治療自身免疫疾病和炎性疾病的方法

2023-12-08 18:45:41

專利名稱：治療自身免疫疾病和炎性疾病的方法
技術領域：
本發明通常涉及利用CD3調節劑如抗CD3抗體來誘導免疫耐受以及調節免疫反應，來治療自身免疫疾病和/或炎性疾病。
背景技術：
免疫系統高度複雜，被嚴緊調控，具有許多替代途徑能夠彌補系統其它部分的缺陷。然而有時如果活化，免疫反應也成為一些疾病或其它不良狀態的病因。這種疾病或不良狀態例如為自身免疫疾病、移植後的排斥反應、對無害抗原的過敏反應、牛皮癬、慢性炎性疾病如動脈粥樣硬化和普通炎症。在這些情況和其它涉及不當或不希望的免疫反應的情況下，臨床上需要進行免疫抑制。
因此，需要可用於治療免疫相關疾病和/或病症的組合物。
發明概述本發明基於以下發現，即CD3表達或活性的調節導致臨床眼色素層炎大鼠模型中炎症的抑制和臨床動脈粥樣硬化小鼠模型中粥樣硬化斑塊發展的降低。因此，本發明描述了預防或抑制身體組織中炎症的方法。發炎組織的特徵是組織發紅、疼痛和腫脹。眼色素層炎的特徵為視敏度下降、玻璃體(眼的後部)及前房中有細胞和渾濁物(纖維蛋白、變性蛋白質)。這些組織包括眼組織如眼色素層，心臟組織如靜脈、動脈或毛細血管。
通過將細胞或組織暴露於導致促炎細胞因子生成減少、抗炎細胞因子增加的量或導致免疫耐受的量的CD3調節劑，抑制炎症反應。
本發明提供了通過將CD3表達細胞暴露於與CD3調節劑來抑制動脈粥樣硬化斑塊形成的方法。與暴露於CD3調節劑前相比，暴露於CD3調節劑後動脈粥樣硬塊受到抑制，與動脈壁相連的斑塊量減少。
這種細胞可以是任何能夠表達CD3的細胞，例如淋巴細胞如T-細胞。該T-細胞是循環T-細胞，即在血液和淋巴中。或者，該T-細胞也存在於組織中，如淋巴結、淋巴導管、淋巴管和脾臟。該組織是發炎組織(或者是有發炎風險的組織)。暴露是指將細胞或組織與CD3調節劑接觸。組織細胞可以直接或間接(即全身性)與之接觸。細胞可以在體內、體外或試管中接觸。
本發明同時也描述了預防和減緩炎性疾病症狀的方法，該方法是通過鑑別患有或有風險患炎性疾病的對象，並給予該對象CD3調節劑。
CD3調節劑是能夠降低CD3表達或活性的化合物。CD3的活性包括T-細胞活化。T-細胞活化的檢測方法在本領域是熟知的。CD3調節劑包括例如抗CD3抗體。單獨給予或與另一種抗炎劑或免疫抑制藥聯合給予CD3調節劑，用來治療炎性疾病。例如，CD3調節劑可與皮質類固醇、抑制素、β幹擾素、非甾體抗炎藥(NSAID)、氨甲喋呤、環孢黴素A或改變病情的抗風溼藥物(DMARD)一起給予。
對象是哺乳動物，如人、小鼠、大鼠、狗、貓、牛、馬和豬。對象患有或有風險患炎性疾病。炎性疾病包括心血管炎症、眼炎症、胃腸炎症、肝炎症、肺炎症、自身免疫疾病或肌肉炎症。根據本領域已知的方法，如組織的肉眼檢查、結合組織或血液的炎症檢測，可以鑑別患有或有風險患炎性疾病的對象。炎症症狀包括受影響組織的疼痛、發紅和腫脹。
除非另有定義，本文使用的所有科技和科學術語具有與本發明所屬領域中普通技術人員通常理解相同的含義。雖然與本文所述類似或相同的方法和材料可以用於實施或測試本發明，但適當的方法和材料在下面敘述。本文提到的所有出版物、專利申請、專利和其它參考文獻通過引用整體結合到本文中。如有衝突，以本說明書(包括定義)為準。另外，材料、方法和實施例僅僅是說明性的，並不具有限制性。
本發明的其它特徵和優點從下述發明詳述和權利要求書來看是顯而易見的。
附圖簡述

圖1是描述大鼠眼色素層炎模型中抗CD3治療的臨床和組織學效果的圖。
圖2是描述抗CD3治療對小鼠主動脈根部粥樣硬化斑塊發展的抑制作用的圖。
圖3是描述抗CD3治療對小鼠已有粥樣硬化損傷進展的抑制作用的圖。
發明詳述本發明部分基於以下發現，即調節CD3表達或其活性導致免疫反應下降和抗炎效果。更具體地說，給予抗CD3抗體導致與眼色素層炎有關的指徵和症狀的緩解和動脈粥樣硬化斑塊發展的降低。
CD3是成熟T-淋巴細胞內至少五種膜結合多肽的複合物，相互之間和與T-細胞受體非共價結合。CD3複合物包括γ、δ、ε、ζ和η鏈(也稱為亞基)。當抗原與T-細胞受體結合時，CD3複合物轉導活化信號到T-細胞的細胞質。
