一種由白介素-ii組成的生物調節劑的製作方法
2023-12-05 18:26:16 1
專利名稱：一種由白介素-ii組成的生物調節劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種高效的生物反應調節劑，能在體外試驗中極大地提高所誘導的LAK細胞對癌細胞殺傷的能力。可直接運用於腫瘤和愛滋病的免疫學和生物學治療。
目前在國際生物免疫學界發展和研製生物反應調節劑(BRMS)的熱潮中，幹擾素是最典型的調節劑，但由於只能取得部分免疫恢復的效果，其應用受到了限制(J.Clin.Oncol.4.1101-1109(1986))，而另一有效的生物調節劑白介素-Ⅱ低濃度時對LAK細胞誘導的殺傷力弱，在高濃度時對腫瘤殺傷力強，但在體內試驗有強的副作用以至人們對之使用前景有所懷疑(JAMA，256，3141(1986))。因此尋求一個具有完全免疫恢復效果，低濃度(接近於體內環境)具有誘導LAK細胞強大的殺傷力的生物反應調節劑很有意義。
本發明的目的在於提供一種有效的生物反應調節劑。它在體內的效果類似於體外效果，能誘導LAK細胞大量殺傷腫瘤細胞從而能對腫瘤患者、愛滋病病人及其他免疫缺陷病人起到良好的治療作用。
本發明的內容與要點在於，生物反應調節劑是由黃芪提取成份F3與白細胞介素-Ⅱ組成，獲得了比單獨使用白介素-Ⅱ所誘導的LAK細胞強大得多的殺傷效果，從而首次開創減少白介素-Ⅱ用量而不影響殺傷效果的習能性，為白介素-Ⅱ功擊惡性腫瘤的生物免疫學治療拓開了新的前景。本發明中黃芪提取成份F3(簡稱F3)由以下方法製備乾燥黃芪根通過200孔羅研磨成細粉，以每100克乾粉1.5升去離子水的比例回流提取。上清液過濾後旋轉脫水濃縮15倍。為了分離和鑑定黃芪中的活性部分，用凝膠濾過色層分離法來分離粗提物。將上述樣品置250°F高壓消毒20分鐘後，20℃常溫中超離心(40000×G)30分鐘。將5ml所得上清液加到2.6×100cm口徑Sephacryl S-200柱中(分離範圍是多糖1000-80000分子量)，用去離子水平衡之。過柱以25ml/小時的液流速度洗脫，每管收集6ml，吸收光強為280nm，參見洗脫圖3。洗脫物分為四部分，分別命名為F1、F2、F3、F4。(F1含有最高分子量成份，F4含最低分子量的成份)。將這些樣品旋轉脫水再用水重新調整到最初上柱容積5ml。高壓消毒後儲存於4℃，供做乾重，碳水化合物和蛋白質成份分析。F2分子量範圍為13000-22000。成份主要為碳水化合物佔99%。蛋白質含量不到1%。本發明的要點在於按上述方法提取的混合物F3以濃度30-1000ug/ml與白介素-Ⅱ濃度為10-2000u/ml形成的組合物作為一個新的生物反應調節劑。這種新的生物調節劑比單純使用白介素-Ⅱ誘導的LAK細胞殺傷的生物學效應大(
圖1，圖2)。
本發明的優點與積極效果在於新的生物調節劑能在低濃度時(接近體內濃度)誘導LAK細胞對腫瘤及其它免疫性疾病的治療，從而提供了一個具有完全恢復免疫功效的生物調節劑。
本發明的附圖及說明。
圖1表示加用F3後，經白介素-Ⅱ誘導的LAK細胞殺傷的生物學效應大大增強。橫坐標為白介素-Ⅱ的濃度，以u/ml表示;縱坐標為對A375P黑色素瘤的殺傷百分數。2條殺傷曲線的比較，實線為單純白介素-Ⅱ所誘導的殺傷，虛線為F3加白介素-Ⅱ所誘導的殺傷。特別是在接近人體真實情況的低濃度白介素-Ⅱ存在時，F3的加入提高殺傷非常顯著。如10u/ml的白介素-Ⅱ只有2%的殺傷，而加F3後達20%殺傷。
圖2，顯示F3對於LAK細胞的殺傷增強作用，加用F3後即使對於低效應細胞/靶細胞比例值，如T∶E＝1∶30，也有明顯的增強效應，使之恢復增強到高效應細胞/靶細胞比例組(T∶E＝1∶60)。如在A375P黑色素瘤系中，低T∶E＝1∶30組未加F3時殺傷僅有16±8%，加用後上升到33±15%與高T∶E＝1∶60的殺傷水平28±17%相似，說明F3加入後可以減少效應細胞數量的一倍。
圖3，黃芪組成的提取洗脫圖。
實施例1、白介素-Ⅱ100u/ml2、黃芪提取物F355ug/ml
權利要求
1.一種新的生物調節劑，其特徵在於生物反應調節劑是由黃芪提取物F3與白介素-Ⅱ組成的組合物。
2.根據權利要求1所述的生物調節劑，其特徵在於黃芪提取物F3濃度為30-1000ug/ml。
3.根據權利要求1、2所述的生物調節劑，其特徵在於白介素-Ⅱ濃度為10-2000u/ml。
4.一種製備權利要求1所述的生物調節劑的方法，其特徵在於乾燥黃芪根研磨成細粉，以每100克乾粉1.5升去離子水的比例回流提取，上清液過濾後旋轉脫水濃縮15倍，經凝膠過濾色層分離法分離，樣品在250°F高壓消毒20分鐘後，20℃常溫中超速離心，將上清液過Sephacryl S-200柱，在280nm監測收集F3脫水調整到所需濃度，F3與白介素-Ⅱ配製成新的生物調節劑。
全文摘要
本發明從黃芪各成分中篩選到一組分(F
文檔編號C07G99/00GK1047296SQ89103120
公開日1990年11月28日 申請日期1989年5月13日 優先權日1989年5月13日
發明者儲大同 申請人:儲大同