一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法

2023-12-08 20:42:41

專利名稱：一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法
技術領域：
本發明屬於藥物代謝物免疫原的製備領域，特別涉及一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法。
背景技術：
呋喃西林代謝物免疫原的製備通常要實施合成呋喃西林代謝物免疫原的過程，然而，在合成呋喃西林代謝物免疫原的過程中，現有的方法如重氮化法、活性脂法一般分兩個步驟進行偶聯合成，所花費的時間需要70小時左右，這樣，會使得合成呋喃西林代謝物免疫原的過程延長，造成生產效率降低，產品成本增加，同時，後續使用成本也隨著提高，另外，其偶聯比率一般僅在10-25左右。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，該方法不但能有效地製得呋喃西林代謝物的免疫原，而且操作簡單，生產效率高。本發明的一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，包括按摩爾比1 373 5216將牛血清白蛋白、鹽酸氨基脲與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽加入到磷酸鹽緩衝液中，在室溫下反應1-3個小時，接著將反應後的液體進行透析，然後在-18 _22°C中預冷凍1-3小時，最後在-45 _55°C下冷凍乾燥， 即得呋喃西林代謝物免疫原的固體粉末。所述的磷酸鹽緩衝液是pH為7. 6，含量為0. 01mol/L的磷酸鹽緩衝液。上述的磷酸鹽緩衝液的配製方法為將9. 6g的氯化鈉、3. 58g十二水磷酸鹽氫二鈉、0. 4g氯化鉀和0. 7g磷酸鹽二氫鉀加入950mL的蒸餾水，滴加氫氧化鈉調節pH值至7. 6， 再加入蒸餾水，配置成IOOOmL,濃度為0. 01mol/L的磷酸鹽緩衝液。所述的透析為將反應後的液體裝入透析袋中，再放入500mL蒸餾水中透析36小時，每12小時換液一次，最後收集透析袋內的液體。上述的透析袋是半周長為22mm，截留分子量為14000的透析袋。本發明利用了改進的碳二亞胺法，進行了呋喃西林代謝物免疫原的合成，免疫原是由鹽酸氨基脲和牛血清蛋白在室溫條件下，通過改進碳二亞胺法進行偶聯反應，用蒸餾水透析後，經過冷凍乾燥獲得的。實驗表明，該方法不僅成功地合成了呋喃西林代謝物免疫原，同時採用了新的偶聯方法，整個製備實驗一步完成，所需時間僅為40個小時，大大節約了製備呋喃西林代謝物免疫原的時間，並提高了生產效率，其效率可提高42%左右，且降低了生產成本，與此同時還採用了蒸餾水作為透析液，該方法也降低了生產成本。有益效果(1)本發明的製備方法操作簡單，一步完成，反應時間短，成本低，效率高；(2)本發明製備的免疫原的偶聯比率在25-35之間，為提高檢測呋喃西林代謝物殘留的酶聯免疫檢測方法的準確度和靈敏度提供了可靠的保障，並且還有利於普及推廣應用。
具體實施例方式下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限定的範圍。實施例1配置磷酸鹽緩衝液稱取9. 6g的氯化鈉、3. 58g十二水磷酸鹽氫二鈉、0. 4g氯化鉀、0. 7g磷酸鹽二氫鉀加入950mL的蒸餾水，滴加氫氧化鈉調節pH(酸鹼度)至7. 6，再加入50mL的蒸餾水，配置成IOOOmL,濃度為0. 01mol/L的磷酸鹽緩衝液。實施例2製備呋喃西林代謝物的免疫原a)在15mL的離心管中依次加入牛血清白蛋白32mg(0.48u mol)、鹽酸氨基脲 20mg(179u mol)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽480mg (2503. 8u mol)，再加入8mL的實施例1製得的磷酸鹽緩衝液(pH為7. 6，含量為0. Olmol/L)，在室溫下反應2 小時；b)將反應好的液體裝入透析袋(半周長22nm，截留分子量14000)內，再放入裝有 500mL蒸餾水的燒杯中，透析36小時，每12小時換蒸餾水一次；c)將透析好的液體，在_20°C中預冷凍2個小時，然後在_50°C下冷凍乾燥，製成免疫原固體粉末。實施例3呋喃西林代謝物免疫原的使用及其效果採用實施例2製得的免疫原免疫小鼠，免疫劑量為0. 3mg/次，免疫四次後進行眼眶取血，利用間接ELISA法，測得小鼠血清效價可達105，遠高於其他抗原免疫小鼠獲得血清效價，為後續的單克隆抗體的製備奠定了基礎。
權利要求
1.一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，包括按摩爾比1 373 5216將牛血清白蛋白、鹽酸氨基脲與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽加入到磷酸鹽緩衝液中，在室溫下反應1-3個小時，接著將反應後的液體進行透析，然後在-18 -22°C中預冷凍1-3小時，最後在-45 _55°C下冷凍乾燥，即得呋喃西林代謝物免疫原。
2.根據權利要求1所述的一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，其特徵在於所述的磷酸鹽緩衝液的PH值為7. 6，濃度為0. 01mol/Lo
3.根據權利要求2所述的一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，其特徵在於所述的磷酸鹽緩衝液的配製方法為將9. 6g的氯化鈉、3. 58g十二水磷酸鹽氫二鈉、0. 4g氯化鉀和0. 7g磷酸鹽二氫鉀加入950mL的蒸餾水，滴加氫氧化鈉調節pH值至7. 6，再加入蒸餾水， 配置成IOOOmL,濃度為0. 01mol/L的磷酸鹽緩衝液。
4.根據權利要求1所述的一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，其特徵在於所述的透析為將反應後的液體裝入透析袋中，再放入500mL蒸餾水中透析36小時，每12小時換液一次，最後收集透析袋內的液體。
5.根據權利要求4所述的一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，其特徵在於所述的透析袋是半周長為22mm，截留分子量為14000的透析袋。
全文摘要
本發明涉及一種呋喃西林代謝物免疫原的製備方法，包括將牛血清白蛋白、鹽酸氨基脲與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽加入到磷酸鹽緩衝液中，在室溫下反應1-3個小時，接著將反應後的液體進行透析，然後在-18～-22℃中預冷凍1-3小時，最後在-45～-55℃下冷凍乾燥，即得呋喃西林代謝物免疫原。本發明使製備過程簡化，製備呋喃西林代謝物免疫原的時間縮短，生產效率提高了42％左右，並且也降低了生產成本；免疫原的偶聯比率在25-35之間，為提高檢測呋喃西林代謝物殘留的酶聯免疫檢測方法的準確度和靈敏度提供了可靠的保障，應用前景廣闊。
文檔編號C07K1/113GK102329390SQ201110300628
公開日2012年1月25日 申請日期2011年9月28日 優先權日2011年9月28日
發明者馮兵, 徐捷, 蔡友瓊, 錢蓓蕾, 黃冬梅, 黃宣運 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所