CD3調節劑CD3調節劑指調節CD3表達或活性的物質。調節意味著該物質增強、提高、降低或中和CD3的表達或活性。CD3的活性包括，例如轉導T-細胞活化信號。T-細胞的活化由鈣介導的細胞內cGMP增加或細胞表面IL-2受體增加來定義。例如，T-細胞活化增加的特徵是與化合物不存在時相比，該化合物存在時鈣介導的細胞內cGMP和/或IL-2受體減少。例如利用市售的檢測試劑盒，通過競爭性免疫測定或閃爍親合測定可以測定細胞內cGMP。例如通過測定與IL-2受體抗體如PC61抗體的結合，可以測定細胞表面IL-2受體。
CD3調節劑包括例如抗CD3抗體或其片段。任選抗CD3抗體是單鏈抗CD3抗體、雙功能抗CD3抗體或雜合(heteroconjugate)抗CD3抗體。抗體是活化性抗CD3抗體，那麼它誘導CD3活性。或者，抗體是中和性抗CD3抗體，那麼它降低CD3活性。
抗CD3抗體是本領域熟知的。示例性抗CD3抗體包括但不限於OKT3、G4.18、145-2C11、Leu4、HIT3a、BC3、SK7、SP34、RIV-9和UCHT1。優選抗CD3抗體結合與OKT3、G4.18、145-2C11、Leu4、HIT3a、BC3、SK7、SP34、RIV-9和UCHT1相同的表位。抗體優選已經過人源化或馬源化，以降低宿主對抗體的免疫反應。
本領域技術人員可理解，通過確定抗體是否阻止抗CD3抗體OKT3、G4.18、145-2C11、Leu4、HIT3a、BC3、SK7、SP34、RIV-9和UCHT1與CD3抗原多肽或其它T細胞表面抗原多肽的結合，有可能無需過多試驗便可測定前者與後者是否具有相同的表位。CD3抗原多肽例如是與另一個CD3亞基(如γ、δ、ε、ζ和η鏈)複合的CD3ε多肽。如果被測試的抗體與本發明抗體競爭，如本發明抗體的結合降低所示，則這兩種抗體結合相同或密切相關的表位。測定抗體是否具有本發明抗體的特異性的另一種方法是，將本發明抗體與CD3抗原多肽或T細胞表面抗原多肽(通常與本發明多肽反應)一起進行預培養，然後加入待測試抗體，測定待測定抗體結合CD3或T細胞表面抗原多肽的能力是否受到抑制。如果待測試抗體的結合受到抑制，很有可能該待測試抗體與本發明抗體有同樣的或功能等同的表位特異性。
本文所用術語「抗體」指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白(Ig)分子的免疫活性部分，即該分子含有能與抗原特異性結合(發生免疫反應)的抗原結合部位。這種抗體包括多克隆、單克隆、嵌合體、單鏈、Fab、Fab′和F(ab′)2片段和Fab表達文庫。這種抗體優選是完全人抗體。「特異性結合」或「免疫反應」指抗體與一個或多個期望抗原的抗原決定簇反應，並且與其它多肽不反應(即結合)或以低得多的親合力結合(Kd＞10-6)。
本文使用的術語「表位」包括任何能特異性結合免疫球蛋白、scFv或T-細胞受體的蛋白決定簇。術語「表位」包括任何能夠特異性結合免疫球蛋白或T-細胞受體的蛋白質決定簇。表位決定簇通常由分子如胺基酸或糖側鏈的化學活性表面組群組成，通常具有特定的三維結構特徵和特定的電荷特徵。認為當解離常數≤1μM時抗體特異性地與抗原結合，優選≤100nM，最優選≤10nM。
本文所用的術語「免疫結合」和「免疫結合性質」指發生在免疫球蛋白分子和其特異性抗原之間的非共價相互作用類型。免疫結合相互作用的強度或親合力可用相互作用的解離常數(Kd)來表示，其中Kd越小，親合力越大。用本領域中所熟知的方法可定量所選多肽的免疫結合特性。一種這樣的方法包括測定抗原結合位點/抗原複合物形成和分解的速率，這些速率取決於同樣影響兩方向速率的複合物配偶體的濃度、相互作用的親合力和幾何參數。因此可通過計算濃度及解離和結合的實際速率來測定「締合速率常數」(Kon)和「解離速率常數」(Koff)(參見Nature 361186-87(1993))。Koff/Kon的比例能消除所有與親合力無關的參數，等於解離常數Kd(參見Davies et al.(1990)Annual Rev Biochem 59439-473)。當平衡結合常數(Kd)≤1μM、優選≤100nM、更優選≤10nM、最優選≤100pM至約1pM時，認為本發明抗體特異性結合CD3表位，如本領域技術人員已知的放射配體結合實驗或類似實驗的測定。
