變棲克雷伯菌(Klebsiellavariicola)SH-1菌株的應用的製作方法
2023-12-04 22:48:36 1
變棲克雷伯菌(Klebsiella variicola)SH-1菌株的應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及變棲克雷伯菌(Klebsiella variicola)SH-1菌株的應用，屬中藥材【技術領域】。本發明的生產菌株變棲克雷伯菌(Klebsiella variicola)SH-1，已於2013年8月8日保藏在武漢中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC M 2013367。本發明的變棲克雷伯菌(Klebsiella variicola)SH-1菌株，用利福平標記方法確定能在石斛上定殖，能夠作為製備用於促進石斛生長的製劑中的應用。本發明的優點在於具有對人、畜、農作物安全和環境友好的特點；對石斛有顯著促生長效果。CCTCC NO：M 20133672013.08.08
【專利說明】變棲克雷伯菌（Klebsiellavariicola)SH-1菌株的應用
【技術領域】：
[0001] 本發明涉及變棲克雷伯菌（Klebsiellavariicola)SH-l菌株的應用，屬中藥材技 術領域。
【背景技術】：
[0002] 石斛為蘭科石斛屬植物，是一種名貴中草藥，有一定解熱鎮痛作用，能促進胃液分 泌，助消化。有增強新陳代謝、抗衰老等作用。屬於多年生附生草本，高30?50釐米。莖叢 生，多節，節間長2.5?3.5釐米。野生石斛多附生於高山巖石或森林中的樹幹上。喜溫暖 溼潤氣候和半陰半陽的環境，不耐寒。分布四川、貴州、雲南、湖北、廣西、臺灣等地有栽培。 全年均可採挖，但以秋後採挖者質量好。採回後如保存鮮用時，在春、秋季則應及時栽培於 細砂石中，放置陰溼處，經常澆水使根部保持溼潤。在冬天應平放於竹筐內，上蓋蒲包，但應 注意空氣流通。
[0003] 關於栽培技術。由於石斛主要栽培於溫室或大棚，其溫度和溼度相對而言較易控 制，所以用無性繁殖或試管苗快速繁殖技術已經很成熟，在選附主、繁殖、田間管理、防治病 蟲等方面的配套措施也很完善。然而在相同肥水管理條件下，通過使用微生物菌劑促進石 斛生長健壯、根系發達、萌櫱多，對石斛安全生產及可持續性發展具有極大的應用前景，是 有前途的方法。本發明涉及施用微生物菌劑促進石斛生長的應用。
【發明內容】
：
[0004] 本發明的在於提供一種變棲克雷伯菌（Klebsiellavariicola)SH-I菌株的
[0005]應用。
[0006] 本發明的生產菌株變棲克雷伯菌（Klebsiellavariicola)SH_l，已於2013年8月 8日保藏在武漢中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCCM2013367。保藏單位地址：武 漢市武昌珞珈山武漢大學中國典型培養物保藏中心。
[0007] 本發明的變棲克雷伯菌（Klebsiellavariicola)SH_l菌株，用利福平標記方法 確定能在石斛上定殖，能夠作為製備用於促進石斛生長的製劑中的應用。
[0008] 本發明的優點在於：具有對人、畜、農作物安全和環境友好的特點；對石斛有顯著 促生長效果。
【具體實施方式】：
[0009] 一、菌株的獲得
[0010] 本發明菌株的獲得方法為常規方法，具體如下：
[0011] 新鮮鐵皮石斛莖杆採自德宏，滅菌水洗淨晾乾後切成小段（1cm)，用70%乙醇表 面消毒5min，然後滅菌水漂洗3次，採用無菌操作技術縱向剖開莖杆，將剖開的莖杆置於馬 鈴薯葡萄糖液體培養基中30°C培養7天，取培養所得的菌液lmL，加到盛有9mL無菌水的試 管中，30°C搖床振蕩培養20min，製成樣品懸浮液。取ImL懸浮液加入盛有9mL無菌水的試 管中進行10倍系列稀釋，選擇10-5-10-7的稀釋液分別取0.lmL，在PDA平板上採用稀釋塗 布法分離純化，30°C培養12-24h，挑取菌落形態不同的單菌落於PDA培養基平板上培養並 保存備用。
[0012] 篩選：將病原接種在PDA培養基平板中心，用已分離純化出的細菌做成菌懸液，取 IOOuL菌懸液置於中心四周，28°C培養觀察對峙培養抑菌情況。將抑制效果明顯的細菌進行 形態、生理生化鑑定和16SrDNA分析。
[0013] 形態鑑定：LB固體培養基上純化培養細菌，觀察菌落形態、菌體形態。
[0014] 生理生化鑑定：參照常用細菌鑑定手冊，採用吲哚試驗、V-P試驗、H2S試驗等對分 離出的細菌進行生理生化檢測。
[0015] 16SrDNA序列測定：採用CTAB/NaCl法提取SH-I基因組DNA。用於擴增 的引物為 16SrDNA擴增通用引物，27F:5 ' -AGAGTITTATCNTGGCTCAG-3 '和 1492R: 5 ' -GGYTACCTTGTTACGACTT-3 '。擴增所得PCR產物有上海生工測序，測得的序列與 Genbank中已有的16SrDNA序列進行同源性比對。
[0016] 表I.SH-I菌株鑑定的形態及生理生化特徵
【權利要求】
1.變棲克雷伯菌（Klebsiella variicola)SH-l菌株在製備石斛生長製劑中的應用。
【文檔編號】A01P21/00GK104351255SQ201410627779
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年11月10日 優先權日:2014年11月10日
【發明者】趙明富, 文國松, 徐紹忠, 李夢嬌 申請人:雲南農業大學