酸己醋層，收集下部的水層，濃縮旋去少量有機 溶劑，得水層濃縮液。取聚醜胺（80-100目），用95%己醇混息，裝柱，水洗至無醇味，水層濃 縮液溼法上樣，水洗2倍柱體積，棄去，繼續用水洗，收集水洗液。
[0020] 5.樣品的精製；水洗液濃縮至5. Omg/mU加入等體積的甲醇，超聲混勻，靜置，濾 過，得濾液。S巧hdex LH-20用甲醇-水（1 ;1)溶脹化，裝柱，濾液溼法上樣，甲醇-水（1 ;1) 洗脫，依次出現紅黑色、紅黃色、黃蹤色、淡綠色色帶，收集淡綠色色帶部分，濃縮至3. Omg/ mU得水溶性黃麗溶液。ODS填料用甲醇混息，裝柱，梯度降至20%甲醇，水溶性黃麗溶液 溼法上樣，20% - 25% - 30% - 35% - 50%甲醇梯度洗脫，每個梯度洗3倍柱體積，洗脫液 50mL -瓶，HPLC檢測，將含紐西蘭牡荊巧-2純度較高的洗脫液合併，濃縮，放冷，析晶，再結 晶，倒出母液（母液濃縮繼續結晶），洗塗晶體，真空冷動乾燥，精製得紐西蘭牡荊巧-2樣品 80. 8mg〇
[0021] 通過上述方法所建立的一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊巧-2的技術流程如圖1 所示。
[0022] 所分離的紐西蘭牡荊巧結構如圖2所示。
[0023] W上所述實施例僅表達了本發明的部分實施方式，於此所掲示的實施例與所有觀 點，應被視為用W說明本發明，其描述較為具體和詳細，但並不能因此而理解為對本發明範 圍的限制。應當指出的是，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提 下，還可W做出若干變形和改進，該些都屬於本發明的保護範圍。因此，本發明的保護範圍 應W權利要求為準，並涵蓋其合法均等物。
【權利要求】
1. 一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊苷-2的方法，該方法包括如下步驟： ① 、藥材的提取：取溪黃草乾燥藥材，10倍水煎提，3次，每次I. 5h，趁熱過濾，合併濾 液，並將濾液減壓濃縮至2. 4mg/mL，即得溪黃草水提液； ② 、樣品的精製：溪黃草水提液上DlOl大孔樹脂柱，依次用水、10%-95%乙醇洗脫，收集 乙醇洗脫液，回收乙醇，先用石油醚萃取5次，棄去石油醚層，下部的水層用乙酸乙酯萃取5 次，棄去乙酸乙酯層，收集下部的水層，上聚醯胺柱，用水洗脫，收集水洗脫液，上S^hadex LH-20柱，用50%甲醇洗脫，依次出現紅黑色、紅黃色、黃棕色、淡綠色色帶，棄去紅黑、紅黃 及黃棕色色帶部分，收集淡綠色色帶部分，濃縮至3.Omg/mL，得水溶性黃酮溶液，再過ODS 柱，用20% - 50%甲醇梯度洗脫，洗脫液50mL接一瓶，HPLC檢測，將含紐西蘭牡荊苷-2純 度較高的洗脫液合併，濃縮，放冷，結晶，倒出母液，洗滌晶體，重結晶，真空冷凍乾燥，即得 紐西蘭牡荊苷-2樣品。
2. 根據權利要求1所述的一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊苷_2的方法，其特徵在 於： 所述步驟②樣品的精製，DlOl大孔樹脂，用95%乙醇浸泡過夜，裝柱，水洗至無醇味，備 用；聚醯胺（80-100目），用95%乙醇混懸，裝柱，水洗至無醇味，備用；SephadexLH-20用甲 醇-水（1 :1)溶脹4h，裝柱，備用；ODS填料用甲醇混懸，裝柱，梯度降至20%甲醇，備用；水 提液用溼法上樣法上DlOl大孔樹脂柱，水洗至顏色很淡，再用95%乙醇洗脫，至顏色很淡， 收集95%乙醇洗脫液，回收乙醇，先用石油醚萃取5次，棄去石油醚層，下部的水層再用乙酸 乙酯萃取5次，棄去乙酸乙酯層，收集下部的水層，濃縮旋去少量有機溶劑，得水層濃縮液， 用溼法上樣法上聚醯胺（80-100目）柱，先用2倍柱體積水洗脫，棄去，繼續用水洗脫，至顏 色很淡，收集水洗脫液，濃縮至5.Omg/mL，加入等體積的甲醇，超聲混勻，靜置，濾過，得濾 液，用溼法上樣法上S印hadexLH-20柱，50%甲醇洗脫，依次出現紅黑色、紅黃色、黃棕色、 淡綠色色帶，棄去紅黑、紅黃及黃棕色色帶部分，收集淡綠色色帶部分，濃縮至3.Omg/mL,得 水溶性黃酮溶液，用溼法上樣法上ODS柱，20% - 25% - 30% - 35% - 50%甲醇梯度洗脫，每 個梯度洗3倍柱體積，洗脫液50mL接一瓶，HPLC檢測，將含紐西蘭牡荊苷-2純度較高的洗 脫液合併，濃縮，放冷，結晶，倒出母液，洗滌晶體，重結晶，真空冷凍乾燥，即得紐西蘭牡荊 苷-2樣品。
3. 根據權利要求1-2任一項所述的一種從溪黃草中分離紐西蘭牡荊苷-2的方法，其特 徵在於：所製備的紐西蘭牡荊苷-2,為芹菜素6,8-二-C-^D-葡萄糖苷，水溶性極強的碳 苷黃酮，且有多方面的生物活性，可作標準對照品用於溪黃草的含量測定。
【文檔編號】C07D407/04GK104447720SQ201410763353
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月12日 優先權日:2014年12月12日
【發明者】賴小平, 黃松, 唐海明 申請人:東莞廣州中醫藥大學中醫藥數理工程研究院