為了提高抗體在治療免疫相關疾病中的有效性，對本發明抗體的效應子功能進行修飾是合乎需要的。例如，可以將半胱氨酸殘基導入Fc區域，從而允許該區域中鏈間二硫鍵的形成。這樣產生的同二聚抗體可具有提高的內化能力和/或提高的補體介導細胞殺傷作用和抗體依賴性細胞毒作用(ADCC)(參見Caron et al.，J.Exp Med.1761191-1195(1992)和Shopes，J.Immunol.，1482918-2922(1992))。或者，可改造抗體使其具有兩個Fc區域，從而可具有提高的補體溶解和ADCC能力(參見Stevenson et al.，Anti-Cancer Drug Design，3219-230(1989))。
抗體通過熟知的技術純化，如利用A蛋白或G蛋白(主要提供免疫血清的IgG級分)的親合色譜法。隨後或作為替代，可將特異性抗原(為免疫球蛋白識別的靶)或其表位抗原固定在柱上，以通過免疫親合層析法來純化免疫特異性抗體。對免疫球蛋白純化的討論參見例如D.Wilkinson(The Scientist，The Scientist，Inc.出版，PhiladelphiaPA，Vol.14，No.8(April 17，2000)，pp.25-28)。
治療方法通過暴露，例如將組織或CD3表達細胞與CD3調節劑(如抗CD3抗體)接觸，來抑制炎症。CD3表達細胞例如是淋巴細胞例如T-細胞。T-細胞包括T細胞毒性細胞，T輔助細胞(例如Th1和Th2)和自然殺傷T-細胞。待治療的組織包括胃腸組織(如腸組織)、心臟組織(如靜脈、動脈或毛細血管)、肺組織、皮膚組織、眼組織(例如虹膜、睫狀體或脈絡膜)或肝組織。
炎性抑制的特徵是與未接觸CD3調節劑的組織相比，治療組織的發紅、疼痛和腫脹降低。或者，對眼色素層炎而言，炎症抑制的特徵在於視敏度增強，眼玻璃體(即眼後部)和前房中的細胞和混濁度(纖維蛋白、變形蛋白)減少。組織或細胞直接與CD3調節劑接觸。或者，全身性給予CD3調節劑。給予足量的CD3調節劑，以降低(例如抑制)促炎細胞因子的產生。促炎細胞因子是誘導炎性反應的細胞因子。促炎細胞因子包括例如白介素(IL)-1、腫瘤壞死因子(TNF)、IL-17、IL-8和巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP-Iα)。或者，給予足量CD3調節劑，以增加(例如促進)抗炎細胞因子的產生。抗炎細胞因子是減少炎症反應的細胞因子。更具體地說，抗炎細胞因子控制促炎細胞因子反應來調節免疫應答。抗炎細胞因子包括如白介素(IL)-1受體拮抗劑、TGFβ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-11和IL-13。在如血清、血漿或組織中檢測細胞因子。通過本領域所熟知的方法來檢測細胞因子的生成。例如，用對促炎細胞因子或抗炎細胞因子有特異性的免疫分析法測定細胞因子的生成。
通過觀察組織損傷、局部發紅、受影響部位的腫脹、眼玻璃體和前房中的細胞和混濁，來形態學評定炎症反應。或者，通過測定組織、血清或血漿中的C反應性蛋白或IL-1來測定炎症反應。白細胞計數返回基線也表明炎症的減輕。
或者，通過將組織或CD3表達細胞暴露於一定量的CD3調節劑，以重新分布和/或清除細胞(如淋巴細胞)表面上的CD3-T細胞受體複合物或CD3複合物，來減輕炎症。例如，將CD3表達細胞暴露於一定量的CD3調節劑，以調節(即減少)CD3表達細胞-細胞的接觸。細胞上TcR的細胞表面表達或活性水平的降低意味著TcR數量或功能降低。調節CD3的細胞表面表達或活性水平意味著改變，例如降低，細胞表面上的CD3數量或其功能。例如通過細胞與CD3調節劑接觸時CD3或TcR的內化作用，使細胞質膜上表達的CD3或TcR的量降低。或者，細胞與CD3調節劑接觸時CD3被封閉。重新分布和/或消除細胞表面上的CD3-T細胞受體複合物導致免疫抑制或免疫耐受。免疫抑制是對所有抗原都不能產生常規免疫應答，致使一種或多種自身免疫疾病的症狀得到緩解或炎症反應減輕。一旦停止用CD3調節劑進行治療，免疫抑制是可逆的。因此，免疫抑制尤其用於治療或緩解急性炎性疾病的症狀。相反，免疫耐受是對特定抗原不能產生免疫應答，導致一種或多種自身免疫疾病的症狀得到緩解或炎症反應降低，這在治療終止時仍能長期維持。治療終止後免疫耐受可維持至少1周、1個月、3個月、6個月、1年、2年、5年或更多年。因此免疫耐受尤其用於治療或減輕慢性炎性疾病的症狀。長期的免疫耐受可通過可溶機制如細胞因子獲得，或者可通過直接細胞-細胞接觸獲得，後者涉及但不限於粒酶A、粒酶B和/或穿孔蛋白。
通過給予對象CD3調節劑，減少或阻止動脈粥樣硬化斑塊在動脈即動脈壁上的形成。斑塊是膽固醇、其它脂肪物質、鈣以及血液成分的複合物，累積在動脈壁襯層內。粥樣硬化斑塊減少定義為腔狹窄減輕，即腔變寬。腔寬度通過本領域中所熟知的方法測定，例如血管造影術和都卜勒速度波形分析。
這種方法用於減輕多種炎性疾病或自身免疫疾病的症狀。炎性疾病為急性或慢性。炎性疾病包括心血管炎症(例如動脈粥樣硬化、中風)、胃腸炎症、肝臟炎性疾病、肺炎症(例如哮喘、空調引發的肺損傷)、腎炎症、眼炎症(例如眼色素層炎)、胰臟炎症、生殖泌尿炎症、神經炎性疾病(例如多發性硬化症、阿爾茨海默病)、變態反應(例如過敏性鼻炎/竇炎、皮膚過敏疾病(例如蕁麻疹、血管性水腫、特應性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬)、食物過敏、藥物過敏、昆蟲過敏、肥大細胞增生病)、骨炎症(例如關節炎、骨關節炎、類風溼性關節炎、脊椎關節病)、感染(例如細菌感染或病毒感染)、口腔炎性疾病(例如perodontis、齦炎或口炎)和移植(例如同種異體移植物或異種移植物排斥反應或母親-胎兒耐受)。
自身免疫疾病包括例如獲得性免疫缺陷綜合症(AIDS，為帶有自身免疫成分的病毒病)、斑禿、關節強直性脊椎炎、抗磷脂綜合症、自身免疫阿狄森病、自身免疫溶血性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性內耳病(AIED)、自身免疫淋巴細胞增生症候群(ALPS)、自身免疫血小板減少性紫癜(ATP)、貝切特病、心肌病、腹腔口炎性腹瀉-皰疹樣皮炎、慢性疲勞免疫異常症候群(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘多神經病(CIPD)、瘢痕性天皰瘡、冷凝集素病、crest症候群、節段性迴腸炎、惡性丘疹病、少年皮肌炎、盤狀狼瘡、特發性混合型冷沉澱球蛋白血症、纖維肌炎、甲狀腺機能異常、急性特發性多神經炎、橋本甲狀腺炎、原發性肺纖維化、原發性血小板減少性紫癜(ITP)、IgA腎病、胰島素依賴型糖尿病、青少年慢性關節炎(斯提耳病)、青少年類風溼性關節炎、Meniere病、混合性結締組織病、多發性硬化症、重症肌無力、惡性貧血、結節性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體症候群、風溼性多肌病、多發性肌炎和皮膚肌炎、原發性無丙種球蛋白血症、原發性膽汁性肝硬變、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、Raynaud現象、Reiter綜合症、風溼熱、類風溼性關節炎、結節病、硬皮病(進行性全身性硬化症(PSS)，也稱為全身性硬化症(SS))、Sjogren症候群、僵體症候群、系統性紅斑狼瘡、無脈病、顳動脈炎/巨細胞動脈炎、潰瘍性結腸炎、眼色素層炎、白癲風和Wegener肉芽腫病。
本文描述的方法導致本文所述炎性疾病或自身免疫疾病的一種或多種症狀的嚴重性減輕或緩解。結合任何診斷或治療具體炎性疾病的已知方法確定療效。炎性疾病或自身免疫疾病的一種或多種症狀的減輕表明該化合物具有臨床價值。炎性疾病和自身免疫疾病通常由醫生或獸醫使用標準方法來進行診斷和/或監測。
眼色素層炎眼色素層炎定義為眼色素層的炎症。眼色素層由三種結構組成虹膜、睫狀體和脈絡膜。虹膜是瞳孔周圍的有色結構，可見於眼前部。睫狀體是包含肌肉的結構，位於虹膜後，使晶狀體聚焦。脈絡膜是位於眼後部的含血管的層，位於視網膜與鞏膜之間。眼色素層炎的症狀包括視敏度下降、眼玻璃體和前房中的細胞和混濁(纖維蛋白、變性蛋白質)以及視網膜血管炎。虹膜可附著在晶狀體囊上(虹膜後粘連)，或較少情況下附著在周圍的角膜上(虹膜前粘連)。另外，虹膜基質內肉芽腫性結節可明顯存在。受影響眼中的眼內壓在開始時降低，原因是睫狀體的分泌張力減退。然而，隨著反應的持續，炎性副產物可在小梁中累積。如果這些碎片明顯累積，同時如果睫狀體恢復正常的分泌量，眼內壓可急劇增加，導致繼發性眼色素層炎青光眼。
醫師或獸醫通過眼科學檢查來診斷眼色素層炎。
血管炎血管炎是血管的炎症。炎症是進入組織的血細胞破壞組織的病症。這些血細胞大多數為白細胞，其循環並用作抵禦感染的主要防線。正常情況下，白細胞摧毀細菌和病毒。然而，如果它們侵入正常的組織也能產生破壞作用。血管炎可影響非常小的血管(毛細血管)、中等大小的血管(小動脈或小靜脈)或大血管(動脈和靜脈)。
血管炎可引起許多不同的症狀，這主要取決於受影響的組織及組織損傷的嚴重性。有些病人沒有發病，只是皮膚上偶爾出現斑點。其它人則非常嚴重，具有全身性症狀及主要器官損傷。症狀包括發熱、總體感覺差(「不適」)、肌肉及關節疼痛、食欲不振、體重減輕、疲勞、瘀點、紫癜、壞死皮膚區域可出現潰瘍(特別在踝關節周圍)、關節痛和伴有疼痛的frank關節炎、關節發熱與腫脹、頭痛、行為紊亂、精神錯亂、癲癇發作、中風、麻木及麻刺感。血管炎的診斷基於個人病史、主要症狀、全面的體格檢查和專業實驗室試驗的結果。存在血管炎時經常出現血液異常，包括血沉速率升高、貧血、高白細胞計數及血小板計數。驗血也可用於鑑別在循環系統中引起血管炎的免疫複合物或抗體，以及測定補體水平是否異常。
動脈粥樣硬化動脈粥樣硬化導致動脈內層中脂肪物質、膽固醇、細胞廢物及鈣的沉積物(即斑塊)積累，具有明顯的炎性成分。最終這種脂肪組織可侵蝕動脈壁，使其彈性(伸縮性)降低並妨礙血液流動。斑塊也可能破裂，導致碎片移動到動脈下遊。這是心臟病發作和中風的常見原因。斑塊沉積物周圍也可形成凝塊，進一步妨礙血流，如果它們脫落並移向心臟、肺或腦，則帶來更大的危險。
動脈粥樣硬化通常不表現出症狀，直到血管內血流嚴重受阻。動脈粥樣硬化的典型症狀包括涉及冠狀動脈時的胸痛或涉及腿動脈時的腿痛。有時症狀僅僅在運動時才會出現。然而，有些人休息時也會出現症狀。
危險因素包括吸菸、糖尿病、肥胖、高血膽固醇、高脂肪飲食以及有個人或家族心臟病史。腦血管病、外周血管病、高血壓和涉及透析的腎臟疾病都是與動脈粥樣硬化相關的疾病。
治療性給藥本發明包括給予對象(如人或馬)含有CD3調節劑(本發明稱為「治療性化合物」)的組合物。
治療性化合物的有效量優選為約0.1mg/kg至約150mg/kg。如本領域技術人員所公認的，有效劑量根據給藥途徑、賦形劑的使用以及與其它治療的共同給予而變化，所述治療包括使用治療、抑制或緩解具體炎性疾病症狀的其它抗炎劑或治療劑。通過用標準方法鑑別患有(或有風險患)炎性疾病或自身免疫疾病的哺乳動物(例如人患者或馬)，進行治療性給藥方案。
使用本領域已知的方法給予這種個體藥物組合物。優選口服、直腸、鼻、局部或胃腸外(如皮下、腹膜內、肌內和靜脈內)給予所述化合物。該化合物可預防性給藥，或者在檢查到炎性結果如哮喘發作或過敏反應後給予。該化合物任選配製為治療藥物混合物的成分，以治療炎性疾病。適合胃腸外給藥的製劑實例包括活性物質在等滲鹽溶液、5％葡萄糖溶液或另一種標準藥物可接受賦形劑中的水溶液。也可用標準增溶劑如PVP或環糊精作為藥物賦形劑來傳遞治療性化合物。
本文所述治療性化合物利用常規方法配製為用於其它給藥途徑的組合物。例如，治療性化合物抑制劑配製成膠囊或片劑用於口服給藥。膠囊可含有任何標準的藥物可接受材料，如凝膠或纖維素。片劑可根據常規方法，通過將治療性化合物與固體載體及潤滑劑的混合物壓制而成。固體載體的實例包括澱粉和糖、膨潤土。該化合物以硬殼片劑或膠囊形式給藥，其含有粘合劑如乳糖或甘露醇、常規填充劑和壓片劑。其它劑型包括軟膏劑、栓劑、糊劑、噴霧劑、貼劑、霜劑、凝膠劑、可吸收海綿或泡沫。可用本領域中的已知方法生產這種劑型。
治療性化合物與受影響組織直接接觸時生效。因此，局部給藥該化合物。例如，為治療接觸性皮炎，將化合物施用於受影響皮膚區域。或者，全身給予治療性化合物。除此之外，化合物可通過植入(直接植入到器官如腸或肝中或皮下植入)固體或可吸收基質給藥，所述固體或可吸收基質將該化合物緩慢釋放到對象的鄰近組織或周圍組織中。
例如，為治療胃腸炎性疾病，全身性給予化合物，或直接局部給藥到胃組織中。全身性給藥的化合物可通過靜脈內、直腸或口服給藥。對於局部給藥，可將浸有藥物的薄片(wafer)或可吸收海綿置於直接與胃組織接觸。化合物或化合物的混合物通過薄片上藥物的擴散和聚合體基質的侵蝕而在體內緩慢釋放。
例如通過向肝脈管系統輸注含有化合物的溶液，治療肝的炎症(即肝炎)。腹膜內輸注或灌洗用於減少彌散性腹膜內炎症或預防外科術後的炎症。
對於神經炎症的治療，可靜脈內或鞘內(即直接注入到腦脊液中)給予化合物。對於局部給藥，可將浸有藥物的薄片或可吸收海綿置於直接與中樞神經系統組織接觸。化合物或化合物的混合物通過薄片上藥物的擴散或基質聚合物的侵蝕而在體內緩慢釋放。或者，用已知方法將藥物注入腦中或腦脊液中。例如，放置用作注射口的帶有導管的鑽孔環，與顱骨相連在鑽入顱骨內的鑽孔處。通過插穿位於鑽孔環上方的隔膜的針或管心針，將液體貯藏器與導管相連。導管組件(如美國專利No.5,954,687描述的組件)能夠提供液體流動路徑，適合於將液體轉運至大腦上、附近或其中的所選位置或從其中轉運出，以允許在一定時間內給予藥物。
對於治療心臟炎症，例如通過穿透胸壁直接冠狀動脈內注射到心臟組織中，或用基於標準經皮導管的方法在螢光鏡指導下將抑制劑直接注入組織(如心肌)中或從插入體腔的支撐物(stent)或導管中輸注，從而傳遞化合物。可使用任何各種冠狀動脈導管或輸注導管來給藥。或者，將藥物塗抹或浸漬在置於冠狀動脈中的支撐物上。
肺炎症例如通過吸入法給予化合物來治療。化合物以氣溶膠噴霧的形式從裝有適當拋射劑(例如氣體如二氧化碳)的壓力容器或分配器或從噴霧器中傳遞。
眼炎症例如通過局部給予眼化合物來治療。藥物以例如凝膠、液體或軟膏的形式傳遞。軟膏、膠體或可滴液體可用本領域中已知的眼傳遞系統如塗藥器或滴眼器傳遞。或者，藥物從放置在眼結膜下的聚合物植入物中傳遞。任選化合物全身性傳遞。
通過對受影響部位有特異性的途徑治療血管炎。一般而言，血管炎通過靜脈內給予CD3調節劑來全身性治療。
CD3調節劑也可與一種或多種其它的治療性化合物聯合給予，所述其它的治療性化合物例如抗炎劑或免疫抑制劑。例如CD3調節劑與任何各種已知的免疫自身疾病和/或炎性疾病治療一起聯合給予。與本發明方法一起使用的自身免疫疾病和/或炎性疾病的合適已知治療包括但不限於氨甲喋呤、環孢黴素A(包括例如環孢黴素微乳液和他可莫司)、皮質類固醇、抑制素、β幹擾素、非甾體抗炎藥(NSAID)和改變病情的抗風溼藥物(DMARD)。其它的治療在給予CD3調節劑之前、之後或同時給予。
聯合給藥的有益作用包括但不限於來源於治療劑組合的藥動學或藥效學共同作用。這些治療劑的聯合給藥一般在規定的時間段(通常是數分鐘、數小時、數天或數周，根據所選的組合不同而定)之內進行。「聯合治療」的目的可能是(但一般不是)包括給予兩種或更多種這些治療劑作為獨立單治療方案的部分，偶然或任意地導致了本發明的聯合給藥。「聯合治療」目的在於包括按順序依次給予這些治療劑，即其中各治療劑在不同時間給藥，也包括以基本同時的方式給予這些治療劑或所述治療劑中的至少兩種。例如通過給予對象含有固定比例的各治療劑的單個膠囊或多個含有各治療劑的單膠囊，可完成基本同時給藥。
所述治療劑可通過相同或不同的途徑給藥。例如，聯合給藥所選的第一種治療劑可通過靜脈內注射給藥，而聯合給藥的其它治療劑可口服給藥。或者，所有的治療劑可口服給藥，或所有治療劑可通過靜脈內注射給藥。治療劑的給藥順序並不非常關鍵。「聯合治療」也可包括將上述治療劑的給藥再進一步與其它生物活性成份和非藥物治療(例如手術或放射治療)結合。當聯合治療進一步包括非藥物治療時，非藥物治療可在任何合適的時候實施，只要治療劑與非藥物治療的組合的共同作用得到有益效果。例如，在適當的情況下，當將非藥物治療暫時從治療劑的給藥中除去時，或許數天或甚至數周，仍能獲得有益效果。
為了評價患者是否從單獨或聯合給予抗CD3抗體中獲益，可用定量的方式檢查患者的症狀和/或免疫反應，並比較用抗體治療前後的症狀和/或免疫反應。例如，可通過測量用抗CD3抗體治療前後患者中的具體症狀或一系列症狀，測定患者的症狀。例如，可用本領域已知的任何標準測量技術來測量和監測症狀，如發熱、關節痛、肌無力。在成功治療中，患者狀態得到改善(即測量指標下降，或持續好轉時間增長)。
例如，在眼色素層炎治療中，抗CD3抗體可與例如皮質類固醇、氨甲喋呤、環孢黴素A、環磷醯胺和/或抑制素聯合給藥。同樣，患有疾病如節段性迴腸炎或牛皮癬的患者可用本發明的抗CD3抗體與Remicaid(英夫利昔單抗)和/或Humira(阿達木單抗)的組合來治療。
治療類風溼性關節炎時，抗CD3抗體可與皮質類甾醇、氨甲喋呤、環孢黴素A、抑制素、Remicaid(英夫利昔單抗)、Enbrel(依那西普)和/或Humira(阿達木單抗)一起共同給藥。
多發性硬化症患者可以接受抗CD3抗體與例如乙酸格拉默(Copaxone)、β幹擾素-1a(Avonex)、β幹擾素-1a(Rebif)、β幹擾素-1b(Betaseron或Betaferon)、米託蒽醌(Novantrone)、地塞米松(Decadron)、甲基潑尼松龍(Depo-Medrol)和/或潑尼松(Deltasone)和/或抑制素的聯合給藥。
I型糖尿病患者或成人隱性自身免疫糖尿病(LADA)患者也給予第二種藥物，如GLP-I或β-細胞休眠化合物(即減少或抑制胰島素釋放的化合物，如鉀通道開放劑)。
此外，預防性(即在自身免疫疾病和/或炎性疾病發作前)或治療性(即在自身免疫疾病和/或炎性疾病的期間)給予CD3調節劑。
本發明方法中，調節劑以治療有效量給藥。CD3調節劑的「治療有效量」是指達到治療目的所需的量，所述治療目的例如為治療自身免疫疾病和/或炎性疾病，或減輕與自身免疫疾病和/或炎性疾病相關的症狀。
本文引用的所有出版物和專利文件通過引用結合到本文中，如同每篇這種出版物或文件明確和單獨的標明為通過引用結合到本文中。出版物和專利文件的引用目的並不是承認任何其為有關的現有技術，也不構成對其內容或日期的任何承認。已通過書面描述的形式描述本發明，本領域的技術人員可理解，本發明可以以各種實施方案實施，前面的描述及下述的實施例是為了說明的目的，而不是限制後面的權利要求。
實施例實施例1抗CD3抗體用於治療眼色素層炎本發明抗CD3抗體包括各種識別CD3的單克隆抗體(mAb)，例如OKT3、SP34、UCHTI或64.1。(參見例如June，et al，J.Immunol.1363945-3952(1986)；Yang，et al，J.Immunol.1371097-1100(1986)；和Hayward，et al，Immunol.6487-92(1988))。
將純化的小鼠抗大鼠CD3單克隆抗體抗體(BD Pharmingen，稱為G4.18抗體)在可誘導眼色素層炎的大鼠模型中試驗，這種模型如Wildner G，Diedrichs-Mohring M，Thurau SR.，Eur.J.Immunol.32(1)299-306(2002)；和Wildner G，Diedrichs-Mohrmg M，Iht.Immunol.15(8)927-35(2003)中所述。該G4.18抗體與T細胞受體相關的CD3細胞表面抗原反應，該抗原發現於胸腺細胞、外周T淋巴細胞和樹突狀表皮T細胞中。(參見例如Nicolls M.R.，et al，Transplantation 55459-468(1993)；Nelson，D.J.，et al，J.Exp.Med.179203-212(1994)；Morris D.L.，and WJ.Komocsar.J.Pharmacol.Toxicol.Methods 3737-46(1997))。
為了評定抗CD3治療對眼色素層炎的效果，在大鼠中用腹膜內(i.p.)T細胞轉移方法來誘導實驗性自身免疫眼色素層炎(EAU)。具體地說，0天時，雌性Lewis大鼠(每隻重約140 g，n＝3隻大鼠/組)接受2.4×106個L37細胞的i.p.注射，該細胞用來源於視網膜自身抗原S-抗原(SAg)的PDSAg-2/3轉染。
在轉移轉基因T細胞以誘導EAU之前30分鐘及轉移1、2和3天後，大鼠接受300μl磷酸緩衝鹽水(PBS)溶液(組1)或300μlPBS中的G4.18抗體(組2)的i.p.注射。每天監測每組大鼠的臨床眼色素層炎指徵。本文所用的臨床分級標準僅考慮眼前部炎症，用眼底鏡來分級，例如如de Smet et al，J.Autoimmun.，vol.6587(1993)中所述。下表A中列出了本文所述實驗中使用的臨床分級標準表A臨床分級標準
*眼前房積膿＝白細胞在前房底部沉積，即白色澱。
第12天結束試驗，對每隻大鼠進行視網膜破壞的組織學評價。本文所述的組織學標準僅考慮視網膜的破壞，根據治療9天後的冷凍切片評價，例如如文獻de Smet et al.，J.Autoimmun.，vol.6587(1993))中所述。本文所述試驗中所用的組織學分級標準列於下表B中表B組織學分級標準
在本文所述實驗的第3天開始出現眼色素層炎的臨床症狀。圖1圖示了接受PBS的大鼠(即組1)和接受抗CD3抗體的大鼠(即組2)中眼色素層炎進展的臨床和組織學效果。本文給出的結果報告為該組的所有眼在整個觀察時間內最大分數的平均值。
實施例2抗CD3抗體用於治療動脈粥樣硬化抗CD3抗體在治療動脈粥樣硬化中的效果用倉鼠抗小鼠CD3抗體來評定。本文所述試驗設計為評價抗CD3治療對動脈粥樣硬化斑塊發生的效果，以及抗CD3治療對治療現有動脈粥樣硬化損傷的進展的效果。
產生倉鼠145 2C11單克隆抗體F(ab』)2片段的細胞株用於評價抗CD3治療的效果，該單克隆抗體能結合小鼠CD3ε(即鼠CD3複合體的ε鏈)。10周大的雄性LDLR-/-C57BL/6小鼠用作體內動脈粥樣硬化模型。對於組織學和動脈粥樣硬塊發生的分析，以及增殖和細胞因子分析，用高膽固醇飲食(1.25％膽固醇，0％膽酸鹽)餵食同胞小鼠，持續13或24周。在開始高膽固醇飲食前一周(n＝5)(即為了評價抗CD3抗體對動脈硬化斑塊發生的效果)或開始後13周(n＝9)(即為了評價抗CD3抗體對現有動脈粥樣硬化損傷的進展的效果)，連續5天靜脈內(i.v.)給予抗CD3 F(ab′)2(50μg/小鼠/天)。對照小鼠(對於13周飲食n＝5；對於24周飲食n＝6)平行注射PBS。
通過Sudan IV染色脂質沉積，分析胸腹主動脈和主動脈竇內的動脈粥樣硬化損傷(圖2和圖3)。從彼此相距50μm的六個切片(5μm)計算各主動脈根的脂質沉積的平均值。通過使用MetaMorph6軟體(Zeiss)的計算機影像分析來進行脂質沉積的定量。本文給出的結果表示為平均值±s.e.m。採用雙尾Student′s T-檢驗，在P＜0.05時認為數值間的差異有顯著性。
如圖2所示，抗CD3治療抑制小鼠中粥樣硬化斑塊的發生。另外，圖3證明，抗CD3治療也減少(即抑制)已有損傷中粥樣硬化斑塊發生的進一步發展。
其它實施方案雖然本發明已結合具體說明進行了描述，但上述描述目的在於說明，而不限制本發明的範圍，本發明的範圍由所附權利要求的範圍定義。其它方面、優點和修改都包括在下列權利要求的範圍內。
權利要求
1.一種治療或減輕炎性疾病的症狀的方法，所述方法包括鑑別已患有或有風險患所述炎性疾病的對象，和給予所述對象抗CD3抗體。
2.權利要求1的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以抑制炎性細胞因子的表達或增加抗炎細胞因子的表達。
3.權利要求1的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以誘導免疫抑制。
4.權利要求1的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以誘導免疫耐受。
5.權利要求1的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
6.權利要求5的方法，其中所述單克隆抗體是完全人單克隆抗體。
7.權利要求1的方法，其中所述炎性疾病是慢性炎性疾病或急性炎性疾病。
8.權利要求1的方法，其中所述炎性疾病是自身免疫疾病。
9.權利要求1的方法，其中所述炎性疾病是眼色素層炎、血管炎或動脈粥樣硬化。
10.權利要求1的方法，其中所述對象是人或者馬。
11.權利要求1的方法，所述方法進一步包括給予所述對象抗炎劑或免疫抑制劑。
12.權利要求11的方法，其中所述抗炎劑或免疫抑制劑是皮質類固醇、抑制素、β幹擾素、非甾體抗炎藥(NSAID)、氨甲喋呤、環孢黴素A或改變病情的抗風溼藥物(DMARD)。
13.權利要求12的方法，其中所述環孢黴素A是環孢黴素微乳液或他克莫司。
14.一種減少動脈上動脈粥樣硬化斑塊形成的方法，所述方法包括給予對象抗CD3抗體。
15.權利要求14的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以抑制所述動脈組織內炎性細胞因子的表達或增加其中抗炎細胞因子的表達。
16.權利要求15的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
17.權利要求16的方法，其中所述單克隆抗體是完全人單克隆抗體。
18.一種抑制組織炎症的方法，所述方法包括將發炎組織暴露於抗CD3抗體。
19.權利要求18的方法，其中給予的所述抗CD3抗體的量足以抑制所述發炎組織中炎性細胞因子的表達或增加其中抗炎細胞因子的表達。
20.權利要求18的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
21.權利要求20的方法，其中所述單克隆抗體是完全人單克隆抗體。
22.權利要求18的方法，其中所述組織是血管組織或眼組織。
全文摘要
本發明提供治療自身免疫疾病和/或炎性疾病的方法。
文檔編號A61P9/10GK1972714SQ200580018139
公開日2007年5月30日 申請日期2005年4月6日 優先權日2004年4月6日
發明者B·馬赫, Y·迪恩, M·科斯科-維爾布瓦 申請人:諾夫免疫股份有限公司